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FACULTAD DE CIENCIAS
TEMA:
DOCENTE:
CURSO:
Operaciones Unitarias
ALUMNO:
CICLO: VI
HUACHO, PERU
Contenido
Introducción .......................................................................................................................................... 1
CROMATOGRAFIA POR ELUSION ............................................................................................... 2
Fundamentos de la cromatografía por elusión. .............................................................................. 2
Tipos de Cromatografía liquida por principio de separación ....................................................... 2
Cromatografía liquido-liquido ..................................................................................................... 3
Cromatografía por filtración en gel ............................................................................................ 3
Cromatografía por adsorción ...................................................................................................... 3
Matrices ............................................................................................................................................. 4
Tipo de cromatografía y tipo de matriz ............................................................................................... 5
Cromatografía líquido-líquido ........................................................................................................ 5
Cromatografía de filtración en gel .................................................................................................. 5
Cromatografía por adsorción .......................................................................................................... 6
Cinética de Absorción. .................................................................................................................... 7
Diseño de Columnas Cromatografías ................................................................................................. 8
Teoría de Cromatografía Lineal .......................................................................................................... 8
Modelos Lineales. ............................................................................................................................... 8
Teoría de platos ............................................................................................................................... 9
Aplicación del modelo de platos ................................................................................................... 10
Teoría cinética ............................................................................................................................... 10
PRECIPITACION................................................................................................................................. 12
Fundamentos ................................................................................................................................... 12
Precipitación por diminución de la Solubilidad ........................................................................... 13
Precipitación por sales. ................................................................................................................... 14
Precipitación isoeléctrica .................................................................................................................. 15
Precipitación con solventes ............................................................................................................... 15
Precipitación con polímeros no iónicos ............................................................................................ 16
Diseño de pecipitadores .................................................................................................................... 16
Cinética de Precipitación .............................................................................................................. 17
Métodos de Diseño ........................................................................................................................... 18
Precipitador por lotes .................................................................................................................... 18
Precipitadores continuos ............................................................................................................... 18
Introducción
cuando son arrastrados por una fase móvil a través de un lecho cromatografico que contiene la
La muestra se disuelve en la fase móvil y se hace pasar a través de la fase estacionaria que se
mantiene fija en una columna o sobre una superficie plana. Las dos fases se eligen de tal modo
que los componentes de la muestra se destruyen de modo distinto entre las dos fases. Aquellos
que son fuertemente retenidos en la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de fase
móvil.
Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y purificar estos productos mediante la
operación de precipitación. A nivel industrial puede ser utilizada para la obtención de productos
proteicos y nucleicos
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CROMATOGRAFIA POR ELUSION
La cromatografía por elución es un método para separar en sus componentes (resolver) una
Andrews, 2009). Ésta se efectúa en columnas empacadas con adsorbentes que pueden ser
En la cromatografía por elución la columna no se satura completamente con soluto, sino que
concentrado.
Existen varias técnicas cromatográficas basadas en la interacción de una fase móvil líquida y
una fase estacionaria. Cinco aspectos fundamentales permiten distinguir las semejanzas y
La cinética de la adsorción.
Para la separación se pueden distinguir tres tipos básicos de cromatografía por elución: la
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Cromatografía liquido-liquido
Se utiliza un adsorbente sólido impregnado con un líquido que funciona como fase
de partición de cada uno de los solutos de la mezcla entre las fases líquidas (estacionaria y
móvil).
La cromatografía por filtración en gel utiliza partículas fabricadas de geles porosas que
actúan como mallas moleculares que permiten separar moléculas en función a su tamaño.
La cromatografía por adsorción emplea adsorbentes en los que los solutos a separar
Se caracteriza por la unión del soluto al adsorbente por fuerzas débiles del tipo de
Se basa en la interacción electrostática entre los grupos cargados del soluto y los
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y los grupos hidrofóbicos de los adsorbentes empleados.
adsorbente.
Matrices
Existen diversos tipos de materiales para la fabricación de columnas que se usan en el proceso
cromatografico.
Alrededor del 90 % de las matrices que se emplean actualmente están hechas de materiales que
forman geles de alto poder hidratante, los cuales se comercializan en forma de pequeñas esferas
cuyo diámetro varía entre 10 y 100 µm. (Tejeda A, Montesinos R, Guzmán R, 2011 p.366).
Los materiales con las que se fabrican las matrices pueden ser de 4 tipos:
Por otro lado, se puede distinguir dos tipos de geles desde un punto de vista funcional tales son
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Los geles microporosos se obtienen por entrecruzamiento puntual de polímeros lineales como
Existe una relación directa entre el tipo de cromatografía y el tipo de matriz empleada, a continuación se presentan
Cromatografía líquido-líquido
propilenglicol. Esta técnica es poco selectiva por lo que no es muy utilizada en el laboratorio, pero debido a
dextrano o poliacrilamida.
