(12) SOLICITUD INTERNACIONAL PUBLICADA EN VIRTUD DEL TRATADO DE COOPERACION EN MATERIA
DE PATENTES (PCT)
(19) Organización Mundial de la Propiedad
Intelectual
Oñcina internacional
(43) Fecha de publicación internacional
3 de mayo de 2012 (03.05.2012) PCT
(51) Clasificación Internacional de Patentes:
C12P 13/04 (2006.01) A23L 1/33 (2006.01)
G01N 30/89 (2006.01)
(21) Número de la solicitud internacional:
PCT/MX20 11/0000 17
(22) Fecha de presentación internacional:
4 de febrero de 201 1 (04.02.201 1)
(25) Idioma de presentación: español
(26) Idioma de publicación: español
(30) Datos relativos a la prioridad:
MX/a/20 10/0 1 1900
29 de octubre de 2010 (29.10.2010) MX
(72) Inventores; e
(71) Solicitantes : LÓPEZ CERVANTES, Jaime
[MX/MX]; Ingeniero Zazueta Niebla 555 Poniente,
Colonia Nainari del Yaqui, 85 137 Cajeme, Sonora (MX).
SÁNCHEZ MACHADO, Dalia Isabel [MX/MX]; Calle
Arquímides 2465, Fraccionamiento Villa Itson, 85 130
Cajeme, Sonora (MX). FICK ROCHIN, Karl Reiner
[MX/MX]; Calle Venecia Sin N nero, Fraccionamiento
Villa Dorada, 85800 Navojoa, Sonora (MX).
(54) Title: METHOD FOR QUANTIFYING AMINO ACIDS USING HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
(HPLC) FROM LACTIC FERMENTATION
(54) Título : MÉTODO DE CUANTIFICACION DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
RESOLUCIÓN (HPLC) A PARTIR DE UNA FERMENTACIÓN LÁCTICA
> shrimp-head hydrolysate obtained by means of lactic
s fermentation. For the purpose of analysis thereof, the
00
o realizó por fluorescencia (ex: 270nm; em: 3 16nm) en
FIGURA 1
bomba de 1.20 ml/min, con una temperatura de columna de 38°C.
(10) Número de Publicación Internacional
WO 2012/057598 Al
(74) Mandatario: GAMEZ CORRALES, José Alfredo;
Paseo de la Arboleda 25, Colonia Valle Grande, 83205
Hermosillo, Sonora (MX).
(81) Estados designados (a menos que se indique otra cosa,
para toda clase de protección nacional admisible): AE,
AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR,
BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE,
DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE,
GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG,
KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU,
LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ,
NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, RO, RS,
RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ,
TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA,
ZM, ZW.
(84) Estados designados (a menos que se indique otra cosa,
para toda clase de protección regional admisible):
ARIPO (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, SD,
SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW), euroasiática (AM, AZ, BY,
KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), europea (AL, AT, BE, BG,
CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU,
IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT,
RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR), OAPI (BF, BJ, CF, CG,
CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
[Continúa en la página siguiente]
(57) Abstract: The present invention relates to an
HPLC method for quantifying free amino acids in the
samples were derivatized with 9-fluorenylmethyl
chloroformate (FMOC). Detection was performed
using fiuorescence (ex: 270 nm; em: 3 16 nm) in a
column (SGE Hypersyl ODS C18 250 nm x 4.6 mm, 5
min) and three solutions were used as mobile phase: in
phase A, 30 mm ammonium phosphate (pH 6.5) in
15:85 methanol/water; in phase B, 15:85
methanol/water; and in phase C, 90: 10
acetonitrile/water. The pump fiowrate was 1.20
mL/min, with a column temperature of 38°C.
(57) Resumen: Método HPLC para la cuantificación
de aminoácidos libres en el hidrolizado de cabeza de
camarón obtenido mediante fermentación láctica. Para
su análisis las muestras fueron derivatizadas con 9-
fiuorenil metil cloroformato (FMOC). La detección se
una columna SGE Hypersil ODS C18 250nm x
4.6mm, 5 µιη , y se utilizaron tres soluciones como
fase móvil: fase A : 30mM fosfato de amonio (pH 6.5)
en 15:85 metanol/agua, fase B : 15:85 metanol/agua, y
fase C : 90: 10 acetonitrilo/agua, con un flujo de
 w o 2012/057598 A l II lili 1
II lili I II I lil i lil i III Mil II I II
Publicada:

— con informe de búsqueda internacional (Art. 21(3))

 MÉTODO DE CUANTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC) A PARTIR
DE UNA FERMENTACIÓN LÁCTICA.

