UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ MARÍA

ARGUEDAS

MÉTODO DIRECTO DE DETERMINACIÓN DE

MICROORGANISMOS MESÓFILOS AEROBIOS VIABLES

CURSO: MICROBIOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

PROFESOR(A): BULEJE CAMPOS DIANET

ALUMNO(S):

 DIAZ FUENTES JESUS MANUEL

2019

TALAVERA-SANTA ROSA
INTRODUCCIÓN:

Este informe trata sobre el conteo de colonias de bacterias, llamadas también

“unidades formadoras de colonias”, trabajamos con el agar cuenta bacterias o sus
siglas en inglés, PCA (Plate Count Agar), este agar nos ayudará a realizar el conteo,
y el conteo lo realizaremos gracias a un equipo de laboratorio “Cuenta colonias”,
obtuvimos nuestros resultados y observamos la diferencia de unidades formadoras
de colonias que se existen en diferentes diluciones de la muestra problema, para la
muestra problema usamos pescado y lo diluimos en agua pectinada hasta tener una
dilución de 10-6, luego dividimos en dos partes y trabajamos con dos placas para
tener un resultado más certero.

OBJETIVOS:

 Determinar el número de microorganismos presentes en muestras de

alimento mediante la técnica de recuento en placa.
 Interpretar de acuerdo a las normas vigentes de alimentos los resultados
obtenidos del alimento analizado.
MARCO TEÓRICO:

El análisis de los alimentos y piensos para determinar la existencia, tipo y número

de microorganismos es básico para la microbiología de alimentos. Sin embargo
ninguno de los métodos utilizados habitualmente permite determinar el número
exacto de microorganismos que existe en un determinado alimento. Son cuatro los
métodos básicos utilizados para investigar el número “total” de microorganismos.

1. Recuento en placa para la determinación del número de células viables.

2. Método del número más probable (NMP) de gérmenes como cálculo
estadístico del número de células viables.
3. Técnicas de reducción de colorantes para el cálculo del número de células
viables con capacidad reductora.
4. Recuento microscópico directo, tanto para células viables como para no
viables.

El recuento en placa es el método más utilizado para la determinación del número

de células viables o unidades formadoras de colonias (U.F.C.) en un alimento. Los
recuentos totales deben hacerse en función de los siguientes factores:

a) Método de muestreo utilizado.

b) Distribución de los microorganismos en la muestra.
c) Naturaleza de la microflora del alimento.
d) Naturaleza del alimento.
e) Antecedentes del alimento.
f) Adecuación nutricional del medio de cultivo.
g) Temperatura y medio de incubación.
h) pH.
i) aw (Actividad del agua).
j) Potencial de oxidación reducción del medio.
k) Tipo de diluyente utilizado.
l) Número relativo de microrganismos en la muestra.
Los recuentos de microorganismos viables se basan en el número de colonias que
se desarrollan en placas previamente inoculadas con una cantidad conocida de
alimento e incubadas en unas condiciones ambientales determinadas. Estos
recuentos no pueden considerarse como recuentos ya que son susceptibles del
contaje.

METODOS:

 Preparar y diluir la muestra del alimento (piel y músculos del pescado) por la
técnica adecuada.
 Pipetear por duplicado a las placas estériles alícuotas de 1ml a partir de la
dilución 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 y una alícuota de 0.1ml de la dilución 10 -5
para obtener una dilución de 10-1 a 10-6 g. o ml de muestra por placa Petri.
Se sugiere esta serie de diluciones si no se conoce el rango aproximado del
número de bacterias.
 Agregar rápidamente a las placas Petri 15 ml de agar licuado y temperado
entre la preparación y adición del Agar no debe transcurrir más de 10
minutos.
 Mezclar inmediatamente las alícuotas con Agar mediante movimientos de
vaivén y rotación de la placas Petri se puede seguir los siguientes pasos:
a) Mover la placa de arriba abajo cinco veces en una dirección.
b) Rotar cinco veces la placa en sentido de las agujas del reloj.
c) Mover la placa cinco veces en la dirección que haga ángulo recto
al usado en el primer tiempo.
d) Rotar cinco veces la placa en sentido inverso al de las agujas del
reloj.
 Como control de esterilidad, acondicionar las placas Petri, agar sin inocular
y agar inoculado en el diluyente.
  Una vez solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a 29-31°C durante
48+/-3 horas.
 Cómputo del recuento estándar en placa:
a) Seleccionar 2 placas correspondientes a una dilución que contenga
entre 30 y 300 colonias utilizando un contador de colonias.
b) Tomar la medida aritmética de los recuentos y multiplicar por el factor
de la dilución (reciproco de la dilución usada). Reportar el resultado
como número de microorganismos aerobios mesófilos por gramo o ml
según sea el caso.

RESULTADOS:

Muestra problema 1056 254

10-1 205 342
10-2 18 12
10-3 5 8
10-4 184 5
10-5 2 2
CARACTERÍSTICAS DE LAS COLONIAS Y CALCULOS DE LOS RESULTADOS.

Las colonias descienden a medida que aumenta la dilución excepto por la dilución
de 10-4, aparte de esa todas tenían casi nada de unidades formadoras de colonias,
además que si multiplicamos la cantidad de unidades formadoras y lo multiplicamos
por 10 y a la cantidad que están diluidas, debería darnos un aproximado de la
cantidad de unidades formadoras de colonias.

CONCLUSIONES:

 Se determinó el número de microorganismos en cada placa con ayuda del

contador de colonias.
 Se interpretó los resultados en el cuestionario.

CUESTIONARIO:

1. ¿QUÉ SIGNIFICA LA PRESENCIA DE COLONIAS BACTERIANAS EN

AGAR PLATE COUNT?
Significa que el alimento estaba contaminado y que además hay una flora
patógena en el alimento que no se trató ni se le dio un adecuado
mantenimiento.
2. ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE QUE SE REALICE EL RECUENTO DE
BACTERIAS?
Porque así podemos determinar cuan contaminado está un producto y saber
si este es apto para el consumo.
3. ¿PARA QUE SE REALIZA LAS DILUCIONES EN LA MUESTRA
PROBLEMA?
Para realizar un mejor conteo, ya que el método nos dice una placa con 30 a
300 unidades formadoras de colonias.
4. ¿Ud PODRÍA REALIZAR EL RECUENTO BACTERIANO UTILIZANDO
COMO MEDIO DE CULTIVO UN CALDO?
No, porque este se encuentra muy concentrado y no me permite realizar un
buen recuento del mismo.