Ovozoa (Jurnal Reproduksi Hewan) Vol. 3, No.

2, Oktober 2014
274
ISSN: 2302-6464

ADDITION OF CATTLE SEMINAL PLASMA TO SPERM QUALITY GOAT

ON FREEZING PROCESS WITH TIME EQUILIBRATION DIFFERENT

PENAMBAHAN PLASMA SEMINALIS SAPI TERHADAP KUALITAS

SPERMATOZOA KAMBING PADA PROSES PEMBEKUAN DENGAN
WAKTU EKUILIBRASI YANG BERBEDA

Suherni Susilowati1), Trilas Sardjito2) dan Indah Norma Triana3)

1, 2, 3)
Departemen Reproduksi Veteriner
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga
Kampus C Unair, Jl. Mulyorejo Surabaya-60115
Telp.031-5992785, Fax.031-5993015
email: greatanesya@gmail.com

ABSTRACT

Equilibration is the time required for adjustment spermatozoa with diluent and glycerol.
Long equilibration can affect the quality of spermatozoa in the clotting process. In addition to
the current freezing of goat semen has not been satisfactory because as in goat seminal plasma
contained enzyme phospholipase A and lipase enzymes trigliserol can reduce the motility of
spermatozoa in milk diluents. The purpose of this study is to investigate the addition of seminal
plasma on spermatozoa cow goat centrifugation results in a dilution of milk with different
equilibration time in the freezing process. Cattle seminal plasma obtained from cows cement
shelter, then the plasma was separated and then used for processing. Cattle seminal plasma was
then added to the centrifugation results goat spermatozoa diluted with skim milk. This study
consisted of three groups: Control group P0 : Addition of seminal plasma in the cow goat
spermatozoa centrifugation results in dilution of skim milk with equilibration time of 1 hour,
Group P1: Addition of seminal plasma in the cow goat spermatozoa centrifugation results in
dilution of skim milk with equilibration time 2 hours. Group P2: the addition of seminal plasma
in the cow goat spermatozoa centrifugation results in dilution of skim milk with equilibration
time of 3 hours. Then examined motility, viability and plasma membrane integrity of
spermatozoa. The results showed that the addition of seminal plasma of cattle maintain motility,
viability and plasma membrane intact spermatozoa in diluents goat milk with different
equilibration times in the clotting process.
Key words: Seminal Plasma cow, goat spermatozoa, equilibration, motility, viability and intact
plasma membrane

Pendahuluan dapat mempengaruhi viabilitas, motilitas

Plasma seminalis dari semen terdiri da-
ri bermacam-macam komponen biokimia
yang spesifik yang mengatur fungsi sper-
matozoa. Menurut Riadi (2004) komposisi
utama plasma semen adalah air dan juga
beberapa substansi organik dan anorganik.
Plasma seminalis juga mengandung faktor
dekapasitasi (DF) yang pada waktu ejaku-
lasi melapisi permukaan spermatozoa. Fak-
tor-faktor dekapasitasi tersebut akan mengi-
kat permukaan spermatozoa mengaktifkan
kalsium intraseluler-ATP ase untuk mem-
pertahankan konsentrasi kalsium intaseluler
tetap rendah (Baldi et al, 2000). Faktor
yang terdapat didalam plasma seminalis
dan integritas membran spermatozoa dalam
keadaan dingin (Beatriz et al, 2000). Pe-
nambahan plasma seminalis pada proses
pembekuan semen domba dapat memper-
baiki motilitas, viabilitas dan integritas
akrosom (Blanco, et al 2008). Plasma se-
minalis menambah persentase spermatozoa
yang motil selama pendingingan, pembeku-
an dan thawing (Graham, 1994). Plasma
seminalis mamalia mempunyai fungsi
menghambat maupun merangsang fungsi
spermatozoa. Komponen plasma seminalis
khususnya protein akan melapisi permuka-
an spermatozoa setelah ejakulasi pada wak-
tu melalui saluran reproduksi betina