CAMPO TÉCNICO
La presente invención tiene su campo técnico dentro de la química, dado que
trata de un novedoso método para determinar los aminoácidos triptófano y
tirosina.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El aprovechamiento en algunos productos marinos sólo se realiza

parcialmente, es decir, que aquello que no es utilizado como alimento se
desecha como es el caso de la cabeza y el caparazón de camarón y de otros
animales como el cangrejo y el pescado. Estos productos han sido estudiados
por décadas comprobándose en diversas investigaciones que son una fuente
importante de proteínas de muy buena calidad, además de quitina y colorantes
que pueden aprovecharse para procesos industriales y agrícolas.

En una investigación donde se llevó a cabo una fermentación láctica (con

Lactobacillus plantarum) de cabeza de camarón {Macrobrachium
vollenhovenii), e l análisis de la composición de nutrientes del hidrolizado
obtenido dio un rendimiento de 65.6% de proteína cruda (Fagbenro y Bello-
Olusoji, 1991 ) .

Además, de conocer la cantidad de proteína que tienen los alimentos es

necesario estimar su contenido en aminoácidos esenciales, ya que indica la
calidad de la proteína. Los aminoácidos son sustancias orgánicas que
contienen un grupo carboxilo y un grupo amino unido a su cadena R , que al
unirse por enlaces peptídicos forman cadenas largas llamadas péptidos (hasta
20 aminoácidos unidos), los que a su vez al unirse forman las proteínas.
Algunos de ellos son esenciales, es decir, que el organismo no es capaz de
sintetizarlos por sí solo por lo que tiene que obtenerlos de manera externa,
entre éstos se encuentra en triptófano (Murray, et al., 1988).
El triptofano y la tirosina son aminoácidos aromáticos, constituyentes
primordiales de las proteínas, nutricionalmente esenciales para muchos
animales y para el cuerpo humano en la producción de sustancias importantes
para el organismo (Kivi, 2000).

Comúnmente la cuantificación de aminoácidos se realiza tras la ruptura de los

enlaces peptídicos por hidrólisis ácida (HCI 6M) seguida de una derivatización.
Sin embargo, ésta hidrólisis destruye a l triptofano por completo (Landry y
Delhaye, 1988). Por otro lado triptofano no necesita derivatización ya que es
fluorescente por naturaleza, a l igual que tirosina (Chen Y Barkley, 1994).

El triptofano y la tirosina, como otros aminoácidos, después de la hidrólisis de

proteínas, han sido analizados por una variedad de métodos en el pasado. La
cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC) es la técnica analítica de
separación más utilizada debido a su sensibilidad, fácil adaptación a las
determinaciones cuantitativas exactas e idoneidad para la separación de
especies no volátiles o termolábiles.

Hay otros métodos publicados y patentados como el de la patente RU2305832

que describe un método para la determinación independiente de triptofano y
tirosina en disolución acuosa. La patente RU21 55747 describe un método de
aislamiento de los aminoácidos contenidos en una mezcla para ser utilizados
en otros procesos. Estos métodos son diferentes al planteado en este
documento.

