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TÉCNICAS DE SIEMBRA, TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO & ECOMÉTRICO

SEEDING TECHNIQUES, TYPES OF CULTURE & ECOMETRIC MEDIA

Natalia García Cabezas -Daniela Fernanda Navas González - Laura Viviana Muñoz Torres

Facultad de Ingeniería y Ciencias Básicas,


Universidad Central

OBJETIVOS:

 Realizar técnica de cultivos de hongos y bacterias para determinar la selectividad y


productividad de un medio con sus correspondientes microorganismos y características
diferenciales.

 Identificar y analizar la observación macroscópica y siembra con su respectiva preparación y


montaje para hongos y bacterias.

MARCO TEÓRICO

Un medio de cultivo es una mezcla de diversos nutrientes que en concentraciones adecuadas permite
el crecimiento de microorganismos, bajo determinadas condiciones físico-químicas. La composición
química de los medios de cultivo es variada, sin embargo, todos ellos contienen una fuente de energía
que puede ser compuesto orgánico o inorgánico, una fuente carbonada, sales minerales, vitaminas y
agua (Campos, 2013).

La población de microorganismos que se desarrolla en un medio de cultivo se denomina cultivo,


cuando este cultivo contiene una sola especie de microorganismo se denomina cultivo puro o axénico;
cuando contiene más de una especie se denomina cultivo mixto, en donde, en un cultivo mixto viven
muchas y diferentes especies de microorganismos en forma conjunta.
Un cultivo axénico se obtiene de forma artificialmente en el laboratorio y para su producción se
deben tomar precauciones necesarias para que obtener un resultado óptimo que genere un buen estado
de análisis sobre las muestras estudiadas, entre ellas están asegurarse de trabajar en un ambiente de
asepsia, teniendo la opción de implementar una campana de flujo laminar o de trabajar cerca de la
flama de un mechero. Esto, debido a que los microorganismos se encuentran en todas partes y hay
mayor probabilidad de contaminación de muestra si no se desarrolla con precisión (Bou et al., 2011).

Existen varios métodos de siembra de microorganismos. Los métodos más relevantes son el método
de siembra por estría en placa y el método de extensión en placa.

El método por estría es el más sencillo de implementar y común en trabajos de laboratorio con el
objetivo de obtener cultivos axénicos. Este se basa en que a través de un asa se toma una muestra de
la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido, conforme
se van haciendo estrías en forma zigzag con el asa. A su vez se van depositando en la superficie del
medio menor cantidad de microorganismos, en donde quedan separados e inmovilizados; posterior a
esto, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la
siembra con la misma técnica en la superficie que aún se presenta sin sembrar. Este proceso se repite
hasta lograr aislar células individuales y finalmente las placas trabajadas se incuban permitiendo y
favoreciendo para que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para
formar colonias visibles.

Por otro lado, en el método por extensión en placa, las células microbianas se diluyen en forma seriada
antes de su siembra. Estas muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de
agar y se extienden con ayuda de un asa de Drigalsky de cristal estéril, para su respectiva esterilización
se sumergen en alcohol y se flamean antes de tener contacto con la muestra diluida. A partir de
colonias suficientemente separadas; el éxito del aislamiento depende directamente de la superficie
sobre la que se ha distribuido la muestra (Carrillo et al., 2007).

Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que se producen en
cada división continúan su vida independientemente formándose una suspensión de células libres. En
un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar cuatro fases en la
evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:

 Fase lag o de adaptación: En esta fase los microorganismos adaptan su metabolismo a las
nuevas condiciones ambientales como los son los nutrientes y condiciones de cultivo para
iniciar la fase de crecimiento exponencial.
 Fase exponencial o logarítmica: Se presenta la velocidad de crecimiento máxima y el tiempo
de generación mínimo consumiendo las bacterias a velocidad máxima los nutrientes del
medio.
 Fase estacionaria: Es aquella donde no se incrementa el número de bacterias y desarrolla un
metabolismo diferente al de la fase exponencial. Durante esta, se produce una acumulación
y liberación de metabolitos secundarios para el campo industrial.
 Fase de muerte: Se produce una reducción del número de bacterias viables del cultivo (Rojas,
2011).

Para el caso de los cultivos sólidos, la cinética de crecimiento se puede estudiar siguiendo la evolución
del número de células viables por unidad de superficie o por unidad de masa. Cuando una célula
aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, el resultado del crecimiento al cabo del
tiempo es una colonia. Por consiguiente, se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una
célula bacteriana viva y aislada que si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales
adecuadas da lugar a la producción de una colonia en un breve lapso de tiempo.

