Huayllu-Bios. Nº 7.

Diciembre 2013

Micropropagación de Saintpaulia ionantha H.

Wendel var. Bangle Blue.

Terenti, C. M.; P. Verdes

P R O I C O 503 0 7 L a b o r at o r io d e G e n ét ic a y B i o t ecn o l o g ía V e g e t al .
F.I.C.E.S., UNSL . Dir ección : 25 d e May o 3 8 4. 5 73 0 . V i l l a M er c ed e s (San
Lu is). Ar gentin a. p everdes@fices.unsl.edu . ar

Recibido: 5 de diciembre de 2011

Aceptado: 7 de noviembre de 2012

Abstract
S ai ntp a ul i a i o na n th a H. Wendel va r. Blue Ba ngle
(Gesneriáceae fami ly), is w i d es p r ea d in o r n a m en ta l
p la nts w o rl dw id e a nd has pa rt ic ula r c harac t e ri st ics
t ha t g iv e i t s p eci a l a p p ea l . M ic ro p r opag a t i on w a s
p e r f o rm e d t o t e st t h e s p ec ies of l ea f t iss ue r e s po ns e
in the ind uc t i on of in vi t ro a d ven ti tio us o rgans
d i r ec tly . Lea f t is su e e x pl an ts c ul ti va ted in basa l
c ul t u r e m ed i a (M u ra sh i g e a n d S k oo g, 1 9 6 2 ) w it h a
c ombina ti on of grow th regu lat o rs . Thi s respo ns e w as
q ua nt i fi e d a t d if f e r en t st a ge s o f m ic r o p ro pa ga ti on a nd
e v a l uat e d t h e s u r vi va l rat e a t t h e s ta g e o f pl a n tl ets
a c c li ma ti za t i on. F i r st s i n gs o f m o r p ho gen es is w er e
s how n 3 3 d a y s a f t e r c ult i va te d. I t a c hi e v e d hi g h ra tes

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o f mul ti p l ic a ti on t h ro ugh mo r ph og e n es is s tim ul a t e d by

t r ea t me nt w it h 6 - benzy la m in opu r i ne (1 mg/ l ), g i v in g a
m ul t ip l ic a t io n a ve r a ge o f 4 8 1 v i t ro p l a n ts /e x pl a nt in
three cy cl es of mul tipl ica tion . Wit h resp ec t t o th e sa lt
c onc e nt ra tio n a n d bala nc e o f pla nt g r owt h r e g u lat o rs
has hi g he r n ut r i ent r e q ui r em e nt s, dem on st ra t in g
s i gn i fi c a n t d i f f e rence s in c on c e nt r a t io n c om pl e t e
m e d iu m. D u r in g the a c c l ima t i za ti on per i o d, th e
s u bst ra t e, o r ga n ic s o il, p ea t , p e r l i t e (3: 1 : 1 / 2 ) w a s
more effective with 83. 21% of survival . All s ta ges of
m ic r o p ro pa ga ti on w er e c om p l e ted o v e r a p e r i od o f 1 2
mo nt hs. It is co ncl uded tha t th e a p pl icat ion o f t h is
bi ot ec hn olo gy is a n appro p ria t e meth o dol ogy f o r la rge
sc al e mu lt ip l icat i on o f th is s pecies.

Key wo rds: S ai ntp au li a io na nt h a H. Wendel va r.

Ba ngle Blue; M ic ropro pa ga tion; Regeneration.

Resumen
S ai ntp a ul i a i o n a nt h a H. Wendel va r. Ba ngle Blue,
p e r t en ec i en t e a la f am i li a G es ne r i ác ea e, es u na pl anta
o rna men tal mu y di fu ndi da en todo el mu ndo y pos ee
ca ra cterística s pa rtic ula r es qu e le c on f i e ren un
a t rac t i vo es p ec ia l . S e r e a l i z ó l a m ic r o p ro pa gac i ón d e
l a es p ec i e p a ra e n s a y a r l a r e s p u es t a d e t e j i do f o l ia r
en la in ducc ió n d e ó rgan os ad vent ic io s in vi tro en
f o r ma d i r ec ta . Pa r a ta l fi n, s e s e m b ra ro n s e g m en tos
d e t e j id o fo l ia r en med i o s d e c u l t i vo ba s a l (M u ra s h ig e
y Skoog, 1962 ) con una c o mbinac ión de regul adores
d e c rec i mien to p rees ta bl ec id a. S e cua nti f ic ó d ic ha
r e s pu es ta en las di sti n tas eta pa s de
m ic r o p ro pa gac i ón y se eval uó la ta sa de
s u per v i ve n c i a e n l a e t a pa d e a c l i ma t i zac i ó n d e l a s

