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Universidad de Costa Rica

Facultad de Farmacia
Departamento de Farmacia Industrial
FA-0338 Laboratorio de Biofarmacia y
Farmacocinética
II ciclo 2018

Informe. Estudio de liberación in vitro de Ácido Salicílico


a partir de diferentes bases de ungüentos

Stefanny Martínez Carpio Carné: B23931


Número de grupo de laboratorio: 054 Fecha: 28-08-19

El informe de laboratorio tiene un valor total de 100 puntos. 10 puntos correspondientes a la


valoración del docente acerca del desempeño en el laboratorio (este incluye la elaboración
de la libreta de laboratorio, el aporte de materiales de laboratorio y la ejecución de la
práctica). Los restantes 90 puntos se detallan a continuación. Su entrega es virtual.

OBSERVACIONES (2 puntos)

• Los resultados de las absorbancias del ungüento cold cream y el lipofílico pudieron
verse afectados por el papel celofán que se salía en forma desordenada del frasco y
que estaba en contacto con la disolución, pudo haber ocurrido una reabsorción por
medio de ese papel y en parte de la tapa del frasco, de ahí que las absorbancias
resultantes variaran muy poco, y las muestras analizadas en espectrofotometría
parecían no tener mayor concentración del complejo de salicilato de hierro (III).
• En la parte del espectro de absorción, se realizó una nueva curva para obtener una
longitud de onda óptima que resultó ser de 540 nm. Sin embargo, las curvas de
absorbancia vs concentración del complejo salicilato se trabajaron con una longitud
de onda de 530 nm, porque no se había averiguado aún la longitud de onda óptima.

RESULTADOS (55 puntos)

Cuadro No1. Información para el espectro de absorción para el complejo de salicilato-Fe3+


(2 puntos)

Longitud de 505,0 510,0 515,0 520,0 525,0 530,0 535,0 540,0


onda (nm)
Absorbancia 0,410 0,430 0,445 0,458 0,468 0,472 0,474 0,475
(UA)

Fuente: Quesada J, Sánchez T. Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética.


Fa-0338. 28 de agosto del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

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Cuadro No2. Curva de calibración de ácido salicílico medido a 530nm (3 puntos)

Concentración μg/mL Absorbancia U.A.

20 0,171
40 0,343
60 0,492
80 0,664
100 0,819
Pendiente 0,00809
Intercepto 0,0127
r2 0,9995
r 0,9997
Fuente: Quesada J, Sánchez T. Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética.
Fa-0338. 28 de agosto del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

Gráfica de la curva de calibración (indicando la ecuación de la recta y el r2) (2 puntos).


0,900
0,800 A = (0,00809±0,00010) C + (0,0127±0,0066)
R² = 0,9995
Absorbancia / U.A.

0,700
0,600
0,500
0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
0 20 40 60 80 100 120
Concentración / μgmL-1

Figura 1. Curva de calibración del ácido salicílico medido a una longitud de onda de 530 nm, bajo
condiciones normales de laboratorio.

Fuente. Cuadro No2 del presente informe

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Cuadro No3. Medida de la masa del ungüento utilizado en el estudio de liberación in vitro
(2 puntos)

Masa del
Masa del
Tipo de pote con Masa de
pote vacío,
Ungüento ungüento, ungüento (g)
(g)
(g)

Hidrofílico 97,1589 110,5342 13,3753


Cold Cream 111,6194 120,3336 8,7142
Lipofílico 99,0732 109,322 10,2488

Fuente: Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética. Fa-0338. 28 de agosto


del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

Cuadro No4. Resultados correspondientes al estudio de liberación in vitro a partir de


diferentes ungüentos (3 puntos)

Cantidad
total de
ácido
salicílico
Tipo de en la Diámetro,d Superficie,S
ungüento cantidad de
ungüento
utilizado,
A∞
(mg) (cm) (cm2)
Hidrofílico 401,259 3 7,0686
Cold
261,426 3 7,0686
Cream
Lipofílico 307,464 3 7,0686

Fuente Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética. Fa-0338. 28 de agosto


del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

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Cuadro No5. Resultados obtenidos de la liberación de ácido salicílico a partir del ungüento
hidrofílico (9 puntos)

Cantidad por
Tiempo Absorbancia Cantidad Porcentaje Porcentaje Velocidad
difundir
min U.A. Difundida De (A∞-At) por difundir de difusión
Concentración
µg / mL mg Difusión mg % ___mol__
% min x cm2