Si el número inicial de bacterias por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias
da lugar a lo que se llama un césped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio. En el
caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos que tienen un
crecimiento trófico no se producen colonias aisladas sino formaciones más difusas o miceliares
(Vázquez et al., 2011).

Los utensilios utilizados para la transferencia de muestras son los siguientes: Hisopo, pipeta (para uso
microbiológico son terminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida con filtro de
algodón), pipeta Pasteur, cable de Kolle o portasa con alambre de platino dispuesto en forma de:
aguja, asa, espátula y/o gancho (Monge-Montero, S.F).

En la transferencia de microorganismos se emplean agujas, asas de inoculación, hisopos, pipetas o


pipetas Pasteur que deberán esterilizarse previamente. La utilización de estos dispositivos, así como
de los diferentes medios de cultivo tienen aplicaciones específicas.

Los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodón o tapones
especiales. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo particular que se
manifiesta en la superficie o a través de todo el líquido. Una de las ventajas que presenta este tipo de
cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de microorganismos anaerobios,
por otra parte, en este tipo de cultivos, las poblaciones se encuentran suspendidas y es fácil
homogenizarlas, lo que permite estandarizar la concentración del inóculo. La desventaja que
presentan, es que en ellos es difícil detectar contaminación a simple vista.

Los medios semisólidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o pipeta
Pasteur; en este último caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra en estado líquido y
a una temperatura de aproximadamente 42ºC se agrega el inóculo, se homogeniza y se deja solidificar.
Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la
separación de microorganismos con diferentes requerimientos de oxígeno Campos (Radillo, 2013).

Los medios sólidos se preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades,
después de esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas de Petri. La siembra se realiza con el asa,
inoculando la superficie del agar con mucha suavidad; en estos medios, los microorganismos al
multiplicarse forman agregados que se hacen visibles a simple vista; a estos agregados se les
denominan colonias, las que presentan características que varían con el tipo de microorganismo
cultivado y el medio de cultivo empleado (Stanier & Villanueva, 1996).

Con este mismo propósito durante la incubación se deben proporcionar las condiciones adecuadas
para el microorganismo en estudio. El crecimiento óptimo de los microorganismos se presenta a
temperaturas que la mayoría de las veces están relacionadas con la de su hábitat natural.
operativo. Recuperado de
https://portal.ica.gov.co:447/DocManagerSw
CONCLUSIONES ift/Public/EViewer.aspx?E=63365208B719E
8EDA54D21EE0B766F8E
 Con la practica anterior, se logró
desarrollar técnicas de cultivos de  INDIVIDUALES, H. D. T., IMPARTE,
hongos y bacterias para determinar la G., SE, O., & OFERTAR, P. (2002).
selectividad y productividad de un Fundamentos de Microbiología.
medio con sus correspondientes  Monge-Montero, A. C. Aseguramiento
microorganismos y determinando y control de calidad en la producción de
características diferenciales entre sí.
medios de cultivo
Con esto, se puede concluir la
importancia del conocimiento de las microbiológicos. Nota del editor, 45.
propiedades de las técnicas de cultivos  Padilla González, J. E. Validación
para implementarlas de la mejor manera secundaria del método de recuento en
según el propósito de la practica con el placa de superficie de bacillus cereus y
objetivo de tener óptimos resultados. staphylococcus en muestras de
alimentos en una laboratorio de
 Por otra parte, se identificó y analizó la
observación macroscópica de la siembra referencia (Bachelor's thesis, Facultad
de hongos y bacterias a través de su de Ciencias).
respectiva preparación y montaje  Rojas Triviño, A. (2011). Conceptos y
comprendiendo la precisión con la se práctica de Microbiología general.
debe desarrollar la practica para  Stanier, R. Y., & Villanueva, J. R.
presentar el mínimo porcentaje de
(1996). Microbiología. Reverté.
contaminación en el cultivo.
 Vázquez, C., Martín, A., de Silóniz, M.
I., & Serrano, S. (2011). Técnicas
básicas de Microbiología. Observación
de bacterias. Reduca (Biología), 3(5).
REFERENCIAS  Villalovos A. et al. (s.f). EVALUACIÓN
 Bou, G., Fernández-Olmos, A., García, POR MÉTODO ECOMÉTRICO DE AGAR
C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S. OBTENIDO DE ALGAS ROJAS
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bacteriana en el laboratorio de SCIENTIARUM Revista de la Facultad de
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 Campos Radillo, J. E. (2013).
Evaluación de los medios de cultivos
para verificar su reproductibilidad y
seletividad.
 Carrillo, L., Audisio, M. C., & Bejarano,
N. (2007). Manual de Microbiología de
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 ICA. Preparacion y verificación de la
calidad de medios de cultivo. Instructivo