MULTIPLICACION DEL CULTIVO DE LA ORQUIDEA

INTRODUCCION

A través de esta etapa se mantiene y aumenta la cantidad de brotes para los nuevos
ciclos de multiplicación sucesivos (subcultivos) y poder destinar parte de ellos a la
siguiente etapa de producción (enraizamiento, aclimatación, etc.). Ambas vías de
regeneración, organogénesis y embriogénesis, pueden darse en forma directa o
indirecta. Esta última implica la formación de callo. En general, la organogénesis
conduce a la producción de vástagos unipolares que enraízan en etapas sucesivas,
mientras que por embriogénesis somática se forman embriones bipolares a través
de etapas ontogénicas similares a la embriogénesis cigótica. Es importante señalar
que cualquiera sea la vía de regeneración empleada, es conveniente evitar la
formación de callo para disminuir el riesgo de variación somaclonal.

Los medios de cultivo, los reguladores de crecimiento como auxinas, citocininas y

ácido giberélico y las condiciones de crecimiento juegan un papel crítico sobre la
multiplicación clonal de los explantos.

OBJETIVO GENERAL

 Realizar la fase de multiplicación del cultivo de la orquídea.

 Mantener y aumentar la cantidad de brotes de orquídea.

MARCO TEORICO

La etapa de multiplicación generalmente comprende dos períodos, la fase de

inducción y la fase de multiplicación propiamente dicha. La primera implica,
generalmente, el empleo de concentraciones elevadas de reguladores de crecimiento
(generalmente de auxinas más que citocininas) para favorecer la desdiferenciación.
La segunda etapa requiere del empleo de un balance hormonal adecuado para
favorecer los procesos de diferenciación y multiplicación celular. En este caso el
sistema es más dependiente de reguladores del tipo de las citocininas. En algunos
casos, como ocurre en la formación de embriones somáticos, se requiere de una
tercera y cuarta etapa, denominadas de maduración y de germinación
respectivamente, cuya duración varía entre 1 a 2 semanas.

Las condiciones de incubación de los cultivos in vitro dependen de las especies con
que se trabaje. En el caso de las especies subtropicales, por ejemplo los cultivos se
incuban en luz a 27±2º C con 14 horas de fotoperíodo e intensidad lumínica
moderada. La presencia de compuestos fenólicos oxidados se encuentra asociada
con tejidos vegetales sometidos a situaciones de estrés, tales como aquel provocado
por el daño mecánico producido durante el aislamiento del explanto de la planta
madre o durante la transformación. Los compuestos fenólicos liberados al medio
pueden inhibir el crecimiento e incluso matar al explanto. Es recomendable además
lograr que la tasa de intercambio gaseoso entre los ambientes del recipiente y
externo sea óptima, evitándose la acumulación de CO2 y de etileno.

En este sentido el sellado del recipiente es importante, el intercambio gaseoso es

más limitado con el empleo de una tapa de plástico que con un film de polietileno
extensible. La utilización de una tapa perforada con tapón de gomaespuma es
altamente recomendable. El principal problema que puede presentarse durante los
sucesivos subcultivos in vitro es la vitrificación. La cual consiste en un proceso de
morfogénesis anormal con cambios anatómicos, morfológicos y fisiológicos que
producen.

Las orquídeas u orquidáceas (nombre científico Orchidaceae ) son una familia de

plantas monocotiledóneas que se distinguen por la complejidad de sus flores y por
sus interacciones ecológicas con los agentes polinizadores y con los hongos con los
que forman micorrizas.
La familia comprende aproximadamente 25 000 especies (algunas fuentes informan
de 30 000), por lo que resulta ser una de las familias con mayor riqueza específica
entre las angiospermas.

A esta diversidad natural se le suman 60 000 híbridos y variedades producidas por

los floricultores

La propagación y cultivo de las orquídeas fue revolucionado después del

descubrimiento de Knudson (1922) en donde las semillas pudieron ser germinadas
en un medio simple con azúcar. Este trabajo demostró que la germinación de semillas
de orquídeas en condiciones in vitro fue posible sin la asociación con hongos.
Posteriormente, el mismo autor propuso una nueva solución con la adición de
nutrientes para la germinación de semillas de orquí- deas en 1946.

A partir de este momento muchas orquídeas se han regenerado y propagado a partir

de segmentos de hoja.

El cultivo de orquídeas in vitro permite la producción de flores a partir de medios

artificiales como frascos para el posterior trasplante de las plantas adultas en las
macetas. Esta herramienta permite contar con plantas sanas, que pueden ser
destinadas a la comercialización. El cultivo de orquídeas se desarrolla en ambientes
climatizados, a temperatura y humedad regulada.

Dependiendo del desarrollo del cultivo, se deben utilizar contenedores de cultivo de

acuerdo al tamaño de las plántulas, para permitir un adecuado desarrollo. De igual
forma debe considerarse la utilización de una mayor intensidad lumínica o luz natural,
para permitir que se adapten con mayor facilidad a condiciones naturales.
MARCO PRÁCTICO

Al ingresar a la cámara nos sentamos en el laboratorio, contábamos con pinzas y

bisturí, esterilizamos las pinzas y el bisturí metiéndolas en un frasco de alcohol y
posteriormente en un mechero flameándolas para que se elimine toda la suciedad.