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v i t ro p lan ta s . A lo s 33 d ía s des d e la si e m b ra se
e m p e zó a o bs e r va r l os pri m e r os in d ic io s de
m o r fo g én es is . Se l o g ra ron a lt a s t a sa s de
m ul t ip l ic a c i ó n en el t r a t a m i ent o qu e c o n 6 - b enci l
A m i n o P u rin a (1 m g/ l ) , o bt en i énd o s e u n p ro m e di o d e
mul t iplic ación de 481 vit roplantas /explanto en t res
c ic l o s d e rep i qu e s . C o n r es p ect o a l a c o n c en t ra c ió n
s al ina y ba lanc e de regul ado res de c rec imi ent o ti en e
mayor r eq u e r im i en to de n utri e nt e s, dem os t ran do
d i f erenc ia s s i gni f icat ivas en med i os d e c on cent raci ón
c om pl e ta. D u ran t e la eta pa de acl im at i zac ió n, el
s us t rat o: t ie r r a o r gá ni c a , t u r ba , p e rl i ta (3: 1 : 1 /2 ), fue
mas efectivo con un 83, 21% de supervivencia. Se
c um pl i e ro n t o das las e ta pa s d e m ic r o p ro pa gac i ón d e
esta especie en un periodo de 12 meses. Se concluye
que la apl icac i ón de e st a b io t écn ica res ult a u na
m e to d olo g ía a p ro pi ada p a ra la m ul t ip lic aci ó n a g ran
escala de esta es pecie.

P a la br a s c la v e : S ai n tp a ul i a i o n a n th a H . W e nd el v ar .
Ba n gl e Bl ue; M ic rop ro pa ga ci ón; O rgan o gén esi s.

Introducción
La mayoría de las especies del Género Saintpaulia, son
originarias del este de África Tropical, son las plantas de interior más
difundidas en todo el mundo y poseen características particulares
que le confieren un atractivo especial (Rubio y Hernández, 2005). Se
caracterizan por poseer una buena capacidad de regeneración
mediante su cultivo in vitro (Boelke, 1986; Dimitri y Orfila, 1985).

La propagación de un genotipo a gran escala a través del

empleo de técnicas de cultivo de tejidos, es una herramienta muy
útil, tiene el potencial de producir plantas de calidad uniforme a

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escala comercial, a partir de un genotipo selecto y con una tasa de

multiplicación ilimitada (Echenique et al, 2004).

En el Género Saintpaulia, se mencionó la formación de

tallos a partir del cultivo in vitro de pecíolos y hojas (Bilkey y
Mc.Cown, 1978; Cooke, 1977; Del Pino et al., 1993; Espinosa et al,
2007; Hakozaki y Onho, 1997; Hurtado y Merino, 1994; Ioannou,
1987; Mohamed et al, 1989; Start y Cumming, 1976) en la
aclimatación de las vitroplantas, se mencionado el uso de diferentes
sustratos (Alvarado y Glorimar, 2001; Figueroa, 2006; Vidalie, 2001).

Con el objetivo de determinar la tasa de multiplicación in

vitro que permita precisar la factibilidad de su producción en escala
comercial, en el presente trabajo se ensaya y cuantifica la respuesta
de tejido foliar para la inducción de órganos adventicios in vitro en
forma indirecta y evaluar la tasa de supervivencia en la etapa de
aclimatación de las vitroplantas.

Material y Métodos
Los explantos cultivados de S. ionantha H. Wendel var.
Bangle Blue fueron secciones de pecíolos (50 mm) y cortes de
láminas foliares (10 X 10 mm). La desinfección de los explantos se
realizó según los tratamientos detallados en la Tabla 2.

