Laboratorio de Biología para Ingeniería Ambiental

Facultad de Ingeniería

IDENTIFICACIÓN DE HONGOS AMBIENTALES EN LA UNIVERSIDAD

PRIVADA DEL NORTE – PAB. D, SEMI SÓTANO. 2019

A., Albarca, R., Aylas, M., Beltrán S., Vargas

Facultad de Ingeniería Ambiental, Universidad Privada del Norte. Av. Alfredo Mendiola
6062. Los Olivos. Lima. Perú.

RESUMEN
El presente trabajo de investigación tiene como finalidad identificar los tipos de hongos en
las muestras tomadas en la Universidad Privada del Norte – Pab D semi sótano, en el
distrito de Los Olivos, Departamento de Lima. Mediante el método de Sedimentación el
cual consiste en la exposición de las placas al ambiente durante el periodo de 15 min (8:13
– 8:28 pm). Nuestro trabajo fue enfocado en la zona del semi sótano debido a la presencia
del movimiento vehicular, por la presencia de estudiantes y las fuentes de contaminación
(baño y tachos de basura). Finalmente se mostrarán cuadros con los resultados obtenidos
del análisis, con el propósito de determinar si la zona está contaminada.

Palabras cave:
Hongos, movimiento vehicular, Método de sedimentación, Zona contaminada

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ABSTRACT

The purpose of this research work is to identify the types of fungi in the samples taken at
the Universidad Privada del Norte - Pab D semi basement, in the district of Los Olivos,
Department of Lima. Through the Sedimentation method which consists of the exposure of
the plates to the environment during the period of 15 min (8:13 - 8:28 pm). Our work was
focused on the semi-basement area due to the presence of vehicular movement, the
presence of students and the sources of pollution (bathroom and trash cans). Finally, tables
with the results obtained from the analysis will be shown, in order to determine if the area
is contaminated.

Key words:
Fungi, vehicular movement, sedimentation method, contaminated area

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INTRODUCCIÓN

Los hongos son organismos cosmopolitas que pueden desarrollarse en los sustratos más
variados, en todos los climas de la tierra e incluso en condiciones extremas. Su ámbito es
tan amplio, que sus esporas incluso sobrepasan la atmósfera (Aira et al., 2003). El
desarrollo fúngico está supeditado a ciertas condiciones ambientales tales como la
humedad relativa, temperatura, precipitación, inversiones térmicas, contaminación,
disponibilidad de sustrato y actividades humanas, las que influyen de manera determinante
en la proliferación y propagación de las partículas fúngicas hacia los espacios interiores
(Guerrero et al., 2003).

Las esporas fúngicas son componentes normales de ambientes externos y pueden ser la
fuente contaminante de los ambientes internos y muchos de estos pueden servir como
sitios de amplificación para el crecimiento de los hongos (Bueno et al., 2003). La inhalación
sistémica de esporas y fragmentos de micelio de hongos puede inducir una afección
alérgica respiratoria, tanto en las vías aéreas superiores como en las inferiores. Los
componentes alergénicos de hongos contienen moléculas, como glucoproteínas, proteínas
y polisacáridos, que pueden desencadenar reacciones de hipersensibilidad tipo I (Ruiz et
al., 2006)

Por otro lado no hay un cierto nivel de los hongos ambientales que puede ser considerado
como seguro. Esto depende de la concentración fúngica en los ambientes externos y de
los tipos de esporas presentes en el ambiente interno. Cada oficina, cada edificio o cada
casa deben ser considerados como un caso separado y único. Generalmente, la
concentración fúngica de los ambientes internos es menor que la presente en los externos
(Berlongieri, 1999). (Klanova, 2000) estableció que la concentración de hongos en
ambientes internos por encima de 2,000 UFC/m3, puede ser considerada como un factor
de riesgo serio para la salud de los ocupantes. Por esta razón se han realizado estudios
en donde se han determinado los géneros fúngicos más frecuentes, entre los que se
mencionan: Rhizopus, Penicillium, Fusarium, Alternaría, Mucor y Aspergillus (Bueno, Silva
y Oliver, 2003).

