ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”

Trypanosoma cruzi
Tiene dos fases clínicas muy distintas: fase aguda y fase crónica. En fase aguda, para diagnosticarlo, se
utilizan métodos directos y en fase crónica, se utilizan métodos indirectos.
Es un parásito heteroxeno, produce la enfermedad de Chagas. Un parasito heteroxeno es el que pasa por
varios hospedadores a lo largo del tiempo. Se encuentra mayoritariamente en el continente americano, la
transmisión vectorial es exclusiva de este continente. El vector es la chinche (Familia Reduviiidae) .
TRANSMISIÓN
El 80% han sido adquiridos por transmisión vectorial, por picaduras de especies hematófagas de
Reduviidae (chinches de trompa cónica o besadoras).
También se transmite por trasplante de órganos , o accidentes de laboratorio (<1%). También por vía
transfusional, congénita y oral. También puede traspasar fronteras , en cualquier parte del mundo, y son
los principales problemas de diagnóstico. En los últimos años, también se ha barajado la transmisión oral
por ingestión de alimentos contaminados con chinches o heces de las chinches (Caracas, caso años 80,
zumo con fruta, contaminado con heces de chinche ). Este tipo de transmisión se puede dar en donde se
encuentra el vector, circunscrito a zonas endémicas.
EPIDEMIOLOGÍA
Los bichos pueden medir hasta 2 cm de ancho, se encuentran donde haya materia orgánica y bicho de
sangre caliente (mamífero) donde pueda picar y alimentarse de sangre (hematófaga). En tejados, casa de
adobe, barro…
CICLO BIOLÓGICO
Al alimentarse de sangre, se hincha su abdomen hasta que defeca. Este parásito se transmite a través de
las heces durante la picadura, se produce la molestia y entra al rascarse al hospedador, y las heces
toman contacto con la sangre de la herida. Suelen picar alrededor de la cara, los ojos, se produce una
inflamación unilateral palpebral, que es una inflamación del párpado, que ocurre por la picadura, al
rascarse, se arrastra las heces y entra por la conjuntiva.
Entra en forma de tripomastigotes metacíclicos, luego evolucionan a amastigote en el hospedador. Dentro
de la chinche se multiplica de epimastigote a tripomastigote metacíclico que se encuentra en heces.
Cuando entran en contacto con la sangre (mucosa, conjuntiva, esófago), no son capaces de sobrevivir
mucho en el torrente sanguíneo, entonces, entran en células como macrófagos (Que tienen como función
fagocitar los elementos extraños , pero sobreviven y prosperan), aunque también en células musculares,
epiteliales y células nerviosas. Los tripomastigotes se transforman en amastigote donde se multiplican por
fisión binaria , crecen hasta que se rompe la célula, y vira o través al salir de la célula, a tripomastigote que
buscan otras células como las nombradas anteriormente. Cuando la célula está llena, se rompe, por eso
vira de amastigote a tripomastigote (forma alargada). Los tripomastigotes tienen unas moléculas en la
superficie que tienen la cualidad de resistir al complemento. Para poder continuar el ciclo cambian de
tripomastigote (puede estar en el torrente sanguíneo).
¿CÓMO SE INFECTA LA CHINCHE?
Cuando se alimenta de sangre de alguien infectado.
Cuando mantenemos ese ciclo durante unas semanas. Se va a producir fiebre, linfadenopatías(inflamación
de los ganglios linfáticos), malestar, inflamación en la zona de la picadura. Esto va a ocurrir de 2-4-8 a 10
 ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”

semanas como máximo. El sistema inmune se va activar y va a producir una respuesta que puede tardar
entre 2- 10 semanas. El parásito va a dejar de multiplicarse en sangre y va a refugiarse en el interior de los
tejidos (células musculares, epiteliales y nerviosas). Entran en una medio fase de latencia, donde pueden
estar años en el hospedador . El parásito puede reactivarse si de da una inmunosupresión (trasplante).

FASE AGUDA (2-10 SEMANAS)

El parásito va a estar mayoritariamente en sangre, cuando haya pasado 3 meses, el parásito va a estar en
tejidos.
Multiplicación intensa de parásitos en células a sangre periférica ( se multiplican dentro de las células). Es
de intensidad y duración variables. En la primera fase es asintomática (90%), por sintomatología
inespecífica. Los que se enteran que están enfermos son los que presentan:
-Un chagoma de inoculación ( inflamación tisular)
- edema palpebral ( signo de romaña)
- Linfadenopatía regional (inflamación de los ganglios más próximos a la picadura, como los del cuello o
cara)
- Fiebre irregular (38-40%)
- Exantemas cutáneos
En la fase aguda, puede ocurrir el fallecimiento del 5 o 10 % de los pacientes por miocarditis y
meningoencefalitis.
FASE DE LATENCIA O INDETERMINADA
Hay respuesta humoral y celular, y empezamos con la fase de latencia o indeterminada, que puede durar
años (10-20 años). Es asintomática, el parásito se encuentra en tejidos como musculatura lisa, miocardio,
colón, esófago. La serología da positiva, y se utiliza la PCR (reacción en cadena de la polimerasa que
detecta específicamente el ADN del parásito), que si se toma una muestra de sangre en esta fase, se hace
la PCR, da negativa, porque los parásitos no están en sangre (mayor parte de los casos, algunos de los
 ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”

casos puede ser positiva). Esta última no es una prueba diagnóstica. Generalmente se detectan en cribado
de donantes de sangre o embarazadas. El 60% de los pacientes permanecen en esta fase.
En nuestro medio, la mayoría de casos se detectan en embarazadas, niños o transfusiones de sangre.
PATOLOGÍA-FASE CRÓNICA
En fase crónica, la patología se da en 10-20 años después de la fase aguda, o incluso sin ella.
Sintomática:
30%: Cardiopatía chagásica- se dan trastornos del ritmo, bloqueos, cardiomegalia, e insuficiencia cardiaca.
Se produce daño cardiaco, siendo característico, un aneurisma apical .
10%: formas digestivas: megacolon y megaesófago. Si se multiplican en tejidos, el tejido se dilata y pierde
la capacidad de contraerse, se acumulan los restes fecales, y se dilata todavía más.
DIAGNÓSTICO
La mayoría de los casos que vamos a ver para el diagnóstico es que sean de Latinoamérica, primero
tomaremos una muestra de sangre, otras opciones son un aspirado del ganglio o de la zona de la
inflamación como el Chagoma, pero estas son más invasivas. Con la muestra de sangre, se analiza, se
realiza en frotis o extensión fina, gota fina o gota gruesa. En el frotis, los parásitos estarán en forma
tripomastigote en forma extracelulares. Hay que realizar un tinción con Giemsa.
El diagnóstico microscópico es lo indicado en fase aguda. En fase indeterminada no se debe utilizar
métodos microscópicos
En fase indeterminada o de latencia utilizaré un test serológico (IFI, ELISA), porque es sencillo, barato,
fiable y poco invasible.
En fase aguda, se debe demostrar la presencia del parásito, observación en sangre o aspirado del
chagoma o del ganglio linfático.
-Concentración: frotis, gota gruesa, microhematocrito, Strout
–Tinción: Giemsa

MORFOLOGÍA
El flagelo es la parte anterior del parásito, el amastigote es intracelular, se encuentra en los tejidos. El
kinetoplasto, es una especie de mitocondria grande modificada que se encuentra siempre situado en la
base del flagelo, pero entre otras funciones, genera la energía suficiente para el movimiento del flagelo. Es
clave para la identificación microscópica del parásito. Hay que ver la presencia del núcleo y del
kinetoplasto. Kinetoplasto se encuentra en la fase posterior,
alargado, fusiforme, membrana ondulante (tripomastigote)
La amastigote se encuentra intracelular, mayoritariamente en
células musculares, sin flagelos, pero siguen teniendo su
núcleo y quinetoplasto.
 ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”

Hay dos métodos específicos de concentración para observar el Trypanosoma. Si la concentración no es

muy alta, aumenta la probabilidad de detectar los parásitos en sangre.
Strout: dos métodos de centrifugación diferencial, que permite diferenciar y separar las células
sanguíneas y dejarnos con el plasma y los Trypanosomas.
Se coge 3 ml de sangre
– Dejar coagular (2h, 37ºC)
– Separar suero y centrifugar 50 x g, 5 min.
– Tomar sobrenadante y cent. 400 x g, 10 min.
– Tomar sedimento: plaquetas y T.cruzi
• Mirar en fresco: motilidad (se mueven si tienen pocas horas fuera)
• Fijar y teñir: Giemsa (eliminar metanol, Giemsa, teñir, lavar )
Nos quedamos con el sedimento y lo pongo entre porta y cubre, se ve siempre que la muestra esté recién
tomada, entonces están vivos si se están moviendo. Pueden sobrevivir fuera del cuerpo durante unas
horas.
Microhematocrito: es un método muy útil sobre todo para lactantes o recién nacidos. No se le puede
sacar un volumen muy grande de sangre. Técnica que permite captar 4 o 5 gotas de sangre, que se cogen
con un capilar de microhematocrito. En un disco plano, se centrifuga. En la fase baja queda los hematíes,
entre medio los leucocitos y se quedan los Trypanosoma, y luego la parte superior es el plasma. Se parte y
se toma la interfase, se mira entre porta y cubre y se fija y tiñe con Giemsa.
En fase indeterminada y fase crónica, se encuentra fundamentalmente en células musculares, se puede
realizar una biopsia de tejidos (si es post-mortem, o se tiene que realizar ya anteriormente para otra cosa)
pero no es una opción adecuada. Se va a utilizar como primera opción, determinación de IgG por ELISA,
IFI, WesternBloth…(Los IgM son los primeros anticuerpos que se producen en la infección, y duran pocos
meses, por lo que no se van a encontrar). Puede haber reacciones cruzadas con otros parásitos como
Leishmania sp., o Plasmodium, etc. Los métodos directos detectan antígenos (del bicho, o parte del bicho),
los indirectos detectan anticuerpos (de lo que produce el bicho). Si cojo un péptido, de un trozo de proteína
que yo fabrico y selecciono en el laboratorio, cuando lo utilice con antígeno, solo me va a reaccionar con
pacientes de Trypanosoma. La OMS recomienda que para el diagnóstico se utilicen dos o tres tipos de
pruebas con diferentes tipo de antígeno. En España hay muchos kits que se pueden comprar, en la
mayoría especifican la especificidad y sensibilidad.
ELISA es un método de detección de anticuerpos.
 ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”

La técnica ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: ‘ensayo por
inmunoabsorción ligado a enzimas’) es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado
se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como
cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos
encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido
por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de
colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.
Otro método que se puede utilizar es la aglutinación indirecta, se utiliza unas partículas de látex, se pega
el antígeno por fuera, y después se detecta la unión del antígeno anticuerpo. Se sensibilizan glóbulos rojos
o partículas con antígenos parasitarios. Estas partículas sensibilizadas son aglutinados por anticuerpos
específicos.

Métodos que pueden dar resultados en ambas fases:

- Xenodiagnóstico, poner en cultivo, chinches, dejar que piquen a los pacientes, y luego durante 30
a 60 días, ver y examinar las heces de las chinches, para ver si hay parásito. Es extremadamente
sensible. Tiene un inconveniente, tarda mucho (Casi dos meses para que salgan tripomastigotes
en las heces). No es una opción clínica para fase aguda, en fase indeterminada no resuelve mucho
el problema, es una opción , podría estar indicado, en nuestro medio no se hace.
- Hemocultivo: tomar una muestra de sangre en un cultivo, material de aspirados de nódulos
linfáticos, contenidos intestinal de triatómidos. En 5 días, se puede decir si aparece, que es
positivo, pero si es negativo, se deja más tiempo. En fase aguda, se toman 0,5-1 mL , y en fase
crónica, se utilizan en 30 mL porque hay menos cantidad en sangre (mayoría intracelular).
- Diagnóstico por detección de ADN del parásito: en fase aguda y crónica, mejor en fase aguda.
Combinación de PCRs diferentes
.
Para fase indeterminada o crónica, estaría
indicado el xenodiagnóstico.
En fase aguda, el hemocultivo y el diagnóstico
por detección de ADN del parásito.
 ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”

EPIDEMIOLOGÍA

En todos los países de Europa occidental, Asia, Australia, hay transmisión congénita. En azul, es donde se
produce la transmisión vectorial, que es exclusivamente Americana.
La enfermedad de Chagas en zonas no endémicas:
Infección congénita transfusional y trasplante de órganos
• Mujeres en edad de concebir que están en el periodo indeterminado de Ech. En cada uno de sus
embarazos , puede nacer un niño con enfermedad de Chagas.
• Tasa de transmisión vertical varía: Bolivia 5%, Argentina 0,5 10% ...
• Algunos neonatos infectados son asintomáticos; inician síntomas de adultos ( miocardiopatía ,
megaesófago , megacolon…)
• Algunos casos sintomáticos: hepatoesplenomegalia , dificultad respiratoria, signos neurológicos , bajo
peso…
El tratamiento en la fase aguda es efectivo, sin embargo en la fase indeterminada o crónica, es difícil la
efectividad. En fase indeterminada, no se si el paciente se ha curado.
El RD sobre hemodonación, excluye de forma automática y definitiva los donantes con enfermedad de
Chagas.
En caso de transmisión vertical, se debe hacer métodos serológicos y convencionales tipo ELISA , IFI, y
no convencionales , antígenos recombinantes, y PCR.
TRATAMIENTO
Adminisitrarlo lo antes posible después del contagio, en fase aguda.
En fase crónica, hay controversia con el tratamiento, porque dicen que no produce efectos positivo. Está
contraindicado en insuficiencia renal y gestantes y tiene varios efectos adversos como gastrointestinales,
cutáneos y neurológicos.
Hay dos fármacos: benznidazol y nifurtimox.
 ANÁLISIS BIOLÓGICOS Y DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
1º CUATRIMESTRE 5º GRADO EN FARMACIA

TEMA 1: DETECCIÓN DE PARÁSITOS HEMÁTICOS Y TISULARES –

“TRYPANOSOMA CRUZI”