Informe 10 de laboratorio
DETERMINACION DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN AYRAMPO
DETERMINATION OF ANTIOXIDANT ACTIVITY IN AYRAMPO
Espinoza Gutiérrez, Williams Alfredo*
Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica. Laboratorio de Química Analítica Instrumental.
1. RESUMEN
El airampo es una planta originaria del
genero opuntia y esta tiene propiedad como
antioxidante, en el presente artículo se
demostrara la capacidad que este fruto tiene
a partir de una prueba frente al 2,2-difenil-
1-picrilhidrazil (DPPH) y mediante sus
absorbancias de la muestras de semillas y
pulpa hallar el % inhibición de cada una
para determinar su capacidad antioxidante.
2. INTRODUCCIÓN
Un antioxidante es una sustancia capaz de
neutralizar la acción oxidante de los
radicales libres mediante la liberación de
electrones en nuestra sangre, los que son
captados por aquellos. El problema para la
salud se produce cuando nuestro organismo
tiene que soportar un exceso de estos
radicales libres durante años, producidos
mayormente por contaminantes externos ya
sean ambientales, farmacológicos y
nutricionales. (1)
Estos antioxidantes son compuestos que
luchan con los radicales libres y ha sido
demostrado que inhiben la oxidación del
ADN, lo cual produce algunos cánceres.
Los antioxidantes en general son sustancias
que pueden inhibir o retardar el proceso
oxidativo, interfiriendo con la iniciación o
propagación de las reacciones en cadena de
la auto-oxidación. (2)
Existe muchos métodos para medir la
capacidad antioxidante de una de las
especies del género Opuntia sobre la cual
realizaremos nuestra investigación, la
Opuntia apurimacensis, la cual posee frutos
Lima-Perú diciembre, 2019
de color guinda oscuro debido a la
presencia de betalaínas y fenoles totales, sin
embargo, un método muy usado consiste en
la estabilidad del radical nitrogenado
orgánico 2,2-difenil-1-picrilhidrazil
(DPPH) caracterizado por la cesión de un
átomo de hidrógeno proporcionado por el
agente antioxidante(3), la cual se atribuye a
la deslocalización del electrón desapareado,
esta deslocalización también le otorga una
coloración violeta caracterizada por una
banda de absorción, en solución
metanólica, centrada alrededor de 525 nm.
Cuando una disolución de DPPH entra en
contacto con una sustancia que puede donar
un átomo de hidrógeno o con otra especie
radical (R.) se produce la forma reducida
DPPH-H o DPPH-R susceptible de
reaccionar con compuestos antioxidantes a
través de un proceso con la consecuente
pérdida del color y por lo tanto la pérdida
de la absorbancia, lo cual nos permite
calcular la capacidad antioxidante del
fruto.(4) En tal sentido, podemos
considerar que el valor, IC50 es
dependiente de la concentración de DPPH,
así como, de la naturaleza del compuesto
antioxidante.(5)
3. OBJETIVO GENERAL
 Determinar la capacidad antioxidante
in vitro del zumo de fruto maduro de
Opuntia apurimacensis (Ayrampo)
frente al 2,2-difenil 1-picrilhidrazil
(DPPH).
 4. MATERIALES Y MÉTODOS
D. Preparación del Reactivo: Solución
 Ayrampo fresco (Opuntia 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH*)
apurimacensis)
Preparar una solución de DPPH* con
 Papel aluminio metanol a una concentración de DPPH
 Solución 2,2-difenil 1- 0.1 mM (0.03943 mg/ml) llevado a una
picrilhidrazil DPPH fiola de 25 mL (0.985575 mg).
 Etanol 96°
 Tubos de ensayo E. Determinación de los porcentajes de
captura del radical DPPH*:
 Espectrofotómetro UV-
Visible Preparar una solución stock de DPPH 0.1
 Micropipeta mM, protegido de la luz. A partir de este
 Fiola de 25 mL stock se separa soluciones de DPPH de
2.7 mL y se hace reaccionar con 300 uL
 Agua destilada
de solución muestra. La reacción se
 Mortero y pilón realiza en oscuro durante 30 min.