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OBJETIVOS

Objetivo General
- Identificar los tipos de hongos presentes en las muestras tomadas en la
Universidad Privada del Norte – Pab. D semi sótano

Objetivos Específicos
- Utilizar correctamente métodos rápidos de identificación de hongos
- Reportar la cantidad de hongos encontrados por punto de muestreo

MATERIALES Y EQUIPOS
Para realizar nuestro trabajo fueron necesarios diversos instrumentos que serán
mencionados en el siguiente cuadro.

MATERIALES DE LAB. MEDIOS DE CULTIVO EQUIPOS

 2 placas Petri  Medio de Cultivo

 Mechero bunsen Agar Sabouraud
 Laminas porta  Estufa
 Medio de Cultivo incubadora
objetos Agar Rosa de  Microscopios
 Laminas cubre Bengala
objetos Cloranfenicol (RBC)
 Asa de siembra

Se realizó el estudio de presencia de hongos en la universidad Privada del Norte

“pabellón D”, en el medio ambiente interno de la universidad donde se eligieron dos
puntos de muestreos tomando en cuenta que sean puntos donde haya más transición de
alumnos y una vía de vehículos, exponiendo las placas por 15 minutos.

El método de recolección de hongos es denominado recuento de placa el cual permite

identificar las colonias mediante el uso del agar Agar Rosa de Bengala Cloranfenicol y
Agar Sabouraud posteriormente de la incubación.

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MÉTODOLOGÍA
MÉTODO DE SEDIMENTACIÓN
Se utilizará la técnica de sedimentación en placa Petri, la cual consiste en la exposición de
las placas al ambiente durante un periodo de 15 min (8:13-8:28p.m.) una altura de 2m.

PROCEDIMIENTO

1. Se sirvió los medios de cultivo: Agar Sabouraud y Agar Rosa de Bengala

Fig. 1: Agar Rosa de Bengala

Fuente: Elaboración propia

Fig. 2: Agar Sabouraud

Fuente: Elaboración propia

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2. Se colocó las placas en el sótano del pabellón “D” de la universidad Privada

del Norte

Fig. 3: Placa Petri – Agar Sabouraud

Fuente: Elaboración propia

Fig. 4: Placa Petri – Agar Rosa de Bengala

Fuente: Elaboración propia

- Se eligió esta zona por el movimiento vehicular y por la presencia de

estudiantes, en esta parte también se encuentra ubicado el baño de mujeres,
tachos de basura, aulas y pequeñas áreas verdes.

- Las placas se colocaron en unos muros a las 8:28 pm y se le dejó durante 15

minutos.

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RESULTADOS

- Se observó el crecimiento de hongos en ambas placas de: Agar Sabouraud y

Agar Rosa de Bengala

Fig. 5: Agar Sabouraud

Fuente: Elaboración propia

Fig. 6: Agar Rosa de Bengala

Fuente: Elaboración propia

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- Se pasó a identificar los parámetros macroscópicos y microscópicos en ambas

placas Petri.

Fig. 7: Identificación de Consistencia

de las colonias existentes

Fuente: Elaboración propia

Fig. 8: Identificación de tipos de Hifas y características

Fuente: Elaboración propia

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Tabla N°1: Datos de los parámetros macroscópicos y microscópicos del medio de cultivo
con Agar Sabouraud

AGAR SABOUROUD
PARÁMETROS PARÁMETROS
MACROSCÓPICOS MICROSCÓPICOS
Colonias Color Aspecto Consistencia Relieve Forma HIFAS CARACTERISTICAS

Aspergillus 8 verde oscuro rugoso duro elevado Micelial Cenocitica esporas - alargado
Candida 6 blanco liso blando plano Granular x x
glabrata lechoso
Candida 8 rosado liso blando plano Granular x x
Tropicalis