274

Suherni Susilowati, dkk.
(Blanco et al, 2008). Perbaikan terhadap
membran plasma sel akan berpengaruh
positif terhadap proses-proses biokimia di
dalam sel dan pada akhirnya dapat mem-
perbaiki kualitas spermatozoa yang lain se-
perti motilitas dan viabilitas spermatozoa.
Penelitian biomolekuler membuktikan bah-
wa dengan penambahan beberapa protein
saja dapat memperbaiki proses fertilisasi
tetapi juga dapat mempertahankan kehi-
dupan sel.
Sampai saat ini proses pembekuan
semen kambing masih belum memuaskan,
hal ini disebabkan karena plasma seminalis
kambing mengandung egg-yolk coagulating
enzyme yang diduga adalah enzim fosfo-
lipase A dari kelenjar bulbourethralis yang
dapat mengkoagulasi kuning telur dalam
bahan pengencer (Evans and Maxwell,
1988). Selain itu dalam plasma semen
kambing juga terdapat trigliserol lipase
yang disekresikan oleh kelenjar bulboure-
tralis dan bila berinteraksi dengan pengen-
cer susu skim akan sangat responsif untuk
menekan daya tahan hidup spermatozoa
kambing (Leboeuf et al. 2000). Membran
plasma spermatozoa kambing juga rentan
terhadap cekaman dingin yang disebabkan
oleh rendahnya kadar kolesterol pada mem-
bran plasma spermatozoa (Colas et al,
2012). Keutuhan membran plasma mutlak
diperlukan untuk menjamin kelangsungan
hidup dan keberhasilan dalam membuahi
sel telur. Hal tersebut selain berfungsi me-
lindungi organel-organel sel dari kerusakan
mekanik, membran plasma juga berperan
sebagai filter yang berguna dalam pertukar-
an zat-zat intraseluler dengan tetap memeli-
hara kadar ion di dalam dan di luar sel
(Nawang, 2005).
Banyak faktor yang mempengaruhi
kualitas semen beku, salah satunya adalah
faktor ekuilibrasi. Ekuilibrasi adalah waktu
yang diperlukan spermatozoa untuk penye-
suaian dengan bahan pengencer dan glise-
rol. Lama ekuilibrasi dapat mempengaruhi
kualitas spermatozoa pada proses pembeku-
an. Waktu ekuilibrasi yang terlalu lama ter-
nyata mengakibatkan tuanya spermatozoa
sehingga daya membuahi lebih rendah sete-
lah thawing. Begitu juga kadar gliserol
yang ditambahkan kedalam bahan pengen-
cer untuk proses pembekuan. Gliserol yang
ditambahkan berperan untuk mendesak
keluar elektrolit-elektrolit, hingga dapat
275
mengurangi konsentrasi elektrolit di dalam
sel yang sifatnya merusak pada waktu pem-
bekuan dapat dihindari. Menurut penelitian
terakhir membuktikan bahwa yang penting
bukan lamanya waktu ekuilibrasi tetapi
semen harus berada dalam pengencer suhu
50 C sekurang-kurannya 4 jam sebelum
pembekuan untuk memberi kesempatan
kerja antibiotika terhadap mikroorganisme
yang mungkin ada dalam semen. Hal ini
dilakukan karena gliserol menghambat akti-
vitas antibiotika terhadap mikroorganisme
dan lamanya waktu ekuilibrasi dengan
gliserol sangat berbeda-beda antara satu
jenis ternak denganyang lain (Hardijanto,
dkk; 2010). Oleh karena peneliti ingin
meneliti Penambahan Plasma Seminalis
Sapi Terhadap Kualitas Spermatozoa Kam-
bing Pada Proses Pembekuan Dengan Wak-
tu Ekuilibrasi Yang Berbeda.
Materi dan Metode Penelitian
Sampel Semen Sapi
Semen ditampung dari sapi pejantan
Simental dengan menggunakan vagina bu-
atan yang dilengkapi dengan tabung gelas
penampung berskala. Vagina buatan disiap-
kan dengan memasang kedua selubung dan
alat penampung yang telah disterilkan,
sedangkan ruangan antara selubung luar
dan dalam diisi dengan air hangat yang
bersuhu 45o C dengan tujuan memberi suhu
terhadap selubung dalam sebesar 42-43oC
dan sepertiga bagian depan selubung dalam
vagina buatan diolesi vaselin. Setelah vagi-
na buatan selesai dipersiapkan, pejantan
diberi rangsangan dengan betina pemancing
kemudian dilakukan penampungan semen.
Segera setelah penampungan, semen diba-
wa kelaboratorium untuk dipisahkan dari
spermatozoa dan protein plasmanya diguna-
kan untuk ditambahkan kedalam bahan pe-
ngencer semen kambing.
Sampel Semen Kambing Kacang
Semen kambing ditampung dengan
vagina buatan dan diperiksa secara makros-
kopis dan mikroskopis. Pemeriksaan ma-
kroskopis meliputi volume, warna, bau,
konsistensi dan pH serta pemeriksaan mi-
kroskopis meliputi gerakan massa, gerakan
individu, viabilitas, konsentrasi dan resis-
tensi test.

