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Instrumental Licenciatura en
Bioquímica
Evaluación
1. Reportes 40%
Se deben entregar al inicio del próximo laboratorio.
Los atrasos en la entrega implica descuentos de 1 punto por día de
atraso.
La no entrega de algo de los informes es causa de reprobación del
curso.
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Análisis Instrumental
Licenciatura en Bioquímica
II
III
IV
Calendario de Actividades
Introducción 25/03/13
1 Abril I II III IV V
8 Abril V I II III IV
15 Abril IV V I II III
22 Abril III IV V I II
29 Abril II III IV V I
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II
III
IV
Calendario de Actividades
Introducción 26/03/13
2 Abril I II III IV V
9 Abril V I II III IV
16 Abril IV V I II III
23 Abril III IV V I II
30 Abril II III IV V I
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Análisis Instrumental
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LABORATORIO Nº 1
POTENCIOMETRIA ACIDO-BASE
INTRODUCCIÓN
VALORACIONES POTENCIOMÉTRICAS
De esta forma, el valor del potencial medido por el electrodo indicador varía
a lo largo de la valoración, traduciéndose el punto de equivalencia por la aparición
de un punto singular en la curva: potencial en función de la cantidad de reactivo
añadido. La detección de este punto, punto final, puede establecerse de distintas
formas:
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Método Directo
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Método de Gran
Acido –Base
Precipitación
Formación de Complejos
Oxido – Reducción
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Estaríamos leyendo aH+ = 1.01*10-11 molL-1 frente al real de aH+ = 10-11 molL-
1. Para cometer errores de un 10% para valores de pH = 11, tendríamos que tener
una aNa+ = 10 mol L-1.
Existen electrodos de pH que tienen una composición en la
membrana para que el error alcalino lo tengamos que tener en cuenta pero a
valores más altos, a partir de pH de 13. La membrana de estos electrodos se le
designa como Membrana del Tipo U, frente a la Membrana de Tipo T cuyo error
alcalino empieza a pH de 11.
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𝐸1 − 𝐸2 𝐸1 −𝐸2
𝑆𝑋 = = (1.8)
𝑝𝐻1 −𝑝𝐻2 𝑝𝐻1 ´−𝑝𝐻2
𝑝𝐻1 −𝑝𝐻2
𝑆= (1.9)
𝑝𝐻1 ´−𝑝𝐻2
Al reemplazar
2.5−4.0
𝑆= = 0.882 (1.10)
2.3−4.0
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Análisis Instrumental
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Los equipos que se ajustan con 2 buffer son más exactos. En éstos se ajusta
la pendiente y luego se hace coincidir exactamente con la respuesta del
instrumento. La pendiente del electrodo se ve afectada por la temperatura de
trabajo y por el factor de sensibilidad (S) ó respuesta del electrodo. A medida que
un electrodo tiene mayor uso, su respuesta va disminuyendo, su pendiente es
menor.
Control de Temperatura
𝐸 = 𝑘 − 𝑝𝐻 (1.11)
Control de Sensibilidad
𝐸 = 𝑘 − 𝑆 𝑝𝐻 (1. 12)
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normalmente se lo expresa en tanto por uno (es menor que uno). De aquí la
necesidad de un nuevo ajuste de pendiente en la recta de respuesta del
instrumento hasta hacerla coincidir perfectamente con la recta de respuesta del
electrodo en cuestión. Esta variación en la inclinación se logra mediante el control
de sensibilidad.
Sucede que el giro de la recta de respuesta del instrumento que se logra con
el control de sensibilidad (también se logra con el control de temperatura) se
produce en torno al punto pHiso del instrumento. De aquí que si el primer buffer
utilizado tiene un pH diferente al pHiso del instrumento, al accionar el control de
sensibilidad, se perderá la calibración del primer punto. Para superar esta dificultad
es necesario conocer el punto pHiso del instrumento. Este es precisamente aquel
valor de pH de la escala, ajustado mediante el control de estandarización, en que la
acción de los dos controles:
Control de estandarización
Control de sensibilidad
son independientes entre sí; en el instrumento
utilizado pHiso es 7.00.
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OBJETIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
I. Calibración de pH
1.- Calibre el medidor de pH con soluciones buffer estándares (pH 4 y pH 7). Siga
cuidadosamente las instrucciones señaladas en el manual.
