UNIVERSIDAD CATÓLICA SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO

-FACULTAD DE MEDICINA-
Escuela de Medicina Humana
ESTUDIO DE MUTACIONES: DETECCIÓN Y APLICACIÓN DEL
POLIMORFISMO D543N DEL GEN NRAMP1

Alumna:
Calderón Vilcabana Nadia del Pilar

Curso:
Genética Médica

Ciclo:
V

Semestre:
2019 – I
 INTRODUCCIÓN
Una mutación génica es una alteración permanente de la secuencia de ADN de la que se compone un
gen. El tamaño de las mutaciones varía, lo que afecta desde a un solo componente básico (par de
bases) del ADN hasta a un gran segmento de un cromosoma con varios genes. Las mutaciones génicas
se pueden clasificar de dos formas:

1. Las mutaciones de estirpe germinal se heredan de un progenitor y están presentes durante

toda la vida de una persona en cada célula del organismo. Estas mutaciones se encuentran en
los óvulos o espermatozoides de los progenitores y se transmiten como mutaciones
hereditarias.

2. Las mutaciones somáticas se producen en un momento dado durante la vida de una persona
solo en determinadas células y no en todas las células del organismo. Estos cambios se pueden
deber a factores ambientales, como la radiación ultravioleta del sol, o se pueden producir en
caso de error al copiarse el ADN durante la división celular. Las mutaciones adquiridas no se
pueden transmitir a la siguiente generación.

En el caso del ADN humano, las secuencias que contienen a

los genes son poco variables dentro de la especie; no
obstante, el resto de la secuencia es muy propenso a la
variabilidad y, debido a que hay millones de pares de bases
por molécula de ADN y un alto porcentaje de ésta no codifica
para una proteína, cada persona tiene una secuencia de ADN
única, lo que permite identificarlo tan sólo por el orden de
sus pares de bases. Estas secuencias variables se denominan
polimorfismos.

Existen dos tipos de polimorfismos genéticos: los que

muestran cambio de un solo nucleótido por sustitución de bases y los que implican cambios en el
tamaño de la secuencia; esto puede deberse a inserciones o deleciones de secuencias de ADN, o bien
a la repetición de bases (o combinación de bases) de manera continua en un segmento del ADN. El
polimorfismo afecta a regiones codificantes del genoma (polimorfismo génico), que pueden tener, o
no, un efecto sobre el fenotipo. Los polimorfismos génicos, sin efecto fenotípico, son los más comunes
y son los responsables de la diversidad genética normal entre individuos.

Pero cuando un polimorfismo génico (afecta a una región del ADN codificante) da como resultado una
alteración fenotípica, puede modificar las características bioquímicas, fisiológicas e incluso
morfológicas de la célula, pudiendo originar procesos patológicos.

Se considera que hay un polimorfismo genético cuando

existen múltiples alelos de un gen en una población definida
o, de manera más específica, cuando la secuencia de bases
nitrogenadas de la molécula de ADN de un locus en
particular es variable entre los organismos de una población.
Los polimorfismos se acumulan en las poblaciones hasta que
se tornan comunes entre las especies; entonces se
denominan divergencia genética. Así, con el paso del
tiempo, un polimorfismo podría llegar a presentarse en un
alto porcentaje de una población e incluso ser tan común
como un alelo silvestre. Por tanto, un alelo que originalmente pudo considerarse polimórfico puede
llegar a ser el alelo más común en una población.

Esta variabilidad es un proceso biológico común, ya que 30% de la secuencia de ADN es altamente
repetitivo, lo que permite establecer patrones genéticos específicos para identificar individuos, es
decir, para establecer una huella genética o huella de ADN (ADN fingerprinting). Por ello, los científicos
han desarrollado estrategias para poder identificar individuos al analizar patrones repetitivos de ADN,
los cuales no son un sello exacto, pero sí permiten relacionar muestras de un mismo origen o de
personas emparentadas (familiares, ancestros comunes). Estas secuencias se eligieron porque se
conoce que varían entre individuos no relacionados, de tal manera que el análisis de un grupo de ellas
para encontrar concordancias permite inferir asociaciones con probabilidades altas de que tener un
mismo origen o ser de la misma persona.

RESULTADOS:

Comentario: El gen NRAMP1 es sumamente importante

en etapas tempranas y principalmente en la primera fase
de respuesta del huésped contra Mycobacterium
tuberculosis; por lo tanto, una mutación o deleción del
gen es propiciatoria de permisividad para la infección. Sin
embargo, no es el único gen involucrado.