Suherni Susilowati, dkk.
Pemisahan Protein Plasma Seminalis
Sapi
Setelah semen sapi diperiksa secara
mikroskopis dan makroskopis dengan sya-
rat persentase motilitas dan viabilitas sper-
matozoa sebesar 70% maka dilakukan
proses selanjutnya, semen disentrifus pada
suhu 4oC dengan kecepatan 1800 rpm
selama 10 menit untuk memisahkan sper-
matozoa dari plasma seminalis. Kemudian
plasma seminalis disonikasi pada suhu 4oC
dengan cara satu menit disonikasi setengah
menit berhenti dilakukan sebanyak tiga kali
untuk fraksinasi protein. Supernatan diam-
bil dan disimpan dalam lemari es selama
satu malam. Setelah penyimpanan satu ma-
lam supernatannya diambil untuk perlakuan
selanjutnya.
Pengenceran dan Proses Pembekuan
Semen
Susu skim (10%) ditimbang sebanyak
10 gram kemudian ditambah air 100 ml
kemudian dipanaskan 92-95o C dan selan-
jutnya didinginkan sapai suhu 20-27oC.
Ditambah Penicillin 1.000 IU/ ml dan
Streptomycin 1 mg/ ml. Bahan pengencer
yang telah ditambah antibiotika dibagi
menjadi dua bagian yaitu pengencer A (50
ml) dan pengencer B (50 ml). Pengencer B
ditambah dengan gliserol 10%.
Setelah bahan pengencer disiapkan ke-
mudian semen kambing yang ditampung
dengan syarat persentase motilitas dan via-
bilitasnya ≥ 70% maka ditambahkan protein
plasma seminalis sapi dan bahan pengencer
susu. Perlakuan Kontrol (P0), Perlakuan I
dan Perlakuan II adalah bahan pengencer
(A) + semen kambing + protein plasma
seminalis sapi (1:1) Selanjutnya pengencer
B dibagi 4 tahap dengan selang waktu 15
menit dicampur dengan pengencer (A).
Dibiarkan pada suhu 5oC selama satu jam
untuk perlakuan kontrol, 2 jam untuk per-
lakuan I dan 3 jam untuk perlakuan III yang
berfungsi untuk memberi kesempatan ter-
capainya waktu ekuilibrasi (diperiksa moti-
litas, viabilitas dan keutuhan membran
plasma spermatozoa).
Metode pemeriksaan :
Motilitas spermatozoa
Sebanyak 10 µl suspensi semen ditam-
bah dengan 10 µl Na Cl fisiologis dihomo-
genkan dan diteteskan pada obyek glass
276
kemudian ditutup dengan gelas penutup dan
diamati berapa banyak spermatzoa yang
bergerak progresif (maju ke depan) dengan
menggunakan mikroskop perbesaran 400
kali. Motilitas spermatozoa ditentukan de-
ngan menghitung pergerakan spermatozoa
motil (bergerak maju) dan tidak motil
sampai sebanyak 100 spermatozoa. Moti-
litas spermatozoa dibagi menjadi 4 kriteria
yaitu bergerak maju ke depan (Progresif),
bergerak mundur, bergerak berputar atau
ditempat dan tidak bergerak (Susilowati,
dkk, 2010)
Viabilitas spermatozoa
Semen segar diteteskan pada gelas
obyek ditambahkan eosin negrosin dicam-
pur sampai homogen dan dibuat preparat
ulas, dikeringkan diatas nyala api dengan
cepat. Hasil ulasan diperiksa dengan mi-
kroskop perbesaran 400 kali. Jumlah per-
sentase spermatozoa yang mati dan hidup
dihitung dengan ulangan 3 kali dan tiap
perhitungan dalam 100 sprmatozoa. Penilai-
an terhadap viabilitas spermatozoa adalah
sebagai berikut: spermatozoa yang hidup
kepalanya terlihat transparan atau berwarna
jernih. Spermatozoa yang mati membran
plasmanya rusak, permeabilitas meningkat
akhirnya zat warna masuk ke dalam sel dan
kepalanya nampak kemerahan. (Susilowati
dkk, 2010)
Pengujian keutuhan membrane plasma
spermatozoa dengan Hipoosmotic
Swelling Test.
Sebanyak 1 ml larutan hipoosmotic
(7,35 gram Na Sitrat 2 H2O, 13,52 gram
fruktosa dilarutkan dalam 1000 ml akuades)
ditambah dengan 0,1 ml spermatozoa ke-
mudian diinkubasi pada suhu 37o C selama
30 menit dan diamati dengan mikroskop
pembesaran 400 x. Spermatozoa dengan
membran plasma utuh ditandai dengan ekor
spermatozoa yang melingkar karena mem-
bran plasma spermatozoa masih berfungsi
dengan baik dalam penyerapan air pada
lingkungan yang bersifat hipotonik. Sper-
matozoa yang membrannya rusak ditandai
dengan ekor yang lurus.
Hasil dan Pembahasan
Pada penelitian ini dibutuhkan semen
segar sapi yang terlebih dahulu diperiksa
secara makroskopis dan mikroskopis.
 277
Suherni Susilowati, dkk.