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Cromatografía por adsorción
La separación se basa en el hecho de que algunas biomoléculas como las proteínas presentan
residuos externos no polares, de tal manera que en soluciones no acuosas estos tienden a
La cromatografía que utiliza colorantes como ligandos, se basa en el hecho que cierto tipo de estos
Relaciones de Equilibrio
Las relaciones de equilibrio se expresan por medio de isotermas de adsorción o curvas que
relacionan la concentración en el equilibrio del soluto en la fase estacionaria y del soluto en la fase
móvil.
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Figura 3. Isotermas de Absorción muestran las características
del estado de equilibrio
Cinética de Absorción.
Algunos modelos utilizados para describir una operación cromatográfica toman en cuenta las
resistencias a la transferencia de masa involucradas en el proceso, las cuales pueden ser descritas
1. Difusión del soluto del seno del líquido a través de una película de líquido que rodea al
adsorbente.
3. Reacción reversible del soluto con el adsorbente (la reacción puede involucrar adsorción,
5. Contradifusión del soluto de la superficie del adsorbente hacia el seno dellíquido, a través de la
película de líquido.
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Diseño de Columnas Cromatografías
Una de las técnicas que ha recibido más atención en este sentido es la cromatografía,
particularmente en el arreglo tipo columna de lecho fijo. Tres conceptos se combinan para lograr
El modelo de la columna.
Los enfoques utilizados para describir los procesos cromatográficos están basados principalmente
en dos aspectos: a) tipo de isoterma: lineal o no lineal y b) presencia o ausencia de efectos cinéticos
(dispersión, resistencia a la transferencia de masa o cinética finita). Estos efectos cinéticos son
La suposición de una isoterma lineal se puede justificar en función de que un gran número de
sistemas cromatográficos se trabajan con muestras pequeñas, de tal manera que el rango de
concentraciones en la columna es bajo, y puede ser situado en el rango lineal de cualquier tipo de
Modelos Lineales.
Existen tres enfoques básicos para la obtención de estos modelos cromatográficos de columnas:
Teoría cinética
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Teoría de platos-cinética
o Modelo lineal.
Teoría de platos
Los modelos de platos teóricos son de los más utilizados en el análisis de la cromatografía por
elución. Sin embargo, estos modelos tienen sus limitaciones en lo que se refiere al diseño y
escalamiento de columnas, por lo que su uso es cada vez más limitado. Esto es debido a que estos
Según la Teoría de los Platos, una columna cromatográfica está constituída por una serie de platos
que contiene una fase estacionaria. Supone que el volúmen de fase estacionaria en cada plato es
constante; que el volúmen de fase móvil es constante de plato a plato; que en cada plato las dos
La principal desventaja de la Teoría de los Platos Teóricos es la falta de conexión entre la eficiencia
El balance de masa del soluto para la etapa n puede ser escrito como:
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donde:
F : Flujo de alimentación.
Pueden ser utilizadas para estimar el número de etapas de una columna a partir de datos
experimentales de concentración contra tiempo. Una vez calculada N y contando con la longitud
de la columna L, se puede obtener la altura equivalente de un plato teórico (HETP de sus siglas en
inglés) de la columna, la cual es una medida de la eficiencia de ésta, mediante la siguiente ecuación:
Teoría cinética
La Teoría Cinética considera el proceso cromatográfico en función de los factores cinéticos que
intevienen en él.
mediante los perfiles de concentración de los solutos obtenidos mediante balances de masa,
relaciones de equilibrio y expresiones cinéticas. Este enfoque resulta más complejo que el de la
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Siendo estos factores:
Las múltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su movimiento
del flujo.
Este modelo supone que sólo una resistencias controla la transferencia de masa. En el
El modelo de van Deemter (van Deemter et al., 1956) es uno de los más conocidos para
cromatografía por elución. Estos autores combinaron los resultados de la teoría de platos
con los del modelo cinético de Lapidus y Amundson (Lapidus y Amundson, 1952).
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PRECIPITACION
que es una operación que se usa con frecuencia al inicio de un proceso de bioseparación. Los
Las ventajas de usar la precipitación para la concentración y purificación desolutos son, entre
1. Es relativamente barata.
Fundamentos
Principio de precipitación.
de un agente precipitante. Este puede ser una sal neutra como el sulfato de amonio; un agente que
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altere el pH de la solución; un solvente orgánico como etanol, acetona o éter; o algún polímero
como el polietilenglicol.
