UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA y a DISTANCIA

ZONA CENTRO BOGOTÁ – CUNDINAMARCA

CEAD JOSÉ ACEVEDO y GÓMEZ
ESCUELA Ciencias Básicas, Tecnologías e Ingenierías - ECBTI

PROGRAMA: tecnología regencia de farmacia

CURSO: bioquímica
GRUPO:
NOMBRE TUTOR TEORÍA: Carlos López
CORREO TUTOR TEORÍA: carlosa.lopez@unad.edu.co

PREINFORME Practica No. 5. Cuantificación de proteínas

ESTUDIANTE: Soranny Pastrana Ortiz Commented [C1]: escriba el nombre completo del estudiante
que elaboró el documento.
FECHA DE LA PRÁCTICA: 1 de noviembre de 2019
CIUDAD: Bogotá
FECHA DE PRESENTACIÓN INFORME: 1 de noviembre de 2019
RESULTADO

OBJETIVOS Commented [C2]: representan las metas de aprendizaje

propuestas por el estudiante; se construyen a partir del análisis
 Determinar el contenido total de proteína en una muestra de alimento del objetivo propuesto para la práctica. MÁXIMO 4
utilizando el método espectrofotométrico de Bradford ORACIONES.

FUNDAMENTO TEÓRICO Commented [C3]: es una síntesis de los conceptos necesarios

para entender los fundamentos teóricos de la experiencia. Se
Las proteínas son moléculas de alto peso molecular, que contienen carbono, puede presentar como escrito o en forma de mapa conceptual
hidrógeno, oxígeno y con frecuencia, azufre. Las unidades fundamentales de las MÁXIMO 2 PÁGINAS

proteínas son los aminoácidos, compuestos orgánicos que contienen grupos amino
y carboxilo y que, por lo tanto, tienen propiedades anfotéricas; los aminoácidos se
unen por enlaces peptídicos para formar dipéptidos, oligopéptidos y polipéptidos.
Se considera que las proteínas están formadas por polipéptidos que adquieren
diferentes configuraciones espaciales. Las propiedades fisicoquímicas de las
proteínas están determinadas por la secuencia de aminoácidos (estructura
primaria), su configuración espacial, las fuerzas interiónicas, puentes de hidrógeno
(estructuras secundaria y terciaria). Las proteínas se pueden clasificar de manera
general en proteínas globulares y fibrosas. Las proteínas globulares son aquellas
que tienden a agregarse en formas esferoidales y no establecen fuertes
interacciones intermoleculares, como si lo hacen las proteínas fibrosas. De tal
manera que las proteínas globulares son solubilizadas generalmente en forma de
suspensiones coloidales.

En general, existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos

de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para
absorber luz en el UV, b) la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que
tienen las proteínas de unir ciertos colorantes. Específicamente, el método de Biuret
es uno de los métodos más utilizados debido a su simplicidad. Se basa en la
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formación de un complejo coloreado en medio básico entre el Cu 2+ y los grupos NH

de los enlaces peptídicos. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH (Figura 1). La intensidad
de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces
peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias
interfieren, Sin embargo, la sensibilidad del método es muy baja y sólo se
recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados.
Método de Bradford: El ensayo de Bradford, originalmente descripto por la Dr.
Marion Bradford en 1976, es una de los métodos más populares para la
determinación de la concentración de proteínas. Se basa en la formación de un
complejo entre el colorante azul brillante de Coomassie G-250 y las proteínas en
solución. El colorante libre existe en cuatro formas iónicas. La forma azul más
aniónica se une a proteínas y absorbe a 590 nm. La concentración de proteínas
puede ser evaluada determinando la cantidad de colorante en su forma iónica azul
y midiendo la absorbancia de la solución a 592 nm utilizando un espectrofotómetro
[16]. El colorante se une principalmente a residuos de arginina, triptófano, tirosina,
histidina y fenilalanina.
PROCEDIMIENTO Commented [C4]: presenta gráficamente el conjunto de
actividades a desarrollar en cada práctica.

Pesar 0.1 g colocar la en añadir 30ml de

agregar gota a gota una disolucion concentrada de NaOH 1N hasta completar la

disolucion proteica

Pasar esa disolución a un y aforar. Esta es la

disolución problema y de estas se tomaran las alícuotas.
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Para la muestra problema de leche : tomar 0.1 ml de y

realizar la disolución de 1:00vol.final:1ml). Sin la concentración de la
proteína no se encuentra dentro del rango de absorbancia preparar
disoluciones de 1:20,1:100,y 1:1000de la solución inicial

Separar en dos grupos los seis primeros se utilizan para

obtener la curva patrón y los otros seis para analizar la muestra problema ,
tubo 1 contendrá el blanco, tubo 2 al 6 adicionar los siguientes volúmenes :
1.1ml, 0.2ml, 0.4ml, 0.8ml y 1.0ml de solución de albumina sérica
bovina)respectivamente.