Las determinaciones convencionales de aminoácidos involucran una

derivatización para facilitar la identificación. Sin embargo, triptofano y tirosina
por su estructura presentan fluorescencia intrínseca, característica que puede
aprovecharse para su identificación y cuantificación. Por lo anterior, en este
novedoso método de cuantificación de aminoácidos por cromatografía líquida
de alta resolución (hplc) a partir de una fermentación láctica se ilustra la
determinación simultánea por HPLC de triptofano y tirosina en hidrolizados
obtenidos de residuos de camarón sin derivatizar.
 DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN

Los detalles característicos de este novedoso Método de cuantificación de

aminoácidos por HPLC a partir de una fermentación láctida se describen
claramente en la siguiente descripción y en las figuras que se acompañan y
siguiendo los mismos signos de referencia para indicar las partes y figuras
mostradas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Cromatograma de la solución patrón de aminoácidos.

Figura 2 . Cromatograma de hidrolizado obtenido de la fermentación láctica
de residuo de camarón.

El método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una

fermentación láctida está compuesta por las siguiente etapas:

a) Preparación del reactivo Químico. Todas las soluciones fueron

preparadas con agua ultra pura purificada con un sistema Milli-Q (Nano
puré Diamond, Barnstead). FMOC (9-fluorenil metil cloroformato)
(Sigma, St. Louis, MO, USA) se disolvió en acetonitrilo (EMD Chemicals
Inc. Darmstadt, Germany, Grado HPLC); el buffer de boratos fue
preparado con ácido bórico y agua ajustando el pH a 8.5 con hidróxido
de sodio 1M (Productos Químicos Monterrey, Nuevo León, México). El
reactivo para eliminar el FMOC sin reaccionar (Cleavage) se preparó
utilizando hidróxido de sodio 0.85M con hidroxilamina 0.5M y 2 -
metiltioetanol (Sigma-Aldrich); también la solución para ajustar e l pH de
la reacción (Quench) se preparó con ácido acético glacial y acetonitrilo
(Productos Químicos Monterrey, NL, México). La fase móvil estuvo
compuesta por una mezcla de 3 soluciones de distinta composición:
Fase A : 30 mM fosfato de amonio (pH 6.5) disuelto en una mezcla de
metanol - agua (15:85); fase B : metanol - Agua (15:85) y la fase C :
acetonitrilo - agua (90:10), todos ellos proporcionados por EMD
Chemicals Inc.
b) Recuperación del hidrolizado
a) Fermentación. Para la fermentación se depositaron 500g de
cabeza molida en recipientes de plástico de 1 g de capacidad,
agregando del 6.6% de azúcar (p/v), al igual que e l inoculo
(probiótico) en 50% (p/v); disminuyendo el pH de la mezcla por
debajo de 6.5 con ácido cítrico al 10% para evitar una
putrefacción de la muestra. Los recipientes con la muestra fueron
incubados durante 24 horas a 30°C y se monitoreó e l pH y la
acidez titulable (NaOH 0.1 N) cada 3 horas hasta obtener un pH
menor a 4.5 y una acidez titulable de 3.5%.
b) Centrifugación. Una vez terminada la fermentación la muestra se
centrifugó a 6440 g a 8 °C durante 15 minutos para separar las
fases (quitina, licor, sobrenadante - pigmentos), recolectando e l
licor o fase acuosa rica en proteínas.
c) Preparación de la muestra para cuantificación de aminoácidos
a) Liofilización de la muestra. El licor tomado de la centrifugación se
congeló y se liofilizó, para obtener un producto concentrado y de
fácil manejo, esto se realizó en un liofilizador a - 40°C y una
presión por debajo de 133 x10 3 mBar. Con este tratamiento se
garantiza que el producto final no contenga humedad. E l polvo
liofilizado se almacenó en bolsas de plástico herméticas y
protegidas contra la luz dentro de un desecador, posteriormente
se pesaron 25 mg de muestra y se aforaron a 25 mi con la
solución buffer de boratos, las muestras se sonificaron durante 2
minutos para que se disolvieran por completo y se agitaron 30
segundos en el vortex. La solución se encuentra lista para la
derivatización.
b) Derivatización de los aminoácidos con FMOC. La derivatización
de los aminoácidos se lleva a cabo acorde al método de Haynes
y Sheumack (1991 ), realizando algunas modificaciones. El
proceso se inició tomando 300 µ de la solución de muestra y se
depositó en un vial con una capacidad de 1.5 mL, se agregaron
300 del reactivo FMOC y se agitó en el vortex durante 90
 segundos, al terminar el tiempo se añadieron 80 µ Ι_ del reactivo
Cleaveage y la solución resultante se mezcló en el vortex, una
vez hecho esto se dejó reposar la solución durante 3.5 minutos,
posteriormente se agregaron 420 µ Ι del reactivo Quench
transcurrido el tiempo de reposo, la solución se mezcló una vez
más en el vortex y se filtró utilizando una membrana millipore de
0.45 µιη ; después de esto la muestra quedó lista para ser
analizada por HPLC.
d) Análisis por HPLC (Equipo y condiciones). Para el análisis se utilizó un
cromatógrafo de líquidos equipado con un auto muestreador y un
detector de fluorescencia controlado con un software (WinCrom), la
temperatura de la columna se controla a 38 °C con un calentador de
columna, todo el equipo utilizado es proporcionado por GBC
Instrumental, Australia. La separación se lleva a cabo con una columna
de fase reversa 4.6 m SGE Hypersil ODS C18, para el análisis
cromatográfico se inyectan 5 µ de la muestra derivatizada. Para lograr
poner a punto e l método, esto es que las condiciones cromatográficas
sean las más adecuadas para el análisis, se evaluaron distintos
parámetros controlables, se probaron diferentes velocidades de flujo de
la bomba (0.8 mL/min, 1.0 mL/min, 1.2 mL/min, 1.4 mL/min), diferentes
temperaturas de la columna (34°C, 36°C y 38°C) esto con la finalidad de
que el método fuese más preciso y exacto. Los aminoácidos se separan
con un gradiente de elución e l cual se muestra en la tabla 1. La
velocidad de flujo utilizada fue de 1.20 mL/min. La longitud de onda del
detector de fluorescencia fue de 270 n excitación y 316 nm emisión.
Tabla 1. Programa de la bomba (flujo en gradiente)
Tiempo (min) Fase A% Fase B% Fase C%
0 16.5 69 14.5
26 11 44 45
26.10 0 0 100
30 0 0 100
30.10 16.5 69 14.5
43 16.5 69 14.5
 REIVINDICACIONES
Habiendo descrito suficientemente mi invención, considero como una novedad
y por lo tanto reclamo como de mi exclusiva propiedad, lo contenido en las
siguientes cláusulas:

1. Un método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una

fermentación láctica para cuantificar aminoácidos libres en el hidrolizado
de cabeza de camarón caracterizado porque comprende los siguientes
pasos:
a . Preparación del reactivo Químico.
b . Recuperación del hidrolizado.
i. Fermentación.
ii. Centrifugación.

c . Preparación de la muestra para cuantificación de aminoácidos

i. Liofilización de la muestra.
ii. Derivatización de los aminoácidos.

d . Análisis por HPLC.

2 . El método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una

fermentación láctica descrito en la reivindicación 1, caracterizada
porque todas las soluciones fueron preparadas con agua ultra pura
purificada con un sistema Milli-Q (Nano puré Diamond, Bamstead),
FMOC (9-fluorenil metil cloroformato) (Sigma, St. Louis, MO, USA) se
disuelve en acetonitrilo (EMD Chemicals Inc. Darmstadt, Germany,
Grado HPLC), el buffer de boratos se prepara con ácido bórico y agua
ajustando e l pH a 8.5 con hidróxido de sodio 1M (Productos Químicos
Monterrey, Nuevo León, México), el reactivo para eliminar e l FMOC sin
reaccionar (Cleavage) se prepara utilizando hidróxido de sodio 0.85M
con hidroxilamina 0.5M y 2 - metiltioetanol (Sigma-Aldrich), la solución
para ajustar el pH de la reacción (Quench) se prepara con ácido acético
glacial y acetonitrilo (Productos Químicos Monterrey, NL, México),
donde la fase móvil está compuesta por una mezcla de 3 soluciones de
distinta composición: Fase A : 30 mM fosfato de amonio (pH 6.5) disuelto
en una mezcla de metanol - agua (15:85); fase B : metanol - Agua
(15:85) y la fase C : acetonitrilo - agua (90:10).
El método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una
fermentación láctica descrito en la reivindicación 1 y 2 , caracterizada
porque la recuperación del hidrolizado se realiza mediante las etapas:

i. Fermentación, depositando 500g de cabeza molida en

recipientes de plástico de kg de capacidad, o
equivalentes, agregando del 6.6% de azúcar (p/v), al igual
que e l inoculo (probiótico) en 50% (p/v); disminuyendo el
pH de la mezcla por debajo de 6.5 con ácido cítrico al 10%
para evitar una putrefacción de la muestra, incubando los
recipientes durante 24 horas a 30°C y monitoreando el
pH y la acidez titulable (NaOH 0.1 N) cada periodo de
tiempo, constante, hasta obtener un pH menor a 4.5 y una
acidez titulable de 3.5%,
ii. Centrifugación, a 6440 g a 8 °C durante 15 minutos para

separar las fases (quitina, licor, sobrenadante -

pigmentos), para recolectar el licor o fase acuosa rica en
proteínas.

El método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una

fermentación láctica descrito en la reivindicación 1, 2 y 3 , caracterizada

porque la preparación de la muestra para cuantificación de aminoácidos
se realiza mediante las etapas:
i. Liofilización de la muestra, donde e l licor tomado de la
centrifugación se congela y se liofiliza, para obtener un
producto concentrado y de fácil manejo, realizándolo en un
liofilizador a - 40°C y una presión por debajo de 133 x 0 3
mBar, garantizando que el producto final no contenga
humedad, almacenando el polvo liofilizado en bolsas de
plástico herméticas y protegidas contra la luz dentro de un
desecador, para posteriormente pesar 25 mg, o
equivalente, de muestra y se aforaron a 25 mi, o
 equivalente, con la solución buffer de boratos, las
muestras se sonifican durante 2 minutos para que se
disolvan por completo y se agitan 30 segundos en e l
vortex,
Derivatización de los aminoácidos, con FMOC, donde la
derivatización de los aminoácidos se lleva a cabo acorde
al método de Haynes y Sheumack (1991 ), donde el
proceso se inicia tomando 300 µ Ι , o equivalente, de la
solución de muestra y se depositan en un vial con una
capacidad de .5 ml_, o equivalente, se agregan 300 µ , o
equivalente, del reactivo FMOC y se agita en el vortex
durante 90 segundos, después se añaden 180 µ ΐ_, o
equivalente, del reactivo Cleaveage y la solución
resultante se mezcla en e l vortex, para después dajer
reposar la solución durante 3.5 minutos, posteriormente se
agregan 420 µ Ι_, o equivalente, del reactivo Quench, la
solución se mezcla una vez más en el vortex y se filtra
utilizando una membrana millipore de 0.45 µιτι .

5 . El método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una

fermentación láctica descrito en la reivindicación 1, 2 , 3 y 4 ,
caracterizada porque análisis por HPLC se realiza utilizando un
cromatógrafo de líquidos equipado con un auto muestreador y un
detector de fluorescencia controlado con un software (WinCrom), donde
la temperatura de la columna se controla a 38 °C con un calentador de
columna, la separación se lleva a cabo con una columna de fase
reversa 4.6 mm SGE Hypersil ODS C18, para el análisis cromatográfico
se inyectan 5 µ de la muestra derivatizada, y la velocidad de flujo
utilizada en el proceso fue de 1.20 mL/min con una longitud de onda del
detector de fluorescencia de 270 nm excitación y 316 nm emisión.

