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◈ Objetivo: detección de Estafilococos Aureus en amígdalas y en la nariz.

◈ Características de los medios.

➞BP: Es un medio para el recuento de Estafilococos, sobre todo coagulasa +. El cloruro de
litio y el Telurito inhiben la flora acompañante. El Telurito también es el responsable de la coloración
negra de las colonias que lo reducen. La glicina y el piruvato sódico estimulan el crecimiento de los
estafilococos. La adición de sulfametazina inhibe el crecimiento de Proteus.
➞BHI: Caldo de cerebro corazón es un medio nutritivo para el cultivo de muchos
microorganismos, tanto anaerobios facultativos como aerobios. Tiene muchos compuestos
nutritivos que favorecen el crecimiento de los microorganismos. Este medio permite hacer la prueba
de la coagulasa para los estafilococos.
➞DNAsa: Es un medio de cultivo para la detección de enzimas desoxirribonucleasas. Muy útil
para la diferenciación entre especies de estafilococos. La tripteína es su fuente de nitrógeno,
aminoácidos y aporta nutrientes. ES ADN se encuentra en un grado muy polimerizado, y es el
sustrato de la DNAsa, la cual lo hidroliza. El Cloruro de Sodio mantiene el balance osmótico y el agar
es el agente gelificante.

◈ Preparación de los medios.

➞BP: PNT-ME-019
- Pesar 18,9 gramos del medio deshidratado (M9) en la balanza.
- Disolver en agua destilada.
- Llevar a ebullición en el agitador magnético (M49).
- Esterilizar en el autoclave 15 minutos a 121º.
- Atemperar en el baño maría a 45-48º.
- Añadir 15 ml de la solución de yema de huevo con telurito

◈ Material.
- Hisopos
- Placas de BP
- Portaobjetos
- Asas de siembra
- Agua oxigenada de 10 volúmenes
- Agua estéril
- Ácido clorhídrico 1N
- Tubos de BHI
- Placa de DNAsa
◈ Procedimiento.
◈ DÍA 1. TOMA DE MUESTRAS. 17/01/17
- Con un hisopo estéril, mojado en agua estéril, coger una muestra de las amígdalas y
sembrarla en una placa de BP.
- Con otros hisopos, también mojados, tomar muestras de las dos fosas nasales. Dividir una
placa de BP en dos y sembrar cada una en una mitad.
- Incubar a 37º durante 24 horas.

◈ DÍA 2. LECTURA Y PRUEBAS DE CONFIRMACIÓN. 19/01/17

- En la placa con muestra de la nariz aparecen muchas colonias, pero ninguna de S. Aureus.
- En las placas de las muestras de las amígdalas solo aparece una colonia.
- A continuación, hacemos las pruebas de confirmación:

▪ Catalasa (colonias muestra nariz y amígdalas)

- En un porta, poner la colonia con un asa de siembra, y añadir sobre ella agua oxigenada de
10 volúmenes (M24)
- Si aparecen burbujas es catalasa +, si no sería -.
- Resultados:
- Nariz: catalasa +
- Amígdalas (muestra 1): catalasa +
- Amígdalas (muestra 2): catalasa +

▪ Coagulasa (colonias nariz)

- Coger con un asa de siembra una colonia y ponerla sobre la pared del tubo de BHI.
- Agitar suavemente.
- Incubar 24h a 37 grados.

▪ Agar DNAsa (colonias nariz)

- Hacer una división en una placa de DNAsa con un asa de siembra.
- En uno de los lados de la división, hacer una siembra por picadura de la muestra.
- Incubar a 37º durante 24 horas.

◈ DÍA 3. LECTURA. 20/01/17

▪ Coagulasa (colonias nariz)

- Resultado: incidencia. No realizamos bien la prueba.

▪ Agar DNAsa (colonias nariz)

- Pasadas las 24 horas, sacar de la estufa y añadir una capa abundante de ácido clorhídrico 1N.
- Dejar reposar unos minutos.
- Resultado: positivo, ya que hay un halo claro, transparente alrededor del crecimiento
bacteriano.

◈ Medidas de seguridad.
Trabajar en una superficie cubierta con papel de mesa o de filtro, y con un mechero para estar en
condiciones asépticas.
Ponerse la bata, guantes y tener el pelo recogido.