Debido a su naturaleza anfotérica cuando una proteína se encuentra en solución acuosa produce
complejas interacciones con la solución que la rodea. Particularmente, cuando se agrega un agente
precipitante a la solución, las proteínas que presentan mayor hidrofobocidad (por contar con mayor
cantidad de aminoácidos hidrofóbicos en su superficie) precipitan más fácilmente que las de menor
hidrofobicidad. En el primer caso las proteínas tienen una baja solubilidad y en el segundo caso
solubilidad.
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Los métodos utilizados para la precipitación de proteínas que se revisan en esta sección y que están
basados en la disminución de la solubilidad por alteración del solvente son: a) precipitación con
no iónicos.
Una de las técnicas más ampliamente utilizadas para la purificación de enzimas es la llamada
precipitación por insolubilización por salado o “salting out” (Cheng et al., 2006), que se realiza
agregando altas concentraciones de sal a la solución en la que se encuentra la proteína para producir
su precipitación.
La descripción simplificada del mecanismo de insolubilización por salado está basada en el hecho
de que la adición de las sales elimina el agua de la proteína hidratada, dejando las regiones
precipitan más rápidamente que aquellas que presenten pocas regiones hidrofóbicas.
Debido a esta propiedad hay proteínas que pueden permanecer en solución a altas concentraciones
de sal.
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La fuerza ionica esta dada por:
donde:
Ci: Concentración del ión.
Zi: Carga del ión.
Precipitación isoeléctrica
Otra técnica muy utilizada para precipitar proteínas se basa en la disminución de su solubilidad en
el punto isoeléctrico.
Las proteínas por su naturaleza anfotérica presentan una carganeta negativa a pH altos y una carga
neta positiva a pH bajos. Existe un pH llamado pH isoeléctrico al cual la carga neta de la proteína
La precipitación de las proteínas de una solución también puede realizarse mediante la adición de
El agua se caracteriza por su alta constante dieléctrica , esto significa que los iones en solución
Cuando se agrega un solvente orgánico como etanol o acetona, a una solución acuosa de proteínas
precipitar.
proteína por acción del solvente, de tal manera que es importante seleccionar adecuadamente éste.
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la cadena alquilo se incrementa.
polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes. Dichos polímeros de elevado peso molecular
son solubles en agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas (Guo et al., 1996).
claramente establecido, sin embargo existen dosmodelos que permiten una buena comprensión de
este fenómeno. Los modelos desarrollados por Ogston y Laurent (Clark, 1989) conducen a una
ecuación de solubilidad y sugieren que los polímeros excluyen a las proteínas de parte de la
polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes. Dichos polímeros de elevado peso molecular
son solubles en agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas (Guo et al., 1996).
Diseño de pecipitadores
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adecuada de la geometría en que se realizará el proceso. Con base a lo anterior, esta sección se
Cinética de la Precipitación.
Cinética de Precipitación
En este apartado se revisan los aspectos cinéticos relacionados con la precipitación sin que ocurra
desnaturalización de la proteína.
En una solución proteica las moléculas presentan por efecto de su energía cinética un movimiento
al azar que produce choques entre sí. Para que las moléculas de proteína queden asociadas al chocar
se requiere eliminar tanto las barreras producidas por las moléculas de agua que las rodean, como
fases siguientes:
1. Mezclado inicial: la solución proteica se mezcla con el agente precipitante para eliminar las
barreras.
3. Crecimiento limitado por difusión (crecimiento percinético): en esta fase los núcleos van
creciendo conforme la proteína difunde del seno de la solución hasta los núcleos. La frecuencia de
las colisiones está limitada por la velocidad de difusión de las moléculas y no por el mezclado. Se
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4. Crecimiento inducido por el esfuerzo de corte (crecimiento ortocinético): el mezclado favorece
6. Separación: los flóculos se remueven de las solución mediante un método de separación sólido-
Métodos de Diseño
El proceso de crecimiento de las partículas en la precipitación puede estar limitado por varios
mecanismos.
por el agente precipitante durante el tiempo en que éste se agrega a la solución, entonces
las condiciones iniciales de precipitación del material son diferentes a las condiciones
finales. Para disminuir este efecto el agente precipitante debe agregarse lentamente y bien
dispersado.
En un precipitador por lotes todas las partículas son sometidas a fuerzas de corte similares,
y cuando éstas son controladas, se producen partículas primarias más grandes que las
Precipitadores continuos
ocurre la precipitación. Las fuerzas de corte a las que están sujetas las partículas pueden
ser las que produce el flujo laminar, aun cuando la velocidad media de corte puede exceder
a la de un tanque agitado.
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En un reactor continuo tipo tanque agitado la proteína es puesta en contacto
precipitador por lotes, y las partículas estarán sujetas a las fuerzas de corte durante el
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Referencias Bibliográfica.
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm
https://slideplayer.es/slide/13238657/
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