6. El método de cuantificación de aminoácidos por HPLC a partir de una

fermentación láctica descrito en la reivindicación 5 , caracterizada
porque los aminoácidos se separan con el siguiente gradiente de
elución (Tiempo en minutos, Fase A%, Fase B%, Fase C%)
correspondiente:
i. 0 16.5 69 14.5
ii. 26 11 44 45
iii. 26.10 0 0 100
iv. 30 0 0 100
V. 30.10 16.5 69 14.5
vi. 43 16.5 69 14.5
A . CLASSIFICATION OF SUBJECT MATTER

See extra sheet

According to International Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC
B . FIELDS SEARCHED

Minimum documentation searched (classification system followed by classification symbols)

C12P, G01N, A23L

Documentation searched other than minimum documentation to the extent that such documents are included in the fields searched

Electronic data base consulted during the international search (name of data base and, where practicable, search terms used)

EPQDQC, INVENES
C . DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT

Category* Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages Relevant to claim No.

X J . López-Cervantes, D.I. Sánchez-Machado, 1-6

J.A. Rosas-Rodríguez; "Analysis of free amino
acids in fermented shrimp waste by high-performance
liquid chromatography" Journal of Chromatography
A (10.02.2006); vol. 1105; N° 1-2; pages
106-110; DOI: 10.1016/j.chroma.2005.08.040;
the whole document

D.I. Sánchez-Machado, B . Chavira-Willys, J . 1-6

López-Cervantes; "High-performance liquid chromatography
with fluorescence detection for quantitation
of tryptophan and tyrosine in a shrimp waste
protein concéntrate" Journal of Chromatography
B (15.02.2008); vol 863; N° 1; pages 88-93;
DOI: 10.1016/j.jchromb.2008.01.011; the whole document

Further documents are listed in the continuation of Box C . patent family annex.

* Special categories of cited documents: later document published after the international filing date or
"A" document defining the general state of the art which is not priority date and not in conflict with the application but cited
considered to be of particular relevance. to understand the principie or theory underlying the
"E" earlier document but published on or after the international invention
filing date
"L" document which may throw doubts on priority claim(s) or document of particular relevance; the claimed invention
which is cited to establish the publication date of another cannot be considered novel or cannot be considered to
citation or other special reason (as specified) involve an inventive step when the document is taken alone
"O" document referring to an oral disclosure use, exhibition, or document of particular relevance; the claimed invention
other means. cannot be considered to involve an inventive step when the
"P" document published prior to the international filing date but document is combined with one or more other documents ,
later than the priority date claimed such combination being obvious to a person skilled in the art
document member of the same patent family
Date of the actual completion of the international search Date of mailing of the international search report
01/07/2011 (22/08/2011)
Name and mailing address of the ISA/ Authorized officer
M . García Coca
OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS
Paseo de la Castellana, 75 - 28071 Madrid (España)
Facsímile No.: 9 1 349 53 04 Telephone No. 9 1 349341 1
Form PCT/ISA/210 (second sheet) (July 2009)
C (continuation). DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT
Category * Citation of documents, with indication, where appropriate, of the relevant passages Relevant to claim No.

A C . Bueno-Solano, J . López-Cervantes, O.N. 1-6

Campas-Baypoli, R . Lauterio-García, N.P. Adan-Bante,
D .I . Sánchez-Machado; "Chemical and biological
characteristics of protein hydrolysates from
fermented shrimp by-products"; Food Chemistry
(01.02.2009); vol. 112; N 3 ; pages 671-675;
DOI: 10.1016/j.foodchem.2008.06.029; the whole document

Form PCT/ISA/210 (continuation of second sheet) (July 2009)

 .

PCT/MX201 1/000017

CLASSIFICATION OF SUBJECT MATTER

C12P13/04 (2006.01)
G01N30/89 (2006.01)
A23L1/33 (2006.01)

Form PCT/ISA/210 (extra sheet) (July 2009)

A . CLASIFICACIÓN DEL OBJETO DE LA SOLICITUD
Ver Hoja Adicional

De acuerdo con la Clasificación Internacional de Patentes (CIP) o según la clasificación nacional y CIP.
B . SECTORES COMPRENDIDOS POR LA BÚSQUEDA

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

C12P, G01N, A23L

Otra documentación consultada, además de la documentación mínima, en la medida en que tales documentos formen parte de los sectores
comprendidos por la búsqueda

Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda internacional (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de
búsqueda utilizados)
EPODOC, INVENES
C . DOCUMENTOS CONSIDERADOS RELEVANTES
Relevante para las
Categoría* Documentos citados, con indicación, si procede, de las partes relevantes reivindicaciones n°

X J . López-Cervantes, D.I. Sánchez-Machado, 1-6

J.A. Rosas-Rodríguez; "Analysis of free amino
acids in fermented shrimp waste by high-performance
liquid chromatography" Journal of Chromatography
A (10.02.2006); vol. 1105; N° 1-2; páginas
106-110; DOI: 10.1016/j.chroma.2005.08.040;
todo el documento

D.I. Sánchez-Machado, B . Chavira-Willys, J . 1-6

López-Cervantes; "High-performance liquid chromatography
with fluorescence detection for quantitation
of tryptophan and tyrosine in a shrimp waste
protein concéntrate" Journal of Chromatography
B (15.02.2008); vol. 863; N° 1; páginas 88-93;
DOI: 10.1016/j.jchromb.2008.01.011; todo el documento

En la continuación del recuadro C se relacionan otros documentos I ILos documentos de familias de patentes se indican en el

* Categorías especiales de documentos citados:
"A" documento que define el estado general de la técnica no
considerado como particularmente relevante.
"E" solicitud de patente o patente anterior pero publicada en la
fecha de presentación internacional o en fecha posterior.
"L" documento que puede plantear dudas sobre una reivindicación
de prioridad o que se cita para determinar la fecha de
publicación de otra cita o por una razón especial (como la
indicada).
"O" documento que se refiere a una divulgación oral, a una
utilización, a una exposición o a cualquier otro medio.
"P" documento publicado antes de la fecha de presentación
internacional pero con posterioridad a la fecha de prioridad
reivindicada.
Fecha en que se ha concluido efectivamente la búsqueda internacional.
01/07/2011
Nombre y dirección postal de la Administración encargada de la
búsqueda internacional
OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS
Paseo de la Castellana, 75 - 28071 Madrid (España)
N° de fax: 9 1 349 53 04
Formulario PCT/ISA/210 (segunda hoja) (Julio 2009)
documento ulterior publicado con posterioridad a la fecha de
presentación internacional o de prioridad que no pertenece al
estado de la técnica pertinente pero que se cita por permitir
la comprensión del principio o teoría que constituye la base
de la invención.
documento particularmente relevante; la invención
reivindicada no puede considerarse nueva o que implique
una actividad inventiva por referencia al documento
aisladamente considerado.
documento particularmente relevante; la invención
reivindicada no puede considerarse que implique una
actividad inventiva cuando el documento se asocia a otro u
otros documentos de la misma naturaleza, cuya combinación
resulta evidente para un experto en la materia
documento que forma parte de la misma familia de patentes.
Fecha de expedición del informe de búsqueda internacional.
22-AGOSTO-2011 (22/08/2011)
Funcionario autorizado
M . García Coca
N° de teléfono 9 1 349341 1
C (Continuación). DOCUMENTOS CONSIDERADOS RELEVANTES
Relevante para las
Categoría * Documentos citados, con indicación, si procede, de las partes relevantes
reivindicaciones n°

A C . Bueno-Solano, J . López-Cervantes, O.N. 1-6

Campas-Baypoli, R . Lauterio-García, N.P. Adan-Bante,
D .I. Sánchez-Machado; "Chemical and biological
characteristics of protein hydrolysates from
fermented shrimp by-products"; Food Chemistry
(01.02.2009); vol. 112; N 3 ; páginas 671-675;
DOI: 10.1016/j.foodchem.2008.06.029; todo el documento

Formulario PCT/IS A/210 (continuación de la segunda hoja) (Julio 2009)

 CLASIFICACIONES DE INVENCIÓN
C12P13/04 (2006.01)
G01N30/89 (2006.01)
A23L1/33 (2006.01)

Formulario PCT/IS A/210 (hoja adicional) (Julio 2009)