UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE LETRAS Y CIENCIAS HUMANAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CONSERVACIÓN Y
RESTAURACIÓN

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA I

PRACTICA Nº 10
“CROMATOGRAFIA DE PAPEL”
HORARIO: Viernes 2 – 4 pm (Grupo #2)

2019

RESUMEN
Inicialmente, se utiliza un disolvente adecuado para llevar sustancias problema (a separar)
al papel, donde son adsorbidas. Luego, al pasar a través del mismo el disolvente se irán
separando cada uno de los componentes de la mezcla, siendo los que menos migren los
que mayor afinidad tienen con el papel, mientras que los más susceptibles de migrar serán
los compuestos menos afines con dicho soporte. Como resultado, se originan zonas
coloreadas bien diferenciadas, obteniendo así un cromatograma y dando por terminado el
desarrollo del mismo.
INTRODUCCIÓN
La cromatografía es un método de análisis que permite la separación de gases o líquidos
de una manera mezcla por absorción selectiva, produciendo manchas diferentemente
coloreadas en el medio absorbente; está basado y la diferente velocidad con la que se
mueve cada fluido a través de una sustancia porosa.

De entre los numerosos tipos de cromatografía existentes, en esta práctica nos limitaremos
a la cromatografía en papel, basada en los distintos tipos de afinidad de los productos
químicos, en este caso: el papel y el disolvente.

MARCO TEORICO
LA CROMATOGRAFIA
La cromatografía es un proceso de separación de las partes y componentes individuales
de una mezcla. Su uso ha sido de importancia para múltiples diseños experimentales,
especialmente dentro del laboratorio.
La función básica de la técnica cromatografíca es, separar, purificar, cuantificar los
componentes de una muestra, ya sea celular, molecular o genética. Uno de los métodos
actualmente más utilizado es la electroforesis, la cual es parte de este grupo.

Existen diversas historias sobre cómo fue descubierta, sin embargo, se le atribuye
generalmente al botánico ruso MIkhail S. Tsvet, ya que, en 1901 reconoció el base físico
química de la separación de pigmentos de la planta, en particular la de los carotenoides y
las clorofilas. Después de 19 años, el Ingeniero Leroy Palmer describe por primera vez,
la metodología de la cromatografía, abriendo puertas a la investigación del método por
los siguientes años hasta la actualidad.

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

En la cromatografía sobre papel, las interacciones del soluto con el papel hacen que los
compuestos se desplacen a velocidades diferentes.

Una pequeña mancha de disolución que contiene la muestra se aplica sobre una tira de
papel cromatográfico a una distancia aproximada de un centímetro de la base. La muestra
es adsorbida en el papel. Esto significa que la muestra entra en contacto con el papel y
puede establecer interacciones. El papel es sumergido en un disolvente adecuado (etanol
o agua) e introducido en un contenedor cerrado. A medida que el disolvente asciende por
el papel, encuentra la muestra que empieza a viajar por el papel con el disolvente. Los
diferentes compuestos de la muestra recorren distancias diferentes dependiendo de la
fuerza de sus interacciones químicas con el papel. La cromatografía en papel requiere
algún tiempo, habitualmente se necesitan varias horas para completarse.

El cromatograma final puede ser comparado con otros de mezclas conocidas a fin de
identificar los componentes de la muestra. La cromatografía en papel de dos dimensiones
consiste en desarrollar el cromatograma en un disolvente, girar el papel 90º y desarrollar
el cromatograma en un disolvente diferente. Es útil para separar mezclas complejas de
compuestos similares.

Actualmente, la cromatografía en papel se utiliza poco y ha sido ampliamente

reemplazada por la cromatografía en capa fina. No obstante, todavía se utiliza como una
poderosa herramienta pedagógica.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

Se trata de una cromatografía en columna que utiliza una fase estacionaria con sustancias
con componentes con carga eléctrica. Se utiliza para separar compuestos cargados,
incluyendo aminoácidos, péptidos y proteínas. La fase estacionaria es normalmente una
resina de intercambio iónico que contiene grupos funcionales cargados que interaccionan
con grupos cargados de signo opuesto del compuesto que se quiere retener. Puede ser:

1. Intercambiador de iones cargado positivamente (intercambiador de aniones), que

interacciona con aniones
2. Intercambiador de iones cargado negativamente (intercambiador de cationes), que
interacciona con cationes

Los compuestos retenidos se pueden eluir de la columna por gradiente de elución o por
elución isocrática con un cambio de la concentración salina o del pH. La cromatografía
de intercambio iónico es muy utilizada para purificar proteínas.