Tomamos un frasco del cultivo de la orquídea y empezamos a separarlas realizando

el proceso de multiplicacion.

Se tomó un nuevo frasco de medio de cultivo, se tomó un explante con las pinzas y
se la colocó en el medio cuidando que este quedara dentro del mismo y la dirección
de los ápices hacia arriba de lo contrario se obstruiría su crecimiento, este
procedimiento fue el mismo para el cultivo de explantos en el medio de 6 frascos,
distribuyéndolas por tamaños cada 10 explantos pequeños entraban en un frasco y
de 6 a 8 explantos grandes entraban en otros en cada procedimiento nuevo
debíamos desinfectar nuestras manos y también los materiales todo dentro de la
cámara.

Una vez culminada la siembra se sellaron los frascos y colocaron en el área de

crecimiento.

EQUIPOS Y MATERIALES

 Pinzas.
 Bisturi.
 Frascos con el medio de cultivo.
 Alcohol
 Ligas
CONCLUSIONES

A través de esta etapa se mantiene y aumenta la cantidad de brotes para los nuevos
ciclos de multiplicación sucesivos (subcultivos) y poder destinar parte de ellos a la
siguiente etapa de producción (enraizamiento, aclimatación, etc.). El cultivo de
orquídeas se desarrolla en ambientes climatizados, a temperatura y humedad
regulada esta etapa nos permitirá también contar con plantas sanas, que serán
destinadas a futuras muestras en el laboratorio.

Para obtener mejores resultados debemos trabajar de forma aséptica: esterilizando

el material a utilizar, desinfectándose las manos con alcohol para que el material
cultivado no se infecte de bacterias o callos.

RECOMENDACIONES

 La forma de colocar los frascos en la campana de flujo laminar debe ser

frasco con alcohol- mechero - frascos con pinzas para un mejor manejo de
material que se utilice.
 Todo el material a utilizar debe esterilizarse.
 No desperdiciar ningún medio de cultivo o meristemos.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el nombre científico de la orquídea?

R.- Orchidaceae

2. ¿Dónde tiene su origen la orquídea?

R.- Se encuentran espontáneas en la mayor parte del mundo, excepto en las regiones
de clima desértico o polar, si bien son especialmente abundantes en la
zona intertropical, donde crecen la mayoría de las especies de flores más vistosas.
 3. ¿En qué consiste la fase de multiplicación?

R.- El explanto encuentra en el medio de cultivo todo aquello que necesita para su
crecimiento y desarrollo (agua, elementos minerales, azúcares, hormonas, etc.). Tras
un período de crecimiento (4-8 semanas) es necesario el subcultivo y paso a un nuevo
medio. Es en este paso donde se produce la multiplicación de las plantas.

4. ¿Qué explantos se usan para esta fase?

R.- Durante esta fase se hace uso de aquellos explantes que sobrevivieron la FASE 1
y 2 los cuales originaron brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas.

5. ¿Qué elemento es imprescindible en esta fase?

R.- Es imprescindible la cámara de flujo laminar pues puede usarse para preservar la
esterilidad de las muestras.

6. ¿De qué dependerá el número de plantas obtenidas?

R.- El número de plantas que se obtiene dependerá de la especie vegetal y de las

condiciones del medio de cultivo. El número de plantas que se obtiene por la vía de
la micropropagación permite alcanzar incrementos exponenciales, considerando que
todos los factores que afectan el crecimiento hayan sido optimizados.

7. ¿Qué cantidad de explantos de brotes se recomienda utilizar por frasco?

R.- Se recomienda que por frasco se introduzca de 7 a 8 explantos de los brotes de

orquídea dependiendo del tamaño.

8. ¿Qué cuidados debemos tener en la camara?

R.- Debemos trabajar de forma aséptica: esterilizando el material a utilizar,

desinfectándose las manos con alcohol para que el material cultivado no se infecte
de bacterias o callos.
 9. ¿En qué ambientes se desarrolla el cultivo de orquídeas?

R.- El cultivo de orquídeas se desarrolla en ambientes climatizados, a temperatura y

humedad regulada.

10. ¿Qué es lo que nos facilita o permite esta etapa?

R.- Esta etapa nos permitirá contar con plantas sanas, que serán destinadas para
futuras muestras en el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA

Biotecnología y Mejoramiento Vegetal II, Argenbio, INTA. pags.: 70-84.

https://www.ecured.cu/Cultivo_de_meristemo
exa.unne.edu.ar/biologia/fisiologia.vegetal/.../capitulo22.pd
http://www.argenbio.org/adc/uploads/Libro_INTA_II/Parte_IV.pdf

https://www.ecured.cu/Micropropagaci%C3%B3n_de_plantas

http://propagacioninvitrodeorquideas.blogspot.com/

http://www.abc.com.py/articulos/cultivo-de-orquideas-in-vitro-338828.html
ANEXOS

Cultivo de Orquídea.

Pinzas, bisturí, mechero, alcohol.

Nuevo medio de cultivo.

Realizando la multiplicación de las
orquídeas.

Orquídeas, selladas en un nuevo medio

de cultivo listas para la aclimatación y
enrraizamiento.