Se analizaron las tasas de multiplicación y supervivencia en

medio nutritivo de Murashige y Skoog (1962): sales diluidas a un
cuarto, un medio y concentración completa, con la adición de agar (6
gr/l) y reguladores del crecimiento (Tabla 2).

Los explantos se incubaron en la cámara de cultivo a 24 ±

2 ºC con 16 horas de fotoperiodo (116 μmol/m 2 s). Semanalmente se
evaluaron los siguientes parámetros: tasa de contaminación,
formación de callos, número de brotes y raíces formados in vitro,
tasa de multiplicación y la tasa de supervivencia de las vitroplantas

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en el invernáculo. Se usó el método de aclimatación gradual,

inicialmente con cubierta plástica total y posterior remoción parcial
de la misma cada siete días. La aclimatación de las vitroplantas se
realizó según los tratamientos detallados en la Tabla 3. El diseño
utilizado fue completamente aleatorizado con tres repeticiones. Las
observaciones realizadas se analizaron estadísticamente, según
correspondía mediante: ANOVA, Test de diferencias mínimas
significativas (LSD) y Contraste de Kruscal Walis (Sokal y F. Rohlf,
1995).

Tiempo (minutos)
Tratamientos
Alcohol 70 Hipoclorito de sodio (20%)

A 30 10

B 1 20

C 45 15

D 1,5 15

E 2 20

F 3 21

G 3 22

H 5 10

I 5 10

T a bl a 1 . T ra t a m i en t o s d e d es in f ecc ió n evaluados en la etapa de

e s t a b l eci mi e nt o i n vi t ro de Sai n tpa ul ia io na nt h a H. Wendel va r. Bangle
Blue.

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Tratamientos Reguladores de Crecimiento

T1 ----

T2 ANA (0,1 mg/l)

T3 BAP (1 mg/l)

T4 ANA (0,1 mg/l) BAP (1 mg/l)

T a bl a 2 . Co m b ina c i ón d e reg ul a do r e s de c r ec im i en to eva l u a da e n l a

m ic r o p ro pa gac i ón d e Sai n tpaul i a i o n an t ha H . Wendel va r. Bangle Bl ue.

Sustratos Reguladores de Crecimiento

Tierra orgánica, Turba, Perlita

N°1
(3:1:1/2)

Tierra orgánica, Vermiculita

N°2
(4:1)

T a bl a 3 . Combinac ión de su st rat os eva luados en la acl i mat ación de

S ai ntp a ul i a i o n a n th a H . Wendel va r. Bangle Bl ue.

Resultados y Discusión

Establecimiento:

En los explantos de láminas foliares y pecíolos de S.

ionantha H. Wendel var. Bangle Blue se observó contaminación por
hongos de los géneros Penicillium y Aspergillus. En la Figura 1 y
Grafico 1 se detallan los datos obtenidos en los tratamientos de
desinfección, destacándose el tratamiento D con el menor porcentaje
de contaminación (38,59 %) y necrosis de los explantos sembrados.

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Brotación y Multiplicación:

A los 33 días desde la siembra se empezaron a observar los

primeros indicios de morfogénesis (Figura 2), esta observación se
evaluó estadísticamente mediante un Contraste de Kruscal-Wallis
para días según tratamiento determinó diferencias altamente
significativas entre los tratamientos (p-valor = 0,018), indicadas en el
Grafico 2. Se pueden establecer las siguientes diferenciaciones entre
los tratamientos con reguladores de crecimiento: en el T1C (sales de
Murashige y Skoog completas) se observó la formación de callos;
mientras que en el T4 ½ (sales de Murashige y Skoog diluidas al
cincuenta por ciento), se observó la formación de raíces y los brotes
neoformados.