Fuente: Elaboración propia

Tabla N°2: Datos de los parámetros macroscópicos y

Microscópicos del medio de cultivo con Agar Rosa de bengala

AGAR ROSA BENGALA

PARÁMETROS MACROSCÓPICOS PARÁMETROS
MICROSCÓPICOS
colonias color aspecto consistencia relieve forma HIFAS CARACTERISTICAS

Penicillium 1 verde claro rugoso duro elevado Micelial cenocítica esporas -

Italicum alargadas
Penicillium 1 verde oscuro rugoso duro plano Micelial x Esporas
Brevicompactium - circular
Alternaria sp 1 verde petróleo rugoso duro plano Micelial cenocítica esporas -
oscuro alargadas
Mucor Mucedo 2 verde petróleo rugoso duro elevado Micelial septada esporas -
claro alargadas
Candida 4 Blanco - bordes liso blando elevado granular x x
Tropicalis rosados
Candida 2 Rosado liso blando plano granular x x
Tropicalis
Aspergillus 1 Blanco - punto rugoso duro elevado Micelial cenocítica Esporas
Orizae amarillo -circular
Aspergillus 1 Verde con rugoso duro plano Micelial x Esporas
Flavus amarillo - circular
Fuente: Elaboración propia

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 CALCULO DE UFC

N=𝟓𝒂 × 𝟏𝟎𝟑 (𝒃𝒕)−𝟏

N: UFC m3 de aire en el ambiente

A: es el número de colonias por caja petri
B: superficie de la caja petri (r2xπ) en cm2
T: tiempo de exposición en minutos

Cuadro 1. Niveles de microorganismos en el aire de ambientes de interiores no industriales

Fuente: Comisión de las comunidades Europeas 1983

 Para la placa con Agar Sadouroud, mediante la fórmula mencionada se determinó que
presenta una categoría de contaminación intermedia, ya que las UFC/m3 de hongos es igual
a 233.40 m3.
UFC= 5(22) x 103 ((5x2xπ) x15)-1
UFC= 110x103 (31.42x15)-1
UFC= 233.40

 Para la placa con Agar Rosa de Bengala se determinó que presenta una categoría de
contaminación intermedia, ya que las UFC/m3 de hongos es igual a 137.91 m3

UFC= 5(13) x 103 ((5x2xπ) x15)-1

UFC= 65x103 (31.42x15)-1
UFC= 137.91

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DISCUCIONES

En relación con la primera placa Petri con Agar sabouroud que utilizamos para la
identificación de Hongos ambientales en la Universidad Privada del Norte se
encuentran; Aspergillus, Candida albicans y Candida Tropicalis ya que la
temperatura óptima para el desarrollo de los hongos se encuentra entre 25 y 30ºC y
el límite máximo entre 40 y 45ºC. Destacamos que la mayor parte de los hongos no
crecen por debajo de 5ºC y que sin embargo hay hongos como el Aspergillus flavus,
Aspergillus candidus y Aspergillus fumigatus que pueden crecer sin problemas
hasta los 55ºC y otros como el Penicillium expansum y el Penicillium cyclopium que
son capaces de crecer a 0ºC. (Alberto, 2002).

En relación con la segunda placa Petri con Agar rosa de bengala para la
identificación de Hongos ambientales en la Universidad Privada del Norte Pabellon
D,semi sotano se encontraron; Penicillium Italicum, Penicillium Brevicompactium,
Alternaria sp, Mucor Mucedo, Candida Tropicalis, Aspergillus Orizae y Aspergillus
Flavus ya que en Agar Sabouraud o en otros medios de cultivo similares, las
colonias que crecen son lisas, suaves, húmedas y de color y aspecto cremoso.
Estas colonias tienen un tamaño que oscila entre 1,5 y 2 m.m. de diámetro, con
aspecto de levadura, de consistencia blanda y rápidamente proyectan filamentos
hasta la profundidad del agar. Después de 4-5 días se percibe un olor característico
de levadura. Otros medios de cultivo en los cuales puede crecer C.albicans son:
Pagano-Levin, en el cual las colonias se observan de color crema, Albicans ID
(Biomerieux), donde las colonias se observan de color azul y CHROMagar®
Candida (CHROMagar), observándose las colonias de esta especie de color verde.