Pemeriksaan makroskopis meliputi : volu- mempengaruhi daya tahan hidup sperma-

me, warna, bau, konsistensi dan derajat
keasaman atau pH. Pemeriksaan mikros-
kopis meliputi : gerakan massa, gerakan
individu, konsentrasi dan daya tahan hidup
(viabilitas) spermatozoa. Dibawah ini
tercantum hasil pemeriksaan semen segar
sapi secara makroskopis dan mikroskopis
(Tabel 1).
Volume semen pejantan yang dieja-
kulasikan antara jenis pejantan satu dengan
yang lain tidak sama. Pada umumnya vo-
lume semen akan bertambah banyak sesuai
dengan umur, besar tubuh, perubahan
keadaan, kesehatan organ reproduksi dan
frekuensi penampungan semen (Salisbury
and Van Demark, 1985). Warna, konsis-
tensi dan konsentrasi spermatozoa mempu-
nyai hubungan erat satu sama lain. Semakin
encer suatu semen maka konsentrasi sper-
matozoa akan rendah dan warna semen
semakin pucat. Sedangkan konsistensi se-
men tergantung pada perbandingan sperma-
tozoa dan plasma semen (Evans and Max-
well, 1987) Derajad keasaman (pH) sangat
tozoa. Bila pH tinggi atau rendah akan
menyebabkan spermatozoa tersebut mati.
Derajat keasaman (pH) semen kemung-
kinan dipengaruhi oleh konsentrasi asam
laktat yang dihasilkan dalam proses akhir
metabolisme. Metabolisme spermatozoa da-
lam keadaan anaerobik akan menghasilkan
asam laktat yang tertimbun dan meningkat-
kan atau menurunkan pH semen (Toelihere,
1985).
Hasil penelitian menunjukkan, bahwa
semen yang ditampung dari kambing ka-
cang berwarna putih kekuningan, bau khas,
konsistensi kental, pH ± 7, volume 1,2 ±
0,5 ml, konsentrasi 3860 x 106, motilitas
massa +++ (pergerakan spermatozoa mem-
bentuk gelombang besar dan banyak), mo-
tilitas individu bergerak progresif (maju
kedepan), rerata viabilitas 93 ± 7,50% dan
membran plasma utuh 87 ± 7,40%. Dari
hasil penelitian di atas dapat disimpulkan
bahwa kualitas semen tersebut memenuhi
persyaratan untuk digunakan penelitian
lebih lanjut.