En la etapa de multiplicación se lograron altas tasas de

multiplicación mediante el T3 ½ (BAP, 1 ml /l), con 481 plantas por
explante (Figuras 3 y Gráfico 3). Espinoza et al. (2007) también evaluó
el comportamiento de la especie respecto de los dos reguladores de
crecimiento ANA y BAP, obteniendo tasas de multiplicación similares a
las obtenidas en el presente trabajo. En cambio, Mohamed et al
(1989), encontraron que a partir de explantos de pecíolos las mejores
concentraciones de hormonas fueron 0,25 mg.l - 1 de ANA y 1 mg.l - 1 de
BAP; mientras que cuando el explanto eran hojas las mejores
concentraciones fueron 0,1 mg.l - 1 de ANA y 0,5 mg.l - 1 de BAP. Por su
parte, Hakozaki et al. (1997) estudio el efecto de la concentración de
AIA e IBA en la inducción de tallos y raíces en callos de Saintpaulia
ionantha cv. Susie, usando como explantos tejido foliar. En pocos días
se logró la formación de callos y raíces adventicias, en aquellos
medios que contenían bajas concentraciones (0,5 mg.l - 1 ) de las
hormonas mencionadas. Solamente se formaron tallos con el
agregado de IBA a 0,5 o 2,5 mg/l.

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Enraizamiento y Aclimatación:

Se determinó el porcentaje de plantas in vitro aclimatadas

Figuras 4 y Gráfico 4, siendo los sustratos más efectivos el Nº 1
(composición: tierra orgánica, turba, perlita; 3:1:1/2), que presentó
un 83,21 % de vitroplantas aclimatadas. Vidale H. (2001) y Heredia C.
y Yelitza M (2003) mencionan una alta tasa de aclimatación en
sustratos porosos, poco compactados y con pH ácido, características
éstas concordantes con el sustrato N° 1. Figueroa Cuevas (2006)
realizo una pre-aclimatación, etapa no evaluada en el presente
trabajo pero con tasas de viabilidad similares; se debe considerar
que los resultados citados corresponden a la misma especie pero
distinta variedad. Desde siembra a aclimatación de plantas obtenidas
in vitro se cumplieron en un periodo de 12 meses.

100

90

80
% Contaminación

70

60

50

40

30

20

10

Tratamientos

A B C D E F G H I

Gráfico 1. S. ionantha H. Wendel var. Bangle Blue: comparación de

los porcentajes de contaminación con las distintas metodologías de
desinfección.

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18

16

Número de plantas/explanto
14

12

10

T1 T2 T3 T4
Tratamientos

C 1/2 1/4

G rá f ico 2 . S . i o n an t ha H. W endel va r. Ba ngle Bl u e: o rga no gén es is in vitro

observa da a los 33 día s de cult ivo. R e f e ren cia s: C=MS co m pl et o. ½ = MS
diluido al 50 %. ¼= MS dil u ído al 25%

500

450
Número de plantas/explanto

400

350

300

250

200

150

100

50

T1 T2 T3 T4
Tratamientos

C 1/2 1/4

G rá f ico 3 . S . i o n an t ha H . W e nd e . l v a r. B a n gl e B l u e: c om p a ra c ión d e l
n ú me r o d e pl ant as obt e ni da s en l a eta pa d e mu lt i pl icac ió n. R ef e renc ia s:
C =MS co mp l et o. ½ = MS d il u id o a l 50 %. ¼= MS d il uid o al 2 5%.

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90
% plantas aclimatadas 80

70

60

50

40

30

20

10

0
Tratamientos

N°1 N°2

G rá f ico 4 . S . i o n an t ha H. Wendel va r. Ba ngle Bl ue: porc enta je de pla nta s

ac lima tadas en dos tipos de s ust rat os.

F i gur a 1 . S . i o na n th a H . Wendel va r. Bangle Bl ue: expl ant os fol iares

c ult i va do s i n vi t ro.

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Fo to 2 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: o rg a no g é nesi s in vi tro a

l os 33 dí as d e c ul ti v o.

Fo to 3 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: mu l t ip l i c a c ió n i n v i t ro.

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 Terenti, C. M.; P. Verdes : Micropropagación de Saintpaulia ionantha H. Wendel var. Bangle Blue.

Fo to 4 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: pla nta a c l ima ta da.

Conclusiones
Se cumplieron todas las etapas de micropropagación de
esta especie en un periodo de 12 meses. Se concluye que la
aplicación de esta biotécnica resulta una metodología apropiada
para la multiplicación a gran escala de esta especie.

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 Huayllu-Bios. Nº 7. Diciembre 2013

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