Las colonias de Candida crecen “in vitro” en condiciones de aerobiosis en medios

de cultivo a pH con rango entre 2,5 y 7,5 y temperatura que oscila entre 20°C y
38°C. El crecimiento de colonias se puede detectar entre 48 y 72 horas después de
la siembra, y los subcultivos pueden crecer más rápidamente. (Pardi, G., &
Cardozo, 2002).

Haciendo referencia a otra fuente se sabe que entre los géneros de hongos que
fueron aislados con una mayor frecuencia en las áreas de almacenamiento de
material bibliográfico y oficinas de la UDES se encuentran: Penicillium sp.,
Alternaria sp., Mucor sp y Cladosporium sp. Adicionalmente pudo observarse que
las condiciones de temperatura y humedad relativa favorecen el crecimiento y la
esporulación de estos microorganismos, por lo que sus esporas o fragmentos
hifales pueden encontrarse en la atmósfera en concentraciones importantes
constituyendo un riesgo para la salud humana y causan biodeterioro de materiales
e insumos almacenados en estos lugares. (Mantilla, 2016)

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CONCLUSIONES

Este informe muestra las condiciones actuales en cuanto a presencia de hongos en el

sótano del pabellón D. Queda manifestado la existencia de microorganismo en el aire
interior de los ambientes de la Universidad Privada del Norte las cuales interactúan
directamente a la presencia de personas.

En el Agar Sabouraud se determinó la presencia de 3 microorganismos que estaban

presente en el sótano del pabellón D, las cuales fueron: Aspergillus, Candida Albicans
y Candida Tropicalis, esto debido a que el medio de cultivo contiene peptonas y una
elevada concentración de glucosa favoreciendo así al crecimiento de los hongos por
sobre las bacterias.

En el Agar Rosa de Bengala se determinó la presencia de 8 microorganismos

presente en el sótano del pabellón D, las cuales fueron: Penicillium Italicum,
Penicillium Brevicompactium, Alternaria sp, Mucor Mucedo, Candida Tropicalis,
Aspergillus Orizae y Aspergillus Flavus, y esto debido a que es un medio de cultivo
selectivo que favorece el crecimiento de las colonias.

Para finalizar, mediando el cálculo UFC/m3 en el aire concluimos que la zona

estudiada hace presencia de una contaminación intermedia siendo los valores 100 –
300 para una zona no industrial. Obteniendo de datos para la placa Petri Agar
Sabouroud de 233.40 m3 y para la placa Petri Agar Rosa de bengala de 137.91 m3.

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ACTIVIDAD

METODOS DE IDENTIFICACIÓN HONGOS AMBIENTALES

- Métodos moleculares: El concepto de “método molecular” es un término amplio

que incluye técnicas de biología molecular, detectando y/o cuantificando
secuencias genéticas específicas de ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido
ribonucleico (ARN) o proteínas.
- El concepto de “Biología Molecular” se aplicó a los trabajos realizados sobre el
ADN. Esta molécula, descubierta por el biólogo y médico suizo Johan Friedrich
Miescher en el año 1869, capturó la atención de la comunidad científica, luego
que los investigadores James D. Watson, Francis Crick y Rosalind Franklin
descubrieran la estructura del ADN en el año 1953 (Watson y Crick, 1953).

- Método de enfoque genómico: Es una ciencia que se enfoca al estudio de los

genomas así como los genes que contienen, sus funciones, las interacciones
entre ellos y con los factores ambientales. El estudio de los genomas incluye los
mapas genómicos, las secuencias genómicas y las funciones génicas. La
genómica, por lo tanto, se puede considerar una rama de la genética que
estudia los organismos en términos de sus genomas. (López et al.,2005)

- Método transcriptomico: Hace referencia al conjunto de todas las moléculas de

ARN presente en una célula o grupo de células. Su objetivo más importante de
la transcriptómica es identificar que porción del genoma es transcrito en cada
tipo celular

- Método metagenómico: Se determina como un estudio del material genético, el

cual es obtenido de muestras ambientales. Permite el estudio de comunidades
microbiales, ofrece una manera poderosa de abordar una colección de genes
secuenciados a una muestra ambiental como si se tratara de un único genoma.
Su aplicación se basa en técnicas genómicas modernas para el estudio directo
de comunidades de microorganismos en su entorno natural, evitando la
necesidad de aislar y cultivar cada una de las especies que componen la
comunidad.