Tabel 1. Hasil pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis semen segar Sapi Simental
Parameter Karakter
Volume 5,5 ml
Konsistensi Kental
Warna Putih susu
Bau Khas
pH 6,6
Gerakan massa +++
Gerakan individu Progresif (P)
Motilitas (%) 82 ± 3,45
Viabilitas (%) 88 ± 4,25
Konsentrasi 2,320x106 spz/ml

Tabel 2. Hasil pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis semen segar Kambing Kacang
sebelum dilakukan proses pembekuan
Parameter Karakter
Warna Putih kekuningan
Bau Khas
Konsistensi Kental
pH 7,00
Volume (ml) 1,2± 0,50
Konsentrasi (juta) sel spz/mm3 3860x106
Motilitas massa +++
Motilitas individu (%) Progresif (92 ± 7,45)
Viabilitas (%) 93 ± 7,50
Membran plasma utuh (MPU) (%) 87 ± 7,40
 278
Suherni Susilowati, dkk.

Tabel 3. Hasil pemeriksaan motilitas (%) spermatozoa kambing dalam pengencer susu yang
ditambah dengan protein plasma semen sapi dengan waktu ekuilibrasi yang berbeda
pada proses pembekuan
Perlakuan Ekuilibrasi 1 jam Ekuilibrasi 2 jam Ekuilibrasi 3 jam
c c
Tanpa protein plasma 54 ± 1,7 45 ± 1,35 42 ± 2,45 c
semen sapi (P0)
1: 1 (P1) 70 ± 1,45 a 62 ± 1,45 a 60 ± 1,80 a

1 ; 2 (P2) 62 ± 1,50 b 49 ± 2,25 b 43 ± 2,40 b

Tabel 4. Hasil pemeriksaan viabilitas (%) spermatozoa kambing dalam pengencer susu yang
ditambah dengan protein plasma semen sapi dengan waktu ekuilibrasi yang berbeda
pada proses pembekuan
Perlakuan Ekuilibrasi 1 jam Ekuilibrasi 2 jam Ekuilibrasi 3 jam
Tanpa protein plasma 56 ± 1,65 c 48 ± 1,85 c 45 ± 2,15 c
semen sapi (P0)
1: 1 (P1) 72 ± 1,35 a 65 ± 1,35 a 65 ± 1,70 a
b b
1 ; 2 (P2) 65 ± 1,20 52 ± 2,25 45 ± 2,40 b

Tabel 5. Hasil pemeriksaan membran plasma utuh (%) spermatozoa kambing dalam pengencer
susu yang ditambah dengan protein plasma semen sapi dengan waktu ekuilibrasi yang
berbeda pada proses pembekuan
Perlakuan Ekuilibrasi 1 jam Ekuilibrasi 2 jam Ekuilibrasi 3 jam
Tanpa protein plasma 55 ± 1,45 c 49 ± 1,55 c 47 ± 2,25 c
semen sapi (P0)
1: 1 (P1) 73 ± 1,45 a 67 ± 1,50 a 65 ± 1,80 a
1 ; 2 (P2) 67 ± 1,55 b 55 ± 2,15 b 45 ± 2,30 b