ADN
Genómico

244 pb
201 pb
126 pb
79 pb

FUNDAMENTACIÓN:
Skaemene describió bases genéticas de resistencia a tuberculosis en el brazo largo del cromosoma 2,3
y 5 humano habiendo descrito previamente su homólogo en el Cromosoma 1 del ratón, y lo denominó
gen de resistencia bcg (NRAMP 1), que se expresa en macrófagos. Crowle y Elkins4, In Vitro,
demostraron que los macrófagos provenientes de gente de raza blanca permitieron una lenta
replicación de Mycobacterium tuberculosis en su interior, mientras que macrófagos provenientes de
individuos de raza negra y aborígenes canadienses mostraron una alta replicación del bacilo y un
patrón de expresión de HLADR de resistencia a tuberculosis en 70% de macrófagos provenientes de
raza blanca y 30% de raza negra y nativo canadienses. Bajo estas premisas, se considera que la
resistencia a enfermedades infecciosas se fundamenta en fenómenos biológicos implícitos en una
selección natural que favorece la sobrevida de individuos genéticamente seleccionados. De manera
biológicamente significativa, se aprecia resistencia vinculada con evidencias prehistóricas examinadas
por medio estudios de biología molecular de prevalencia de tuberculosis en lugares de alta población
de Europa occidental y Norte de África y ausencia en poblaciones del África Shariana y culturas nativas
de Latinoamérica donde se refleja la prevalencia actual que es de 95% en relación con 5% en Europa
Occidental, lo cual indica, un fenómeno biológicamente evolutivo que condiciona una selección
natural.

El gen NRAMP1 está localizada en la región cromosómica 2q35 y consiste de 15 exones y un tamaño
de 13 kb. Un total de 11 polimorfismos han sido identificados y verificados en el gen NRAMP1.

NRAMP 1 es expresado exclusivamente en macrófagos; se encuentra localizado y es reclutado a su

membrana fagosoma-lisosomal, y permanece en esa localización. NRAMP 1 funciona como un
transportador de cationes pH dependiente; indispensables estos cationes divalentes son
indispensables para la función bactericida del macrófago y su función como cofactor enzimático
inducción de la explosión oxidativa, y en la reacción de Fenton que contribuye a la defensa en contra
de infecciones.

El gen NRAMP 1 desempeña un importante papel en la vía de activación temprana del macrófago,
como la regulación funcional de receptores CXC, a quimiocinas, a interleucina 1 beta. Es un
potencializador de la transcripción de óxido nítrico sintetasa y cataliza los mecanismos de
procesamiento y presentación e inducción de antígenos; por lo tanto, en macrófagos activa el complejo
mayor de histocompatibilidad y estimula la liberación de óxido nítrico y la conducción hacia el estallido
oxidativo; por lo tanto se involucra como microbicida y tumoricida. Los macrófagos portadores en su
interior del bacilo tuberculoso y que a su vez muestran mutación geonómica en NRAMP 1, pierden la
habilidad biológica para procesar los antígenos del micobacterium. Esto da como resultado una
disfuncionalidad probable en la actividad de los linfocitos CD4 hacia la línea Th1 y una inclinación
subsecuente hacia un perfil Th2, lo que propicia una cascada de interleucinas características de este
tipo de linfocitos (NRAMP 1 mutado).

La estabilidad del RNA mensajero expresado en los macrófagos correspondientes al gen Nramp1, es
inducible a través de la vía del Interferón gamma, secretado por los linfocitos Th1, que propicia la
inhibición en la concentración de hierro en el interior del citoplasma de los macrófagos portadores del
locus BCG resistente (C) a Mycobacterium tuberculosis. Estos cambios en la concentración de hierro
tienen un gran significado en los macrófagos portadores de RNA mensajero (RNAm) estable y son poco
eficientes en los que presentan RNAm inestable de Nramp mutado (T) Asp. Esta dinámica sugiere que
el hierro es transportado del citoplasma hacia el interior de los fagosomas, y con la competencia de
Zinc se cataliza la unión con lisosomas, lo que propicia la formación de fagolisosomas y la liberación
consiguiente de radicales inestables de tipo hidroxilo. A su vez Nramp1 es capaz de transportar Mn,
que tiene la virtud de activar las metaloproteinasas que destruyen las metaloproteínas constitutivas
del germen.

El polimorfismo D543N es identificado por PCR-RFLP en pacientes con tuberculosis pulmonar y en

personas sin tuberculosis. Es un factor cuya expresión permite el desarrollo de TBC en pacientes
homocigotos recesivos. Genotipificación por RFLP del polimorfismo D543N del gen NRAMP1 son:
individuos homocigotos G/G (sanos) están representados por los fragmentos de 126 pb y 79 pb, el
individuo G/A (portador) es denominado heterocigoto representado por los fragmentos de 201 pb,
126 pb y 79 pb, los individuos homocigotos A/A (“enfermo”) están representados por el único
fragmento de 201 pb.