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 Metagenómica de escopeta: Es una técnica que permite

evaluar todos los genes de todos los organismos presentes
en una muestra compleja. Evalúa la diversidad y abundancia
microbiana en diversos ambientes, además permite estudiar
microorg. Incultivables. (Illumina,2018)
 Metagenómica comparativa: Proporciona una percepción
adicional hacia la función de comunidades microbianas
complejas. Su objetivo es identificar grupos microbianos que
son responsables de disponer cualidades específicas a cierto
ecosistema.
 Metatranscriptómica: La metagenómica permite a los
investigadores acceder la diversidad funcional y metabólica
de comunidades microbianas, pero no puede demostrar cuál
de estos procesos está activo. La extracción y los análisis
del ARNm metagenómico (el metatranscriptoma)
proporciona información sobre la regulación y perfiles de
expresión de comunidades complejas. Por las dificultades
técnicas (la vida media corta del ARNm, por ejemplo) en la
recolección de ARN ambiental ha habido relativamente pocos
estudios metatranscriptómicos in situ de las comunidades
microbianas a la fecha (Simón, C; Daniel, R. (2010).

- Método proteómico:

La proteómica es el área científica que estudia la estructura y función de las

proteínas de una célula en forma global. Simón, & Martínez, A (2005) aseguran
que es una disciplina comparativa que pretende identificar y caracterizar
aquellas proteínas que diferencian, a nivel de expresión o de modificación
química o estructural, la célula o el tejido enfermo del sano.

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BIBLIOGRAFIA

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Mantilla, K., Gámez, D., Muñoz, S., & Domínguez-Amorocho, O. A. (2016). Aislamiento e
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Pardi, G., & Cardozo, E. I. (2002). Algunas consideraciones sobre Candida albicans como
agente etiológico de candidiasis bucal. Acta odontol venez, 40(1), 9-17.

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ANEXOS

CATÁLOGO DE HONGOS AMBIENTALES

Según la Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco, el reino biológico de los
fungi está compuesto por especies diferentes que se distinguen por sus formas de
crecimiento en la naturaleza las cuales son:

1. Levaduras (unicelulares): Pueden dar origen a la formación de seudohifas, se

desarrollan dando colonias pálidas y opacas con un diámetro de 0.5 a 3mm, en
general con de color crema.
2. Mohos (formas miceliares): Su unidad estructural son filamentos llamados hifas,
que dividen en transversales, tabiques o largos tubos.

CLASIFICACIÓN DE LOS HONGOS FILAMENTOSOS

La taxonomía de los hongos filamentosos es un área dinámica sujeta a continuas

revisiones. En base al tipo de micelio y de esporulación que presenten, se los puede
clasificar en los siguientes grandes grupos:

 Micelio no tabicado
Clase ZIGOMICETES: producción de espora de resistencia de origen sexual
llamado zigospora. Micelio filamentoso continuo o cenocítico. Reproducción
asexual a través de esporangios con esporangiosporos móviles o inmóviles (pocas
especies con conidios).
 Micelio tabicado
Clase ASCOMICETES: reproducción sexual por medio de ascosporas.
Reproducción asexual diversa por gametos y varios esporos.
Clase BASIDIOMICETES: reproducción sexual por medio de basidiosporos.
Clase DEUTEROMICETES: (Hongos imperfectos); reproducción asexual
solamente. Produce varios tipos de esporos vegetativos.