 Envase de vidrio color ámbar Registrar las absorbancias del DPPH
. tanto antes y después de la mezcla con
las soluciones muestras en un
5. RESULTADOS espectrofotómetro a 515 nm.

Nota: Las betalaínas poseen una curva

5.1 Procedimiento experimental espectral similar al del DPPH, para
evitar interferencias en las medidas de
A. Preparación de la muestra: absorbancias, se recomienda la
Trabajar con frutas sanas y frescas de preparación de soluciones de ayrampo
ayrampo (Opuntia apurimacensis) diluidas.
previamente lavadas con agua destilada,
para proceder a pelar y separar la pulpa y El porcentaje de inhibición del radical
las semillas.
DPPH se calcula con la siguiente
B. Dilución del etanol 96° a etanol 80°
El etanol de 96° se diluye a 80° en agua ecuación:
destilada usando la siguiente fórmula:
% Inhibición DPPH= [(Ao –Am)/Ao]x100
𝑪𝒂𝒍𝒄𝒐𝒉𝒐𝒍 × 𝑽𝒓𝒆𝒒𝒖𝒆𝒓𝒊𝒅𝒐 = 𝑪𝒂𝒍𝒄𝒐𝒉𝒐𝒍 × 𝑽𝒅𝒆𝒔𝒆𝒂𝒅𝒐
𝟗𝟔° × 𝑽𝒓𝒆𝒒𝒖𝒆𝒓𝒊𝒅𝒐 = 𝟖𝟎° × 𝟏𝟎𝟎𝒎𝑳 Donde:
𝑽𝒓𝒆𝒒𝒖𝒆𝒓𝒊𝒅𝒐 = 𝟖𝟑. 𝟑𝟑𝒎𝑳 Ac: Absorbancia de los controles.
Am: Absorbancia de la muestra en
Se añade 83.33mL de etanol 96° a una función del tiempo (6 minutos).
fiola de 100 mL y se enrasa con agua Se promedian los resultados y se
destilada.
expresan en % de inhibición, DPPH que
C. Preparación de los extractos: reacciono con los antioxidantes totales.
Preparar una muestra de extracto 5.2 Absorbancias
macerado, pesar 10 gramos de pulpa y 10
gramos de semillas de muestra fresca de
Ao= 0.393
Ayrampo, agregar 80mL de una solución
hidroalcoholica (etanol de 80°) para la
extracción de los compuestos bioactivos Absorbancias : (Am)
(antioxidantes) y triturar con ayuda de un m. semillas m. pulpa
mortero y pilón. Guardar la muestra 0.05 0.067
durante tres semanas en un envase de 0.06 0.077
color ámbar 0.041 0.076
-Formula:
% Inhibición DPPH= [(Ao –Am)/Ao]x100
5.3 % Inhibición
-Promedios de m. semillas y m. pulpa
1. % Inhibición (Semillas)
% = [(0.393 – 0.0503)/0.393]x100= 87,
277%
2. % Inhibición (Pulpa)
% = [(0.393 – 0.073)/0.393]x100= 81, 42%
6. CONCLUSIONES
-Se pudo determinar la capacidad anti
oxidante tanto como el de la semilla como
de la pulpa del fruto de airampo, con unos
porcentajes de inhibición de 87, 277% y 81,
42% respectivamente.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Emanuel C, Varón M. BIBLIOTECA DE
FARMACIA Y BIOQUÍMICA. : 36.
2. Munguía DAR. DETERMINACIÓN DE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y
MICROENCAPSULACIÓN DE
COMPUESTOS ACTIVOS DE OPUNTIA
FICUS- INDICA. 2014;(16):18.
3. Vwdqgdugv H, Ehhq K, Lq X, Udqjh DF,
Dqg RI. Evaluación de la técnica 2,2-
Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH) para
determinar capacidad antioxidante. Horiz
Med (Barcelona). 2015; 15(1):57–60
4. Muñoz Juárez M. A., Gutiérrez D. M.
DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE DE DIVERSAS PARTES
DEL ÁRBOL Nicotiana Glauca. Facultad
de Química, Universidad Autónoma de
Querétaro. [Internet] Disponible en:
https://www.uaq.mx/investigacion/difusion/
veranos/memorias-2008/7VeranoUAQ/14
MunozJuarez.pdf
5. Rodríguez OAWDF. Actividad
antioxidante de extractos de hojas de
Bocconia frutescens L. (Papaveraceae)
Antioxidant activity of extracts from leaves
of Bocconia. J Technol. 2015; 14 (2):21–
36.