UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIAS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA Nº 14

TRANSPORTE DE CARGAS EN SISTEMAS BIOLOGICOS

OBJETIVOS:
1- Obtener un extracto de succinato deshidrogenada a partir de tejido hepático.
2- Identificar cualitativamente la actividad del succinato deshidrogenada mediante el uso de un
aceptor electrónico.
3- Observar el efecto inhibitorio del malonato sobre la actividad de la enzima succinato
deshidrogenada.

TEORIA RELACIONADA.

Las células de la gran mayorías de los organismos vivos llevan a cabo un conjunto de reacciones de
oxido reducción mediante la cual la gran cantidad de energía liberada a través de la degradación de
moléculas orgánicas es almacenada en moléculas de alto nivel energético (ATP). La succinato
deshidrogenada una enzima clasificada dentro del grupo de las oxidorreductasas cataliza una reacción
muy importante en el metabolismo oxidativo de la célula: la conversión del succinato en fumarato.

La succinato deshidrogenada remueve 2H+ y 2 electrones del succinato para formar fumarato y la
coenzima reducida (FADH2). La enzima está sujeta a una poderosa inhibición competitiva por parte de
reactivos como el malonato lo cual constituye una manera de inhibir la actividad de la enzima a nivel
de laboratorio. Para estudiar el transporte de cargas en la reacción se empleara un aceptor artificial de
electrones (azul de metileno), cuya decoloración permite diferenciar la actividad enzimática en los
ensayos a realizar en la presente práctica.

MATERIALES Y REACTIVOS.

Vasos de precipitado de 25y 400 ml Tubos de centrifuga

Mortero con maso Buffer fosfato 0.1M pH 7.4
Termómetro Succinato de sodio 0.1M
Pipetas de 5 ml (2) Malonato de sodio 0.1M
Pipeta de 1 ml (1) Azul de metileno 0.1%
Gradilla para tubos de ensayo Aceite vegetal (traer)
Tubos de ensayo (3) Hígado y Hielo (traer de la casa)
PROCEDIMIENTO.

1- OBTENCION DEL EXTRACTO ENZIMÀTICO

Tomar una muestra de aproximadamente 5g de hígado hepático libre de sangre y colocarlos en un

mortero con arena lavada, macere cuidadosamente hasta formar una mezcla suave adicionando poco a
poco tres porciones (cada una de 5ml) de buffer fosfato0.1M Y pH 7.4. Transfiera la mezcla a un vaso
de 25ml y manténgalo en un baño con hielo durante 15 min, mezclando ocasionalmente. Pase la
mezcla a tubos de centrifuga y centrifugue a 1600 rpm durante 10 min. Transfiera el sobrenadante a un
vaso de 25 ml y márquelo como extracto enzimático, manténgalo en baño de hielo hasta su posterior
uso.

2- SEGUIMIENTO DE LA REACCIÒN.

Preparar una serie de 3 tubos de ensayo debidamente rotulados, adicionar a cada tubo (1,2 y 3) 0.5ml
de azul de metileno al 0.1%, luego a los tubos 2 y 3 agregar 1 ml de succinato de sodio 0.1M y solo al
tubo 3 agréguele 1ml de malonato de sodio 0.1M. Dejar los tubos en incubación a 37ºC durante 10 min.
(Manteniendo la temperatura constante). Sin retirarlos del baño, agregar 1.5 ml de extracto enzimático
a cada uno de los tubos (1,2y 3), agite bien adicione 2ml de aceite vegetal a cada uno de los tubos.

Al cabo de 40 min observe el color de cada tubo, tenga en cuenta que el tubo 1 es el control.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS.

1- Escriba la reacción mediante la cual el succinato se transforma en fumarato.

2- Qué papel desempeña el aceite vegetal en el experimento.
3- Qué efecto tendría un exceso de succinato sobre la reacción.
4- Que sustancias pueden inhibir la conversión de succinato en fumarato, en adición al malonato.
5- En que rutas metabólicas está involucrado el succinato.

BIBLIOGRAFÍA:

PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. México. MacGraw- Hill Latinoamericana, S.A.

CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

LÓPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de Ciencias. Universidad
Nacional sede Bogotá.