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TRATAMIENTO DE DATOS
3.- Calcule las concentraciones Molares de HCl y del H3PO4 en la mezcla y H3PO4
en la bebida valorada que contienen las muestras valoradas, además calcule la
masa de H3PO4 en la bebida.
CUESTIONARIO
1.- Indique que características debe cumplir un electrodo para ser utilizados como
electrodo indicador.
5. Explique por que las Bebidas Cola deben desgasarse antes de titular.
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LABORATORIO Nº 2
CONDUCTOMETRIA:
VALORACIÓN DE UNA MEZCLA DE ACIDO FUERTE Y DEBIL
INTRODUCCIÓN
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Análisis Instrumental
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Titulaciones Ácido-Base
La Figura 2.2 muestra la titulación de un ácido fuerte HCl con una base
débil, NH4OH. La primera rama del gráfico refleja la desaparición de los iones
hidrógeno durante la neutralización pero luego del punto final, el gráfico se vuelve
casi horizontal, dado que el exceso de amoníaco no se ioniza en presencia de NH3.
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Análisis Instrumental
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Las Figuras 2.3 y 2.4 son típicas de la titulación de una mezcla de dos
ácidos que difieren en el grado de disociación. La titulación conductimétrica de
tales mezclas es frecuentemente más precisa que con un método potenciométrico.
En la Figura 2.3 se muestra la titulación empleando NaOH, mientras que en la
Figura 2.4, es utilizado NH4OH.
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OBJETIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
5.- Retire la celda y lave los electrodos. Valore una nueva alícuota con incrementos
de 0.1 mL de valorante.
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TRATAMIENTO DE DATOS
V v
V (2.1)
CUESTIONARIO
3.- ¿Por qué razón es necesario realizar la corrección por efectos de dilución?
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LABORATORIO Nº 3
ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
APLICACIÓN DE LA LEY DE BEER
INTRODUCCIÓN
A= k b C (3.1)
Donde:
A = absorbancia
C = concentración del analito
b = el paso óptico
k = la constante de proporcionalidad.
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OBJETIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Espectro de Absorción
1.- A partir de una solución estándar y mediante dilución apropiada prepare una
solución de Co (II) 0.075 M y una solución de Ni (II) 0.100 M en matraces
volumétricos de 50 mL.
Curva de calibración
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LABORATORIO Nº4
Características de la Técnica
Sin embargo, no fue sino hasta finales de los años sesenta cuando se
desarrolló la tecnología adecuada para producir y utilizar rellenos de tamaño de
partícula del orden de los 3 o 10 μm. Esta tecnología requiere una instrumentación
sofisticada, que contrasta con las simples columnas de vidrio de la cromatografía
de líquidos clásica. Para distinguir estos procedimientos más nuevos de los
métodos básicos, que todavía se utilizan con fines preparativos, se emplea la
denominación de cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).
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Detectores
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OBJETIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.-De un estándar de 1000 mg/L de cafeína, utilizando agua grado HPLC como
disolvente prepare un sets de 5 soluciones con concentraciones entre 10 y 500
mg/L.
3.- Prepare una taza de te (Anotar marca comercial) en 100 mL de agua grado
HPLC , filtre el té mediante un micro filtro de 0,45 m. Para la muestra de té
prepare una solución diluida 2 veces.
4.- Seleccione las condiciones del equipo; fase móvil CH3CN/Agua 15:85; flujo 1,0
ml/min.; detector UV a 270 nm, columna Lichrosfer RP-100 C18. Justifique y
explique la elección de éstas condiciones.
CUESTIONARIO
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LABORATORIO Nº 5
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contrario, los vinos tintos, ricos en taninos, dejan un poso azulado o ennegrecido:
"quiebra negra". Una concentración total de hierro del orden de los 10 mg/litro
indica riesgo de quiebras férricas, si bien, este valor límite varía mucho en función
de la composición del vino.
OBJETIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.- A partir de la solución estándar de 1000 ppm prepare una solución de 100 ppm
de Fe.
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TRATAMIENTO DE DATOS
Cx A
x 1
C x C st Ast x
Donde
Cx : concentración de la muestra problema
Cst: concentración del estándar
Ax : Absorbancia de la muestra problema
CUESTIONARIO
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