Los 7 al 12 se tratara con la muestra problema y el reactivo de

Bradford con la misma cantidad 3ml se homogeniza la solución con un

solamente al tubo 1 se le agregaron 3ml de reactivo

de Bradford y 3ml de NaCl
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Llevar a 100º c durante 10 minutos hasta la formación del

complejo. Dejar reposar las soluciones hasta alcanzarla temperatura
ambiente. Uno con y el otro sin calentar)
Realizar la cuantificación de la solución por medio de un

a 595 nm para el reactivo de Bradford entre cada

medición lavar las celdas; al tener todas las mediciones realizar la curva de Commented [C5]: Ofrece las fuentes de información analizadas
calibración por el autor para el desarrollo delPreinforme.
Ejemplo:
Realice y grafique la regresión lineal a partir de los datos de la curva de Campbell, N Mitchell L y Reece J. (2001). Biología conceptos y
calibración realizada con la albumina de suero bovino y halle las relaciones. México. Pearson Educación.

concentraciones de la muestra problema. Folch, A. (2010). La guía para emplear edmodo. Extraído el 17
de agosto de 2011 desde:
http://antoniocc.wordpress.com/2010/05/29/guia-para-
Referencias edmodo-en-espanol/
 Extraído el 26 de octubre desde: http://www.labome.es/method/Protein- Commented [C6]: Ofrece las fuentes de información analizadas
Quantitation.html por el autor para el desarrollo delPreinforme.
 Extraído el 26 de octubre desde: Ejemplo:
Campbell, N Mitchell L y Reece J. (2001). Biología conceptos y
https://www.google.com/search?q=caseina&sxsrf=ACYBGNSBKYsIQaN_kxxNml3bOEBFw6 relaciones. México. Pearson Educación.
6TDA:1572624477417&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjaot3assnlAhXKtVkK
Folch, A. (2010). La guía para emplear edmodo. Extraído el 17
HVXjBqAQ_AUIEigB&biw=1821&bih=876#imgrc=9MmQYnBoPusrKM: de agosto de 2011 desde:
 Extraído el 26 de octubre desde: http://antoniocc.wordpress.com/2010/05/29/guia-para-
edmodo-en-espanol/
https://www.google.com/search?biw=1821&bih=876&tbm=isch&sxsrf=ACYBGNRbLbwH9
XJJwdElQok8aWkQH- Commented [C7]: Ofrece las fuentes de información analizadas
por el autor para el desarrollo delPreinforme.
8irA%3A1572624481203&sa=1&ei=YVi8XdT0C_GyggeFk4LwDA&q=vaso+de+precipitado& Ejemplo:
oq=vaso+&gs_l=img.1.0.35i39j0l9.78217.80693..82281...1.0..0.147.1329.0j11......0....1..gw Campbell, N Mitchell L y Reece J. (2001). Biología conceptos y
relaciones. México. Pearson Educación.
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 Extraído el 26 de octubre desde: Folch, A. (2010). La guía para emplear edmodo. Extraído el 17
.https://www.google.com/search?biw=1821&bih=876&tbm=isch&sxsrf=ACYBGNRGYaDbS de agosto de 2011 desde:
http://antoniocc.wordpress.com/2010/05/29/guia-para-
n62IKwG_86AunZb5nCSOQ%3A1572624697658&sa=1&ei=OVm8XavjJ8eOggeLk7_4Dg&q= edmodo-en-espanol/
solucion+de+nacl+al+1%25&oq=solucion+de+nacl+al+1%25&gs_l=img.3...6220.11721..130 Commented [C8]: Ofrece las fuentes de información analizadas
44...0.0..0.134.958.0j8......0....1..gws-wiz- por el autor para el desarrollo delPreinforme.
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Campbell, N Mitchell L y Reece J. (2001). Biología conceptos y
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 Extraído el 26 de octubre desde:
Folch, A. (2010). La guía para emplear edmodo. Extraído el 17
https://www.google.com/search?biw=1821&bih=876&tbm=isch&sxsrf=ACYBGNSELUuxElJ de agosto de 2011 desde:
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edmodo-en-espanol/
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 Extraído el 26 de octubre desde: Commented [C9]: Ofrece las fuentes de información analizadas
por el autor para el desarrollo delPreinforme.
https://www.google.com/search?biw=1821&bih=876&tbm=isch&sxsrf=ACYBGNQMHBOc Ejemplo:
q_0hY0W- Campbell, N Mitchell L y Reece J. (2001). Biología conceptos y
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http://antoniocc.wordpress.com/2010/05/29/guia-para-
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 Extraído el 26 de octubre desde:
https://www.google.com/search?biw=1821&bih=876&tbm=isch&sxsrf=ACYBGNQGhTGBs
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 Extraído el 26 de octubre desde:
https://www.google.com/search?biw=1821&bih=876&tbm=isch&sxsrf=ACYBGNQX-
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 Extraído el 26 de octubre desde:
https://www.google.com/search?tbm=isch&sxsrf=ACYBGNRaU5vbpJBrLUAPdXLtiz8VRbQ0
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