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ASPERGILLUS FLAVUS

Dominio: Eukaryota
Reino: Fungi
Filo: Ascomycota
Subfilo: Pezizomycotina
Clase: Eurotiomycetes
Orden: Eurotiales

ASPERGILLUS NIDULANS ASPERGILLUS USTUS

CANDIDA ALBICANS

Hongo dimórfico perteneciente al Phylum Ascomycota, que presenta pseudohifas, hifas y

blastoconidios subesféricos

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CANDIDA GLABRATA
Levadura haploida.
Reino: Fungi
Filo: Ascomycota

Estas células ovales miden 2-3 X 4-5 μm y no se han observado pseudohifas. Las
colonias son de color blanco a crema, pastosas y lisas con un crecimiento de 3 a 5 días
en medio Sabouraud a 37°C.(Rivera et al.,2006; López et al., 2010).

 Azul pálido a azul oscuro es propio de C. albicans; rosa es característico de C.

tropicalis, Son levaduras redondas de 3.5-7 X 5.5-10 μm, que pueden formar
blastoconidias únicas o en pequeños grupos y pseudohifas largas. Las C.
lusitaniae y C. kefyr.

Desde la parte superior izquierda y en sentido horario aparecen P. ITALICUM, P.

DIGITATUM, P. EXPANSUM, y P. BREVICOMPACTUM.

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PENICILLIUM CHRYSOGENUM
Reino: Fungi

Filo: Ascomycota

Clase: Eurotiomycetes

Orden: Eurotiales

Familia: Trichocomaceae

PENICILLIUM EXPANSUM

Taxonomía: Hongos y Pseudofungis:

Ascomycota > Eurotiomycetes > Eurotiales > Trichocomaceae

Las colonias crecen rápidamente, con aspeco aterciopelados, los márgenes de micelio
blanco, con conidios verde opaco o gris verdoso. Los conidióforos de paredes lisas, o
ligeramente rugosa, fina, hialina, 200-500 micras de longitud. Los conidios subglobosos a
elípticas, lisos de 2,5 a 3,0 micras de diámetro.

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PENICILIUM DIGITATIUM
Reino: Fungi
Filo: Ascomycota
Clase: Eurotiomycetes
Orden: Eurotiales
Familia: Trichocomaceae
Género: Penicillium
Especie: P.digitatum
Puede comenzar su desarrollo, inicialmente como una tenue vegetación esponjosa con
aspecto de filtro, los esporangios, de color blanco, pero que cambia rápidamente a una
coloración entre verde amarillenta y verde oliva.

CLADOSPORIUM
Reino: Fungi
Division: Ascomycota
Familia: Davidiellaceae
Clase: Dothideomycetes
Orden: Capnodiales
Las especies producen colonias verde oliva a marrón o negras y
tienen conidios pigmentados oscuros que se forman en cadenas simples o ramificadas.

ALTERNARIA SP
Reino: Fungi
Filo: Ascomycota
Subfilo: Pezizomycotina
Clase: Dothideomycetes

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MUCOR MUCEDO
Reino: Fungi
Division: zygomycota
Familia: Mucoraceae
Clase: zygomycetes
Orden: Mucolares
Las colonias en medio de cultivo pueden crecer varios centímetros de altura. Mayoría de
las colonias pueden convertirse en gris a color marrón debido al desarrollo de las
esporas.

Las colonias de diferentes especies por lo general crecen muy altas y luminosas, lanosas,
lo que los hace diferentes de la mayoría de los hongos con su crecimiento aterciopelada
plana. La tinción de las hifas o colonias por lo general gris claro a gris amarillento.
Oportunidades Confusión existen para otras Zigomicetos, tales como Absidia y Rhizopus.

RHIZOPUS STOLENIFER
Reino: Fungi
Phylum: Zygomycota
División: Mycota
Subdivisión: Mycotina
Clase: Zygomycetes
Orden: Mucorales

ABSIDIA CORYMBIFERA
Reino: Fungi
Clase: Zygomycetes
Orden: Mucorales

Esporangiosporas ramificadas; esporangios abundantes, pequeños y pálidos con la base

en forma de embudo

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