Pada tabel 3, tabel 4 dan tabel 5, dapat
dilihat bahwa motilitas, viabilitas dan mem-
bran plasma utuh spermatozoa kambing
dalam pengencer setelah penambahan pro-
tein plasma seminalis sapi dengan waktu
ekuilibrasi yang berbeda tidak menunjuk-
kan adanya perbedaan yang nyata tetapi
antar perlakuan dengan ekuilibrasi yang
berbeda menunjukkan perbedaan yang
nyata (p < 0,05).
Motilitas spermatozoa merupakan ciri
utama dalam penilaian semen untuk insemi-
nasi buatan. Motilitas spermatozoa mem-
bantu pengangkutan spermatozoa dari tem-
pat penyimpanannya menuju kelokasi terja-
dinya konsepsi (Overstreet dkk, 1980). Per-
sentase spermatozoa hidup merupakan
salah satu indikator untuk melihat baik
buruknya kualitas semen. Spermatozoa
dapat hidup karena sanggup mencerna be-
berapa zat yang ada di dalam cairan ase-
soris, cairan yang ada didalam alat kelamin
betina dan yang ada didalam media pengen-
cer (Hardijanto, dkk, 2010).
Kelangsungan hidup spermatozoa mu-
tlak memerlukan adanya keutuhan
membran plasma. Membran plasma selain
berfungsi melindungi organel-organel sel
dari kerusakan mekanik juga berperan pen-
ting sebagai filter yang baik bagi pertukaran
zat-zat intra dan ekstraseluler yang diper-
tahankan dalam proses metabolisme (Gar-
ner and Hafez, 2000).Komponen membran
spermatozoa mempunyai fungsi yang sa-
ngat unik dan spesifik seperti perlekatan
spermatozoa dengan sel telur, transport
substrat dan metabolisme.Fungsi-fungsi ter-
sebut dilakukan oleh struktur yang secara
morfologis terletak pada daerah-daerah ter-
tentu seperti membran pada bagian kepala
berfungsi untuk penembusan sel telur pada
proses fertilisasi (Nolan and Hammersted,
1997). Membran bagian luar akrosom ber-
fungsi mengadakan kontak pertama dan
menjadi satu dengan oolema sel telur pada
proses fertilisasi, sedangkan membran pada
bagian ekor mempunyai fungsi untuk men-
dapatkan substrat untuk energi spermatozoa
dan menghantar gelombang gerakan (Dar-
nel et al, 1990).
Proses ekuilibrasi sebaiknya dilakukan
selama minimum 4 jam pada pengencer
 Suherni Susilowati, dkk.
tanpa gliserol karena gliserol mempunyai
pengaruh negatif terhadap antibiotika. Pada
waktu ekuilibrasi gliserol diberi kesem-
patan untuk memasuki kepala spermatozoa
sebelum pembekuan. Gliserol yang masuk
ke dalam sel-sel spermatozoa akan meng-
gantikan sebagian air bebas di dalam me-
dium pengencer pada waktu pembekuan
dapat dicegah, selain itu gliserol juga ber-
peran untuk mendesak keluar elektrolit-
elektrolit dalam sel spermatozoa. Waktu
ekuilibrasi yang terlalu lama ternyata me-
ngakibatkan tuanya sel spermatozoa se-
hingga memiliki daya membuahi yang
kurang (Hardijanto, dkk, 2010).
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat
disimpulkan bahwa persentase motilitas
yang progresif, viabilitas dan membran
plasma utuh spermatozoa kambing setelah
penambahan protein plasma semen sapi
dalam pengencer susu denagn waktu ekui-
librasi yang berbeda pada proses pembe-
kuan tidak terdapat perbedaan.
Daftar Pustaka
Baldi,E., M. Luconi, L. Bonaccorsi,
C.Krausz and G Forti. 1996.Human
Sperm Activation during Capacitation
and Acrosom Reaction: Role of
Calcium, Protein Phosphorylation and
Lipid Remodelling Pathways. Fron-
tiers in Bioscience. : 189-205.
Blanco,T.M, Rperez-Pe and JA Cebrian
Perez. 2008. Seminal Plasma Protein
and Sperm Resistence to Stress.
Reprod Dom Anim 43(4).18-31.
Beatriz,B.,R.Perez-Pe, M Gallego,A.Tato,
J.Osada, T. Muino Blanco and J.A.
Cebrian Perez. 2000. Seminal Plasma
Protein Revert the Cold Shock
Damage on Ram Sperm Membrane.
Biology Reproduction. 63:1531-1537.
Colas,C,R Perez-Pe, A. Casao,M. Ollero, L.
Calleja, M. Gallego, T. M.Blanco and
J.A. cebrian-Perez. 2012. Remodelling
of Lipid Rafts During In Vitro
Capacitation and Acrosome Reaction
of Ram Spermatozoa. Biochemistry
and Analytical Biochemistry. 55-001
279
Curry MR, PF Watson, 1995. Sperm
Structure and Function in Gamete the
Spermatozoa. Gambridge Reviews in
Human Reproduction. Ed.Gruzinskas
& JL Yovich, Cambridge University
Press.
Darnel, J; H. Lodish and D. Baltimore,
1990. Molecular Cell Biology. Second
Edition. Sci.Am.Books. pp: 491-527.
Direktorat Jenderal Produksi Peternakan,
2007. Petunjuk Teknis Produksi dan
Distribusi Semen Beku. Departemen
Pertanian. Jakarta.
Garner and Hafez, E.S.E, 2000. Repro-
duction in Farm Animal. 7th Edition.
Philadelphia. Baltimore. New York
London.
Gazali,M dan Tambing ,S.N. 2002. Cryo-
preservation of Sperm. Hayati. Vol
9.No1. Hal 27-32.
Graham, J.K and Philip,H.P. 2004. Effect
of Adding Cholesterol to Bull Sperm
Membranes on Sperm Capacitation,
the Acrosom Reaction and Fertility.
Biol Reprod 71:522-527.
Hardijanto, Sardjito T, Hernawati T, Susi-
lowati S. Suprayogi TW, 2010. Penun-
tun Praktikum Inseminasi Buatan. Fa-
kultas kedokteran Hewan Universitas
Airlangga Surabaya.
Kasai, M. 1996. Simple and Efficient
Methods for Vitrification of Mamma-
lian Embryos. Animal Reproduction
Sciences. 42(1): 67-75.
Leboeuf B, Restall B, Salamon S. 2000.
Production and Storage of Goat Semen
for Artificial Insemination. Animal
Reproduction Sci 62 :113-141.
Lessard, C.,S. Parent, P. LEclerc, J.L.
Bailey and R. Sullivan, 2000. Cryopre-
servation Alters the Levels of the Bull
Sperm Surface Protein P25b. Journal
Andrology.21:700-707.
Nawang,SS. 2005. Integritas Membran
Spermatozoa Mencit Pada Pemberian
Peroral Fasa Air Daun Justicia
Gendarusa Dengan Metode Hypoos-
motic Swelling Test. Skripsi. Fakultas
Farmasi Universitas Airlangga
 280
Suherni Susilowati, dkk.

