FTC 2019.

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FACULDADE DE TENCOLOGIA E CIÊNCIAS

Discente:_______________________________________________________________
Curso/semestre/turno:____________________________________________________

Identificação de Contaminação Alimentar

Em alguns ensaios microbiológicos, em especial os destinados à contagem, se faz necessário diluir
a amostra com o intuito de reduzir a população para facilitar a contagem. Para tanto, chamamos
esta etapa inicial durante o ensaio microbiológico de Diluição Seriada, a amostra é diluída
sucessivamente em ordem decimal em um diluente, podendo ser: água peptonada, água estéril,
solução salina 0,85% e outros. Diluição é o procedimento de adição de uma substância a outra
para reduzir a concentração de uma das substâncias. O uso mais comum da palavra diluição
ocorre no sentido de que “tantas partes de um material estão sendo diluídas em um número total
de partes do produto final (diluente + material)”. Diluições decimais seriadas: São diluições
decimais preparadas em série e que possuem um fator de diluição único e igual a 10. Segundo a
ICMSF (International Commission on Microbiological Specifications for Foods) microrganismos
indicadores podem ser agrupados em: (I) Microrganismos que não oferecem um riscos direto a
saúde: contagem padrão de mesófila, contagem de psicrotróficos e termófilos, contagem de
bolores e leveduras. (II) Microrganismos que oferecem um risco baixo ou indireto à saúde:
coliformes totais, coliformes fecais, Enterococcus, Enterobacteriaceae totais e Escherichia coli. Os
números e tipos de microrganismos presentes dentro ou sobre os alimentos produzidos podem ser
usados para avaliar com segurança a qualidade microbiológica dos mesmos. A segurança é
determinada pela ausência ou presença de microrganismos patogênicos ou suas toxinas, a
quantidade do inóculo, e o tempo de controle ou destruição desses agentes. Os seguintes tópicos
são importantes no estudo dos métodos de análise microbiológica de alimentos: amostragem,
preparação da amostra para análise, métodos de contagem de microrganismos e isolamento e
identificação de patógenos.

Objetivos
- Compreender os fundamentos da contagem de microrganismos em placa, através das técnicas
de contagem total de UFC em amostra de alimento.

Materiais
- 01 Frasco com 225 ml de água peptonada 0,1%.
- 01 Espátulas estéreis
- 01 Placa estéril para pesagem.
- 03 Tubos com 9 ml de água peptonada 1% estéril
- 03 Placas de Ágar MacConkey
- 03 Placas de Ágar Sabouraud
- 03 Placas de Ágar Sangue
- 01 Almofariz autoclavado
- 01 Alça de Drigalski
- 01Pipetas de 1ml e ponteiras estéreis
- Álcool 70%;
- Bico de Bunsen;
- Caneta para marcação de placas;
- Luvas e Toucas;
- Agitador Vortex;
- Descarte.

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Docente: LORENA LÔBO
Disciplina: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
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FACULDADE DE TENCOLOGIA E CIÊNCIAS

Procedimentos
Preparo da Amostra:
- Adicionar 25g ou ml do alimento em 225 ml de água peptonada e preparar diluições de 10-1 até
10-3 da amostra com água peptonada 0,1%.

Diluição Seriada da Amostra

- Preparar diluições de 10-1 até 10-3 da amostra com água peptonada 0,1%. A partir da cultura
bacteriana, inocular 1 mL em 9 mL de água peptonada, homogeneizar, retirar 1mL e transferir para
outro tubo com 9mL de salina obtendo assim, as diluições 1/10, 1/100, 1/1000.

Plaqueamento em superfície
Inocular 250 ul de cada diluição nas placas contendo o meio solidificado. Com o auxílio de alça de
Drigalski, espalhar o inóculo cuidadosamente por toda a superfície do meio, até sua completa
absorção. Incubar as placas invertidas em estufa por 48h em 37 ºC.

 Ágar Sangue: Usado para o isolamento de microrganismos não fastidiosos. Onde verifica
hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
 Ágar Sabouraud: favorece o crescimento de diversos fungos uniformes e filamentosos.
 Ágar MacConkey: meio de cultura destinado ao crescimento de bactérias gram negativas,
preferido para isolamento de Enterobactérias e Pseudomonas.

Delineamento
- Observar o crescimento de microrganismos em todas as placas;
- Fazer contagem do número de colônias de todas as placas;
Calcular o número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL) das amostras de todas as
placas usando o cálculo a seguir:

Nº de UFC/mL da amostra = Nº de colônia da palaca X Inóculo ul X Diluição

Exemplo: sendo 40 o número de colônias encontradas para o cálculo do tubo 3.

UFC/mL= 40 x (250uL X 3 diluição) X 10000 = 300000 ou 3 x 105 UFC/mL

Referências bibliográficas

SILVA, N. da; JUNQUEIRA, V.C.A.; SILVEIRA, N.F.A.; TANIWAKI; SANTOS, M. H.; R. F. S. dos;
GOMES, R. A. R. Manual de métodos de análise microbiológica de alimentos e água. São Paulo:
Livraria Varela, 2010. 630p.

JAY, J. M. Microbiologia de Alimentos. 6. ed., Artmed, Porto Alegre, p. 712, 2005

FRANCO, B. D. G. M.; LANDGRAF, M. Microbiologia de Alimentos. Atheneu, São Paulo, 2002.

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Docente: LORENA LÔBO
Disciplina: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS