UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

DATOS INFORMATIVOS:
Alumno: Alex Xavier Sánchez Guerrero
Carrera: Ingeniería Bioquímica
Asignatura: Ingeniería de las Fermentaciones
Nivel: Séptimo
Docente: Ing. Mirari Arancibia
Fecha de Presentación: 12/ 06 / 2019

TEMA: CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE E. coli

1. INTRODUCCIÓN

Las bacterias constantemente enfrentan condiciones que limitan o impiden su

crecimiento. Requiere la capacidad para alternar periodos de rápida división celular y de
crecimiento. Las características de las células en estos periodos pueden analizarse en el
laboratorio en condiciones controladas de temperatura, pH, salinidad y composición del
medio y sustrato. La curva normal de crecimiento bacteriano presenta 4 fases: fase de
transición A o “lag”, fase logarítmica o exponencial, fase estacionaria y fase de muerte.
Las propiedades de un microorganismo dependerán de la fase de la curva de crecimiento
en que se encuentren.

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo general

 Elaborar la curva de crecimiento de E. coli en función del tiempo.

2.2.Objetivos específicos
 Determinar los valores de las unidades formadoras de colonias y su relación en
función del tiempo.
 Establecer la relación entre el conteo de colonias con la absorbancia medidas en
cada una de las diluciones.

3. MATERIALES Y MÉTODOS
Se preparó un medio de cultivo tomando en cuenta las condiciones propicias para que la
bacteria E. coli presente un crecimiento adecuado. Posteriormente se realiza la difusión
en placa en condiciones controladas de asepsia y la incubación de las placas a 37℃.
Se realizaron diluciones 10−2 y 10−3 respectivamente que a posterior fueron usadas para
en conteo de las colonias y la medición de la absorbancia a 650 nm para 4 puntos que
sirvieron para la elaboración de las gráficas pertinentes.
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

4.1. RESULTADOS

Tabla N°1. Datos de tiempo y absorbancia

Número de mediciones Horas Tiempo (h) Absorbancia (650nm)

Blanco
0 12:00 – 12:26 0 0
1 12:26 – 13:05 0,65 0,007
2 13:05 – 15:30 2,41 0,009
3 15:30 - 16:13 3,12 0,013
4 16:13 – 16:33 3,45 0,285

Absorbancia Vs Tiempo
0.3

0.25

0.2
Absorbancia

0.15

0.1

0.05

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
-0.05
Tiempo

Gráfica 1. Absorbancia vs tiempo

Tabla N°2. Conteo de Colonia

DILUCIONES
−2
Medición 10 10−3
0 - -
1 138 22
2 510 41
3 450 105
4 440 137
 Cálculo demostrativo de UFC/ml

𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 ∗ 1/𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

𝑢𝑓𝑐/ 𝑚𝑙 =
𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑎
138 ∗ 100
𝑢𝑓𝑐/ 𝑚𝑙 =
0,1 𝑚𝑙
𝑢𝑓𝑐/ 𝑚𝑙 = 138 ∗ 103

Tabla N°3. Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

UFC/ml Ln (UFC/ml)
3
138 × 10 11,83
3
410 × 10 12,92
3
1050 × 10 13,86
3
1370 × 10 14,13

Tiempo vs UFC 10^2 Tiempo vs UFC 10^3

1500000
600000
500000
400000 1000000
300000
200000 500000
100000
0 0
0 50 100 150 200 250 300 0 50 100 150 200 250 300

Gráficas 2 y 3. Unidades formadoras de colonias al variar el tiempo (min)

Tiempo vs ln UFC 10^2 Tiempo vs ln UFC 10^3

13.4
13.2 14.4
13 y = 0.0068x + 11.63 14.2
12.8 14 y = 0.0196x + 9.3445
12.6 13.8
12.4 13.6
12.2 13.4
12 13.2
13
11.8
12.8
11.6
0 50 100 150 200 250 300
0 50 100 150 200 250
 Gráficas 4 y 5. Crecimiento Ln UFC/ml al variar el Tiempo

Tabla N°5. Absorbancia vs Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

Absorbancia UFC/mL
0,007 138 × 103
0,009 410 × 103
0,013 1050 × 103
0,285 1370 × 103

Abs vs ln UFC 10^2 Abs vs ln UFC 10^3

13.5

14
13
13.5
12.5
13
12
12.5
11.5 12
0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014 0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014

Gráfica 6 y 7. Absorbancia vs UFC/ml

4.2.DISCUSIÓN
El crecimiento bacteriano se refiere a los cambios cuantitativos en la población, es decir
un aumento en la masa total de células ya que la bacteria se encuentra en condiciones
adecuadas para su desarrollo o se adapta a las nuevas condiciones del medio; es por ellos
que se procedió a inocular las células de E. coli evitando cualquier posible contaminación
en periodos de tiempo establecidos, cuyos datos se pueden evidenciar en la tabla N°1,
además de los valores de absorbancia en tiempos determinados; y su relación se la
evidencia en la gráfica 1, en donde se puede apreciar que se genera una curva que sigue
una tendencia constante únicamente diferenciada para el último punto, y que se debió a
una toma en las mediciones en periodos de tiempo que no siguieron un rango fijo y
también a lecturas no tan especificas por el espectrofotómetro(Arranz, 2016).

La forma de medir la biomasa y determinar las fases de crecimiento de la misma es

determinar un método que relacione dicha biomasa con una magnitud física como la
absorbancia. A medida que la concentración celular aumenta en función del tiempo, el
medio se hace más turbio y la cantidad de luz que se transmite se reduce, esta reducción
se da en consecuencia de la difracción de la luz por parte de la célula, cabe recalcar que
la absorbancia no es una medida directa del número de células. Se observa en la tabla N°
1 a medida que aumenta el valor de la absorbancia la densidad del cultivo aumenta lo que
genera una relación directamente proporcional (Díaz, 2017).

Se reportó en la tabla 2 los valores obtenidos del número de colonias en cada dilución,
dando como resultado solo 4 valores a considerar, ya que estos cumplen con las
características propuestas por Hernández, 2008, que menciona que el número de colonias
debe estar en un rango de 30 a 300 colonias para poder calcular UFC de lo contrario son
incontables, sin embargo se tomó en cuenta los demás valores para realizar las gráficas
pertinentes y su relación con el tiempo para las 2 diluciones realizadas. (Aguirre &
Morales, 2010).

La gráfica 2 y 3 evidencian que el proceso no presentó fase de lag debido a que en la hora
cero se esperó un tiempo determinado, por lo que la bacteria ya se encontraba adaptada
al medio.

La fase exponencial se evidencia, debido a que el crecimiento se lo denota mediante el

incremento de la masa, como se evidencia en las gráficas 4 y 5, misma que representa el
comportamiento del crecimiento de este microorganismo a lo largo del tiempo y el
logaritmo natural de ufc.

La cantidad de biomasa que se formó se mantuvo constante debido al equilibrio

termodinámico entre la tasa de crecimiento y la tasa de mortalidad, esta fase es conocida
como estacionaria ya que no hubo ni aumento ni disminución de la biomasa
encontrándose en un punto intermedio.(Muñoz; 2013).

Para las gráficas 6 y 7 la relación entre absorbancia y ln ufc van a diferir una de otra en
la dilución, que de alguna forma no va a tener una relación que amerite ser tomada en
cuenta ya que los valores de absorbancia no siempre son dependientes.

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1. Conclusiones

Se evaluó la curva de crecimiento en base a la cantidad de biomasa obtenida

encontrándose que E. coli no presento fase lag puesto que la adaptación al medio fue
rápida, iniciando directamente con la fase exponencial y terminando con la fase
estacionaria.

Se calcularon los valores de ufc y su relación con el tiempo existiendo una tasa de
variación de crecimiento de E.coli en diferentes periodos en los cuales se evidencio un
crecimiento creciente.

Se estableció que los valores de absorbancia ayudan a tener una concepción del
crecimiento microbiano por su relación directa con la densidad del cultivo y por la
concentración del mismo conforme pasa el tiempo.
 5.2. Recomendaciones
Tener precisión en cuanto al tiempo y mayor exactitud al momento de pesar para
conseguir valores más reales.

Realizar las mediciones en el espectrofotómetro con mucho cuidado y especialmente

revisar que las celdas se encuentre completamente limpias y sin huellas dactilares que
impidan que la medición se vea alterada.

6. BIBLIOGRAFÍA

Aguirre, O. A & Morales, E.D. (2010). Crecimiento bacteriano. Universidad de Quindio,

Facultad de Educación. (11/06/19).

Anónimo (1988): Fehling (Germán). Enciclopedia Universal Ilustrada Europeo-Americana,

23, 560. Madrid, Espasa-Calpe. pg 529

Hernández, A. (2008). Microbiología Industrial. Editorial Universidad Estatal a Distancia.

México
Muñoz, J. (2013). Curva de Crecimiento. Int.
DairyJ.17(6):657665.http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S037
8-78182009000200006 (11/06/19).

Díaz, 2017. “Caracterización Microbiológica” Obtenido en:

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/2685/5__Caracterizaci%C3%B3n_micr
obiol%C3%B3gica.pdf?sequence=10 el (11/06/19).