Aislamiento e Identificación de Mycobacterium Tuberculosis

Las micobacterias han causado enfermedad en el hombre desde el comienzo mismo

de la época histórica; en momias egipcias han sido identificadas claramente lesiones
causadas por micobacterias. Mycobacterium tuberculosis, es el agente causal de la
tuberculosis y es responsable de un gran número de muertes y de una gran morbilidad
en muchos países. La pared celular de las bacterias contiene ácido mícólico que son
ácidos grasos de cadena larga con múltiples uniones cruzadas. Los ácidos micólicos
hacen que sea difícil colorear su pared y le confiéren la características de ácido alcohol
resistencia. Otra micobacteria de importancia es Mycobacterium Leprae,
microorganismos mismo no cultivable in Vitro. Estos microorganismos son aerobios
inmóviles.

La investigación bacteorologica en tuberculosis comprende la realización de la

baciloscopía, cultivos, pruebas de sensibilidad y tipificación.

I. DIAGNOSTICO PRESUNTIVO:
Examen directo – Baciloscopia
- Col. Ziehl Neelsen: BAAR
Especificidad del 98 % y sensibilidad del 60 – 80 %
- Kinyoun: BAAR
- Rodamina auramina
RESULTADO DE LA BACILOSCOPIA:
Negativo (-): No se encuentra BAAR en 100 campos observados
Positivo (+): Se observa menos de 1 BAAR promedio por campo en 100 campos
observados
Positivo (++): Se observa de 1 a 10 BAAR promedio por campo en 50 campos
observados
Positivo (+++): Se observa más de 10 BAAR promedio por campo en 20 campos
observados.
M. Paucibacilar: Se observa de 1 a 9 BAAR en 100 campos microscópicos observados.
II. DIAGNOSTICO DEFINITIVO: CULTIVO.
Especificidad del 100% y sensibilidad del 80 – 90%

1. Descontaminación, homogenizacón y/o conce ntración de la muestra: Agregar NaOH

y centrifugar la muestra.
2. Aislamiento: Siembra por bañado en el medio de cultivo: Ogawa, Lowestein jensen,
Middlebrook
 Incubar a 37ºC entre 8-12 a 60 días.

Material
- Muestra de esputo de pacientes sospechosos de tuberculosis
- Tubos con medio de ogawa
- Láminas portaobjetos nuevos
- Set. De colorantes Ziehl Neelsen

Procedimiento.
  Examen directo
Es una herramienta fundamental rutinaria para el diagnóstico de la tuberculosis y
el seguimiento del tratamiento de los pacientes con tube rculosis.
El examen directo de esputo se realiza mediante la coloración Ziehl Neelsen
denominado Baciloscopía, tiene una especificidad del 98% y sensibilidad del 60 -
80%.
Otros métodos directos son Kinyoun y Rodamina -auromina

 Cultivo
a. El cultivo de Mycobacterium Tuberculosis permite diagnosticar los casos que
presentan baciloscopía negativa, y aporta hasta un 20% más de conformidad
bacteriológica (especificidad del 100% y sensibilidad del 80 -90%).

Antes de la siembra se debe de descontaminar las muestras que así lo

requieran, como esputo y otras contaminadas, para ello se procede a
agregarle igual cantidad al de la muestra de un álcali como el NaOH por un
tiempo promedio de 20 minutos, durante ese t iempo se debe hacer
centrifugado e incubado en baño Maria acto seguido siembran y las muestras
como LCR se siembran directamente.Se deja incubar a 37°C hasta 60 días.

b. Identificación
- Estudio macro morfológico de la colonia: Colonias secas, rugosas, polimorfas,
cremas o amarillas (coliflor).
- Estudio microscópico de la colonia: Ziehl Neelsen. BAAR
- Estudio bioquímico.
. Test de niacina
. Reducción de nitratos
. Catalasa
. Hidrólisis del Tween 80
. Reducción de telurito

1. Calificar las colonias típicas que deben haber desarrollado transcurrido

las 8 días a mas, con las siguientes características: Colonias secas,
rugosas, polimorfas y con dimensiones muy variables de color crema y
excepcionalmente algo rosado “cabeza de coliflor”.

2. Realizar la identificación microscópica, haciendo un Ziehl Neelsen de la

colonia.
 3. Realizar las pruebas bioquímicas:
- Test. de niacina
- reducción de nitratos
actividad Catalasa
- Hidrólisis del Tween 80
- Reducción de telúrico

Resultados
- Cuantificar los BAAR en el Ziehl Neelsen del examen directo.
- Cuantificar las colonias:
(-) no se observan ninguna colonia
No de colonias totales cuando son menos de 20
(+) De 20 – 100 colonias
(++) Mayor de 100 colonias
(+++) Toda la superficie