Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Naturales

Escuela de Biología
Bioquímica

Titulo:

Cromatografía en papel de aminoácidos

Integrantes
Alaña Kevin
Amaiquema Andrea
Alcivar Damar
Álvarez Fabrizzio
Cortez Alice

Fecha:
08 de octubre del 2019

Ciclo II
2019
 UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
CARRERA DE BIOLOGIA
BIOQUÍMICA PRACTICA

INTRODUCCION
La cromatografía se engloba dentro de las llamadas técnicas de separación y permite el análisis de
mezclas complejas de compuestos muy estrechamente relacionados químicamente. Son varias las
modalidades usadas y se clasifican según la fase móvil (de gases, líquida) y por el tipo de soporte
(columna, capa fina, papel) usados. La separación se lleva a cabo según la distinta interacción que
presenta cada uno de los componentes de una muestra respecto a dos fases: una estacionaria y otra
móvil que fluye sobre ella. Esta interacción puede ser de varios tipos que a su vez dan lugar a distintas
subclases de cromatografía: de absorción, de reparto, de cambio iónico, de afinidad, etc. (Peinado &
Meléndez, 2008).

ETAPAS DE LA CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Siembra
Se aplican muestras en solución a no menos de 1,5 cm del borde inferior de una tira rectangular de
papel, y a no menos de 1,5 cm de los bordes laterales, manteniendo a su vez, entre mancha y mancha
una distancia no menor de 1 cm. Se hace un toque, se evapora el solvente, se hace otro toque, tratando
de concentrar la muestra sin superar un diámetro de la mancha de 3 mm. La siembra es puntual para
fines analíticos, y en banda para fines preparativos.

Desarrollo
Ascendente: el solvente se coloca en el fondo de la cuba y el papel se suspende colocado en la parte
superior de la cuba. Descendente: el solvente se coloca en un depósito inerte ubicado en la parte
superior de la cuba cromatográfica. En el fondo de la cuba se coloca también un poco de solvente
para asegurar la saturación con el vapor. La parte superior del papel se sumerge en el disolvente y se
tapa herméticamente la cuba (al igual que en la técnica ascendente). La siembra quedará en la parte
superior del papel. Bidimensional: se corre el papel en una dirección y luego del desarrollo y secado
se gira 90° y se corre con otro solvente.

Revelado

Si los compuestos de la mezcla son coloreados, las manchas son visibles directamente. De lo
contrario habrá que revelarlas.
Luz UV: si los compuestos absorben esta radiación las manchas se verán con fluorescencia. Reactivos
de color: especiales para cada compuesto. Se deberá tener en cuenta que no se pueden usar reveladores
que destruyan el papel como el ácido sulfúrico o el calor. Vapores de yodo sublimado: es un revelador
universal.

Evaluación:

Se efectúa el cálculo del Rf para cada componente de la mezcla por separado, que es característico
de cada compuesto en condiciones constantes: soporte, temperatura, solventes, altura de desarrollo.

Distancia recorrida por el compuesto desde el origen o punto de siembra

Rf = Distancia recorrida por el solvente desde el origen o punto de siembra

El Rf toma valores entre 0 y 1 y puede ser usado para la identificación de los componentes de una
muestra, siempre y cuando se trate de sistemas cromatográficos idénticos.

OBJETIVO GENERAL:

Determinar el factor de retención del aminoácido “Cisteína” y el zumo de naranja usando la

naturalidad de estos (polaridad) frente a una fase móvil (Ninhidrina).

MATERIALES
 Cisteína C3H7NO2S
 Jugo de naranja
 Papel filtro
 Vaso precipitado de 50 ml
 2 tubos de capilaridad
 Estufa

PROCEDIMIENTO
. Se recortó un trozo de papel cromatógrafo en forma rectangular.
-Se dibujó una línea en el trozo de papel cromatógrafo y se trazó dos puntos sobre la línea.
-Se inoculo con un tubo capilar, tres gotitas de cisteína en el primer punto y en el segundo
punto se inoculo tres gotas de zumo de naranja.
-Se colocó el papel cromatógrafo previamente inoculado al recipiente con la fase móvil
(𝑛 𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑎𝑐é𝑡𝑖𝑐𝑜 𝑎𝑔𝑢𝑎), se tomó en cuenta que el lado de la línea se haya puesto
en la parte inferior teniendo contacto directo con la fase móvil.
- Se esperó un tiempo estimado de 20 min para que por capilaridad la fase móvil suba por el
papel cromatógrafo.
- Se secó el papel y se roció con ninhidrina.
-Se llevó el papel cromatógrafo previamente rociado con ninhidrina a la estufa y se dejó un
momento sin dejar que se queme.
-Se marcaron las manchas observadas correspondientes a los aminoácidos.

RESULTADOS:

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜

Dada la Fórmula de Retención (Rf) se determinó que el
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑙

factor de retención para estos compuestos es:

Para la cisteína:

1.9 𝑐𝑚 (𝐶𝑖𝑠𝑡𝑒í𝑛𝑎)
𝑅𝑓 = = 0.54 𝑅𝑓 𝑠𝑖𝑒𝑛𝑑𝑜 𝑢𝑛𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒
3.5 𝑐𝑚 (𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙)

Para el Zumo de Naranja:

2.9 𝑐𝑚 (𝑍𝑢𝑚𝑜 𝑑𝑒 𝑛𝑎𝑟𝑎𝑛𝑗𝑎)

𝑅𝑓 = = 0.83 𝑅𝑓 𝑠𝑖𝑒𝑛𝑑𝑜 𝑢𝑛𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒
3.5 𝑐𝑚 (𝑏𝑢𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙)

CONCLUSIONES

Mediante el uso de la cromatografía se logró identificar los aminoácidos presentes en las

muestras teniendo como blanco la disolución de butanol. Haciendo uso de las propiedades
de los compuestos se pudo medir el factor de retención, debido a la capilaridad presente. Y
con la sustancia de ninhidrina para visualizar las bandas de separación, revelándolos en color
violáceo.

Figura 1.- Materiales a utilizar en la respectiva práctica

Figura 2.- Se procedió al corte de 6*6 en el papel filtro, para la prueba de capilaridad

Figura 3.- El blanco a utilizar es Cisteína (C3H7NO2S)

Figuras 4,5 y 6.- Se procedió a realizar tres pruebas, en cada una de ellas con sus respectivos
reactivos.

Figura 7.- En un vaso de precipitación, añadimos aproximadamente 10 ml del blanco (Cisteína) y

colocamos el papel filtro.

Referencias bibliográficas

Peinado, J., & Meléndez, T. (2008). Cromatografía en papel de aminoácidos. Argentina:

Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales,.
Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL (2003) Estructura y función de las proteínas. En: “Bioquímica”, 5ª
ed. Editorial Reverté (Barcelona, España), pp. 41-76. Muestra las características de los
aminoácidos: estructura, variación de su carga con el pH, etc.