Guía 3.

Caracterización de la hidroxiapatita

Introducción

Entre los minerales más representativos del grupo apatita, se encuentra la hidroxiapatita (HAP), un compuesto
de composición Ca10(PO4)6(OH)2 que según las condiciones de preparación puede encontrarse a temperatura
ambiente, en la simetría monoclínica o la simetría hexagonal. La hidroxiapatita es el mayor componente
inorgánico del hueso mineral (incluyendo los dientes, proporcionando dureza, densidad y estabilidad mecánica)
y se considera el material más atractivo para implante óseo, debido a su similitud tanto en composición como
en características biológicas con el hueso natural. Hasta ahora este material se ha usado para varias aplicaciones
biomédicas, entre ellas el recubrimiento de implantes por su excelente bioactividad, promoción de la función
celular y osteoconductividad. El método más común para la obtención de HAP es el de precipitación, con el que
se obtienen cantidades apreciables del material de forma económica y fácilmente reproducible. En este método,
sin embargo, se deben controlar el pH, la temperatura de reacción, el tiempo de la reacción, la atmósfera de
tratamiento y la relación Ca/P de los reactivos, para impedir la aparición de otras fases como los ortofosfatos.
Una HAP apropiada para cualquier aplicación específica debe controlar su composición, las impurezas,
morfología, cristalinidad, tamaño del cristal y de las partículas. Las variaciones pequeñas en las anteriores
características ocasionan diferentes comportamientos del material, tanto en su bioactividad, como en el rango
de disolución y de reabsorción.

Para evaluar las características de la HAP obtenida en la práctica 2, se cuantificarán los contenidos de fósforo
(como ortofosfato) por espectrometría UV/Vis (con la formación de un heteropoliácido usando el reactivo
vanado-molíbdico en medio ácido) y de calcio, por una reacción de formación de complejos (por medio de
análisis volumétrico, usando como agente acomplejante el ácido etilendiamino-tetraacético - EDTA). Se
determinarán también las frecuencias de vibración características de la HAP por espectroscopia FT-IR.

Objetivos

El estudiante:

 Caracterizará la hidroxiapatita obtenida en la síntesis ácido-base.

 Calculará las cantidades necesarias de todos los reactivos de la práctica.
 Determinará el contenido de Ca y P en la muestra.
 Analizará el espectro FT-IR de la HAP obtenida.

Tareas de aprendizaje para el preinforme

Los estudiantes realizarán la consulta (RAE: búsqueda de información en una fuente de documentación para
aprender una cosa o para aclarar una duda) sobre:

 Consulte diferentes métodos o procesos que sirvan para la caracterización físico-química de la HAp.
 Consulte cómo hacer la preparación de la muestra de HAP para analizar su contenido de Ca y P.
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  Consulte todas las condiciones de trabajo necesarias para el análisis de fósforo (como ortofosfato) por
el método vanado-molibdato.
 Consulte la ley de Beer-Lambert (UV/Vis) y su aplicación en la calibración por patrón externo (manera en
la cual cuantificarán el P).
 Consulte todas las condiciones de trabajo necesarias para el análisis de calcio por complejometría con
EDTA.
 ¿Qué es la espectrofotometría infrarroja? Consulte el espectro infrarrojo de la HAp.
 ¿Qué es la difracción de rayos X y cómo se utiliza en el análisis de la HAP?

Procedimiento

Primero, determine la masa total del producto calcinado que obtuvo.

Preparación de la muestra problema de HAP

En un vaso de precipitados, disolver la cantidad calculada de hidroxiapatita (recomendación, alrededor de 0,13

g) en ácido nítrico (menos de 20 mL), llevar a volumen en un balón de 50 mL (SOLUCIÓN A).

Determinación de ortofosfatos por espectrofotometría UV/Vis

Reactivo vanado-molibdato (único para todos): En unos 400 mL de agua destilada, disolver 20 g de
heptamolibdato de amonio. Preparar una segunda disolución de 0,5 g de metavanadato de amonio en 300 mL
de agua y añadir 100 mL de ácido nítrico concentrado. Mezclar ambas disoluciones en un matraz aforado de un
litro y enrasar con agua destilada.

Disolución patrón de ortofosfato (100 mg/L) (única para todos): Preparar 100 mL de disolución patrón en
matraz aforado disolviendo la cantidad adecuada (calcúlela para el preinforme) de 𝑵𝒂𝑯𝟐 𝑷𝑶𝟒 ∙ 𝑯𝟐 𝑶 en agua
destilada.

Calibrado externo (una sola curva para todos): En balones aforados de 25 mL se pipetean alícuotas de la
disolución patrón de ortofosfatos de forma que la concentración final sea de 1, 3, 5, 10, 15 y 20 mg/L (calcule
las cantidades para el preinforme). Se agrega 10 mL de la disolución de vanado-molibdato a cada balón y se
procede a enrasar con agua destilada. Agitar cada balón para homogenizar y dejar en reposo 10 minutos para
que tenga lugar el desarrollo del color.
Preparar además un blanco (25 mL, con 10 mL de la disolución del reactivo vanado-molibdato, completando con
agua destilada, sin fosfato).

Muestra problema HAP: De la SOLUCIÓN A preparada anteriormente, tomar 1 mL (alrededor de lo que

calcularon) y diluirlo con agua destilada hasta 50 mL (SOLUCIÓN B). Tomar 10 mL de esta última solución y llevar
a un balón de 20 o 25 mL, agregar 10 mL del reactivo vanadato-molibdato y completar con agua destilada de
ser necesario. Deje desarrollar el color por lo menos 10 minutos.

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Medidas de absorbancia: Ajustar el espectrofotómetro para medidas de absorbancia a una longitud de onda de
420 nm. Introducir la muestra llamada blanco y ajustar el cero. Medir la absorbancia de las muestras de
calibrado externo y la muestra problema de HAP a esa misma longitud de onda. Construir la recta de calibrado
según la ley de Beer-Lambert y determinar la concentración de la muestra problema (OJO, tenga en cuenta
todos los factores de dilución involucrados).

Determinación de calcio por complejometría con EDTA

Tomar un volumen de la SOLUCIÓN A (el calculado por ustedes para gastarse aproximadamente 10 mL de EDTA
0,02 M) y disponerlo en un erlenmeyer. Agregar agua destilada (aprox 25 mL). Como la muestra tiene carácter
ácido, adicionar solución de hidróxido de sodio hasta que el pH sea neutro. Agregar 2 mL de la solución buffer
de pH 10 al erlenmeyer. Adicione 2 o 3 gotas del indicador negro de eriocromo T, el color debe tornarse rojo
vino. Llenar una bureta con la solución de EDTA 0,02 M y empezar a titular la muestra problema hasta viraje del
indicador a color azul. Con el volumen gastado de EDTA calcular la cantidad de calcio presente y relacionarla
con el contenido de HAP. Calcule la relación Ca/P experimental en la HAP y compárelo con lo esperado según la
fórmula química.

Espectrofotometría FT-IR

Triture un poco su muestra, hasta obtener un “polvo fino”. Tome el espectro infrarrojo de su muestra y
compárelo con el encontrado en la Literatura. Haga un análisis de todas las bandas.

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