INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

PRÁCTICA No. 7
“EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO Y INHIBICION
ENZIMATICA”

Ortiz Sánchez Marcos Jhoan, Jiménez Galván José Angel Sección 4 Gpo: 3FM1

RESULTADOS

INTRODUCCIÓN
Una enzima funciona de manera más eficiente cuando
la concentración de sustrato esta en exceso en relación
con la concentración de la enzima. Se denomina sustrato
a la molécula sobre la que actúa la enzima. El sustrato
se une al centro activo de la enzima, formando el
complejo enzima-sustrato. En este complejo el sustrato
se transforma en el producto, momento en el cual se
libera de la enzima. Existen muchos mecanismos para
explicar la catálisis enzimática, aquí consideraremos el
más sencillo, el mecanismo de Michaelis Menten. Otra
forma es con la expresión matemática de Lineweaver-
Burk.
Uno de los factores clave que afecta la velocidad de una
reacción catalizada por una enzima es la concentración
del sustrato presente, sin embargo el estudio o de los
efectos de la concentración del sustrato se convierte en
producto.
La inhibición enzimática puede producirse cuando un
compuesto compite con el sustrato por el lugar activo de
la enzima libre. Las moléculas que reducen la actividad Sustrato
de una enzima denominada inhibidores, existen 2 tipos T Abs (nm) µM AR Vo 1/S 1/vo
de inhibidores enzimáticas irreversibles y reversibles: (UI)

1 0.151 1.5928 0.1592 0.6278 6.2814

Reversibles: inhibidores competitivos. Se unen de
forma reversible a la enzima libre y no al complejo ES, 2 0.731 5.4389 0.5438 0.1839 1.389
para formar un complejo enzima -inhibidor 3 1.348 9.5305 0.9530 0.1049 1.049
(EI).inhibidores acompetitivos, se une al complejo
4 0.477 3.7546 0.3954 0.2663 2.6638
enzima-sustrato(ES) y no al enzima libre Inhibidores no
competitivos , puede unirse tanto a la enzima como al 5 0.786 5.8037 0.5813 0.1723 1.7732
complejo (ES)Irreversible: se unen covalentemente a la 6 1.468 10.326 1.032 0.0968 0.9684
enzima con secuencia a una cadena lateral del lugar
2
activo.

OBJETIVOS Inhibidor
● Analizar el efecto de la concentración del T Abs (nm) µM AR Vo 1/S 1/v0
sustrato sobre la velocidad de la reacción (UI)
enzimática
● Determinar la constante Km en forma gráfica 1 0.411 3.3169 0.33 0.3014 3.0156

utilizando los métodos de Michaelis-Menten y 2 0.374 3.0716 0.30 0.3255 3.2562

Lineweaver-Burk 3 01.734 5.4588 0.54 0.1831 1.8321

● Determinar el tipo de inhibición producido por 4 0.199 1.911 0.19 0.5232 5.2328
una sustancia (anilina) sobre la actividad de la
5 1.108 7.9389 0.79 0.1259 1.2597
invertasa.
6 1.085 7.7864 0.77 0.1284 1.2843
DISCUSIÓN
La anilina como inhibidor de la invertasa, según la
bibliografía consultada es un inhibidor de tipo no
competitivo, en la gráfica de Lineweaver-Burk que se
realizó de acuerdo a lo experimentado, no demostró ser
del tipo no competitivo, tiene más bien un
comportamiento de inhibidor acompetitivo, esto
muestra un error, y éste pudo haber sido en las
mediciones erróneas de reactivos, tiempos mal
ejecutados en la incubación o preincubación, o incluso
que cualquiera de los reactivos haya sido contaminado,
o con las concentraciones erróneas, por otro lado otro
factor a tomar en cuenta seria que el testigo utilizado
pudo haber influido en los resultados obtenidos.
En esta práctica experimentamos el comportamiento del
efecto de concentración de sustrato frente a la velocidad
de reacción de la invertasa.
En una cinética enzimática donde se aumenta la
concentración de sustrato sin inhibición, la velocidad de
catálisis es proporcional a la concentración de sustrato,
esto sólo sucede cuando la concentración es baja por lo
que sería una reacción de primer orden y en el momento
donde la concentración de sustrato aumenta a muy altas
concentraciones, éste deja de ser proporcional por lo
que ya será una reacción de orden mixto. En el momento
en donde la concentración de sustrato está
suficientemente elevada para saturar los sitios activos
de la enzima, la velocidad de catálisis se mantiene
constante, esta es una reacción de orden cero.
CONCLUSIÓN
Se logró analizar el efecto de la concentración del
sustrato sobre la velocidad de la reacción.

La anilina es un inhibidor del tipo no

competitivo(consultado en la bibliografia) donde el
inhibidor y el sustrato se unen a diferentes sitios de la
enzima, y se intersectan en el mismo valor de las abcisas
en la gráfica de Lineweaver-Burk , teniendo el mismo
Km, pero el valor de Vmáx es menor.

Se determinó que el tipo de inhibidor que se utilizó en

este caso fue la anilina a diferencia de velocidad con
inhibidor y sin inhibidor a diferentes concentraciones de
AR.

REFERENCIAS

 Lehininger L. (2009). Principios de

Bioquimica, 5 ed., Editorial Omega, pp 198
 Mckee, T , Mckee, J.R (2003). Enzimas en
bioquímica. Las bases moleculares de la vida
(173-175) 3ra edición España Mc Graw-Hill