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)

Se suele denominar HPLC, y es una forma de cromatografía en columna que se utiliza a

menudo en bioquímica y química analítica. La muestra problema es forzada a pasar a
través de una columna (fase estacionaria) por un líquido (fase móvil) a elevada presión,
lo que disminuye el tiempo que los componentes separados permanecen en la fase
estacionaria, y por lo tanto, el tiempo de difusión dentro la columna. En la salida de la
comuna existe un detector que indica la cantidad de soluto que está saliendo. Este proceso
de difusión dentro la columna comporta la aparición de picos anchos y pérdida de
resolución. El hecho de estar menos tiempo en la columna se traduce en picos más
estrechos en el cromatograma resultante, así como una mayor resolución y sensibilidad.

Otra manera de disminuir el tiempo que la muestra está dentro de la columna es utilizar
un gradiente de disolventes, que consiste en cambiar la composición de la fase móvil a
fin de acelerar la salida de la muestra del interior de la columna. Se pueden considerar
dos tipos:

1. FASE NORMAL
Se utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil apolar, y se usa
principalmente cuando la muestra a analizar es de naturaleza apolar. Fue el
 primer tipo de HPLC, pero hoy en día ha sido muy desplazado por la fase
reversa.

2. FASE REVERSA
Se desarrolló debido al elevado número de biomoléculas polares. La fase
estacionaria es apolar y la fase móvil polar. Una de las fases estacionarias más
empleadas es sílice tratada con RMe2SiCl, donde R es una cadena alquílica
como CnH2n+1 . En este caso, para una determinada sustancia, el tiempo de
retención aumenta con la polaridad de la fase móvil.

CROMATOGRAFÍA DE PERMEACIÓN EN GEL (GPC)

La cromatografía de permeación en gel se conoce también como cromatografía de

exclusión por tamaño, porque separa las moléculas según su dimensión. Las moléculas
pequeñas entran en un medio poroso y por tanto les cuesta más salir de la columna,
dejando las partículas más grandes eluir primero. La GPC es una técnica muy empleada
para determinar la distribución del peso molecular en polímeros, aunque suele
proporcionar baja resolución.

CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

La cromatografía de afinidad se basa en interacciones no covalentes selectivas entre la

muestra y moléculas específicas. Es muy específica, pero no muy consistente. Se utiliza
mucho en bioquímica para la purificación de proteínas.

CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO

La cromatografía gas-líquido se fundamenta en el reparto del equilibrio de la muestra a

analizar entre una fase estacionaria líquida y una fase móvil gaseosa. Es una técnica útil
para una gran variedad de mezclas no polares, pero es poco eficiente para moléculas
termolábiles.

PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES

Papel filtro Probeta Tapón de corcho Metanol

PROCEDIMIENTO
1. Cortar el papel filtro en un a tira, 1.5 cm de ancho y 20 cm de largo, luego marcar
con lápiz un punto situado a 2 cm. por encima del borde inferior del papel de filtro.
2. Colocar sobre el punto antes marcado entre 5 y 10 gotas de solución de pigmentos
(mezcla de colores).

Marcador Mezcla de pigmentos

Punto
a 2 cm

3. Luego con un corcho sujetar la tira de filtro y colocarlo en la probeta con cuidado,
centrado, de manera que no toque las paredes y así sumergir el papel de tal manera
que la mancha del pigmento este a 1 cm. de la superficie de la solución de metanol.
 Papel de filtro en la probeta

4. Esperar unos minutos hasta que el papel (fase estacionaria) empiece a absorber
el metanol (fase movil), es este caso, después de un 1 minutos pudimos ver el
primer color.

1 min 8 min 17 min

Resultados Resultados Resultados

Al pasar 1 min pudimos
observar que al subir el
metanol iba apareciendo un
color, es este caso un
morado.
Luego de 8 min Después de 17 min, el
empezamos a notar 3 notamos que al subir el
colores, medio marrón y metanol separo más
morado. colores y aparecieron el
celeste, lila, naranja y
violeta.
CALCULO DEL
FACTOR DE
RESPUESTA DE
PATRON DE
RECORRIDO

Rf A Rf B Rf C Rf D
BIBLIOGRAFIA
 Cromatografía. Recuperado el 18 de junio del 2019 de:
http://blog.analitek.com/para-que-se-utiliza-la-cromatografia-y-como-es-su-
proceso-0.
 Cromatografía de Papel. Recuperado el 18 de junio del 2019 de:
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_altres.html.