Nolan, J.P and R.H. Hammersted, 1997. dan Pembekuan Embrio. Bogor. PAU
Regulation of membran Stability and IPB.
The Acrosom Reaction in Mammalian
Susilowati,S. 2007.Insulin Like Growth
Sperm.
Factor-I Complex Plasma Seminalis
Overstreet,J.W; C, carol; D.F.Katz; F.W, Kambing Meningkatkan Kualitas Sper-
Hanson, 1980. The Importance of matozoa hasil Sentrifugasi. Media Ke-
Seminal Plasma for Sperm Penetration dokteran Hewan. Vol 23.No 1.
of Human Cervical Mucus. J. Fertility
Toelihere, M.R, 1993. Inseminasi Buatan
and Sterility. Vol. 34. Pp. 569-571.
Pada Ternak. Angkasa Bandung.
Riadi, 2004. Perubahan Karakter Ejakulat
Triana ,I.N, Susilowati,T dan Yuliani,
dan Aktifitas Antioksidan Pada Masa
M.G.A, 2012. Insulin Like Growth
Reproduksi Kambing Kacang dan
Factor –I Complex sebagai Alternatif
Kambing Peranakan Ettawa. Disertasi.
Antioksidan pada Media Pendewasaan
Program Pascasarjana. Unair. 18-25.
Spermatozoa Kambing. Veterinaria
Santoso,S dan Fandy, T, 2001. Riset Medika. Vol 5. No3.
Pemasaran, Konsep dan Aplikasi
Yanaghimachi.1994. Mammalian Fertiliza-
dengan SPSS. PT Gramedia . Jakarta.
tion. In Physiology of Reproduction. E
Salisbury, G.W and N.L VanDemark, 1985. Knobil, J.Neil, LL GS. Greenwald,
Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi C.L. Market,DW. Plaff.Raven Pers
Buatan Pada Sapi. Terjemahan R. Ltd. New York.
Djanuar. Gadjah Mada University
World Health Organization, 2010. WHO
Press. Yogyakarta.
Laboratory Manual for the Examina-
Supriatna,I dan Pasaribu, FH. 1992. In tion and Processing of Human Semen
Vitro Fertilization. Transfer Embrio Fifth Edition.