5 0,232 27,1243 2,7124 0,68 398,5466 99,32 5,5565E-07


10 0,262 30,8349 3,0835 0,77 398,1755 99,23 3,1583E-07
15 0,280 33,0612 3,3061 0,82 397,9529 99,18 2,2576E-07
20 0,296 35,0402 3,5040 0,87 397,7550 99,13 1,7945E-07
25 0,312 37,0192 3,7019 0,92 397,5571 99,08 1,5167E-07
30 0,325 38,6271 3,8627 0,96 397,3963 99,04 1,3188E-07
35 0,339 40,3587 4,0359 1,01 397,2231 98,99 1,1811E-07
40 0,350 41,7192 4,1719 1,04 397,0871 98,96 1,0683E-07
45 0,365 43,5745 4,3575 1,09 396,9015 98,91 9,9182E-08
50 0,371 44,3166 4,4317 1,10 396,8273 98,90 9,0784E-08
55 0,383 45,8009 4,5801 1,14 396,6789 98,86 8,5295E-08
60 0,391 46,7904 4,6790 1,17 396,5800 98,83 7,9876E-08

Fuente Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética. Fa-0338. 28 de agosto


del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

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Cuadro No6. Resultados obtenidos de la liberación de ácido salicílico a partir del ungüento
Cold Cream (9 puntos)

Cantidad por
Tiempo Absorbancia Cantidad Porcentaje Porcentaje Velocidad
difundir
min U.A. Difundida De (A∞-At) por difundir de difusión
Concentración
µg / mL mg Difusión mg % ___mol__
% min x cm2

5 0,164 18,7137 1,8714 0,72 259,5546 99,28 3,8335E-07


10 0,162 18,4663 1,8466 0,71 259,5794 99,29 1,8914E-07
15 0,161 18,3426 1,8343 0,70 259,5917 99,30 1,2525E-07
20 0,163 18,5900 1,8590 0,71 259,5670 99,29 9,5205E-08
25 0,164 18,7137 1,8714 0,72 259,5546 99,28 7,6671E-08
30 0,163 18,5900 1,8590 0,71 259,5670 99,29 6,3470E-08
35 0,163 18,5900 1,8590 0,71 259,5670 99,29 5,4403E-08
40 0,162 18,4663 1,8466 0,71 259,5794 99,29 4,7286E-08
45 0,160 18,2189 1,8219 0,70 259,6041 99,30 4,1469E-08
50 0,161 18,3426 1,8343 0,70 259,5917 99,30 3,7575E-08
55 0,161 18,3426 1,8343 0,70 259,5917 99,30 3,4159E-08
60 0,160 18,2189 1,8219 0,70 259,6041 99,30 3,1102E-08

Fuente Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética. Fa-0338. 28 de agosto


del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

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Cuadro No7. Resultados obtenidos de la liberación de ácido salicílico a partir del ungüento
lipofílico (9 puntos)

Cantidad por
Tiempo Absorbancia Cantidad Porcentaje difundir ,A∞- Porcentaje Velocidad
At)
min U.A. Concentración Difundida de difusión (mg ) por difundir de difusión
(µg / mL)
(mg) % % ___mol__
min x cm2

5 0,118 13,0241 1,3024 0,42 306,1616 99,58 2,6680E-07


10 0,104 11,2925 1,1293 0,37 306,3347 99,63 1,1566E-07
15 0,109 11,9109 1,1911 0,39 306,2729 99,61 8,1333E-08
20 0,100 10,7978 1,0798 0,35 306,3842 99,65 5,5299E-08
25 0,102 11,0451 1,1045 0,36 306,3595 99,64 4,5252E-08
30 0,103 11,1688 1,1169 0,36 306,3471 99,64 3,8133E-08
35 0,101 10,9215 1,0921 0,36 306,3719 99,64 3,1961E-08
40 0,104 11,2925 1,1293 0,37 306,3347 99,63 2,8916E-08
45 0,096 10,3030 1,0303 0,34 306,4337 99,66 2,3451E-08
50 0,101 10,9215 1,0921 0,36 306,3719 99,64 2,2373E-08
55 0,095 10,1793 1,0179 0,33 306,4461 99,67 1,8957E-08
60 0,097 10,4267 1,0427 0,34 306,4213 99,66 1,7799E-08

Fuente Grupo 54. Laboratorio de Biofarmacia y Farmacocinética. Fa-0338. 28 de agosto


del 2019. Universidad de Costa Rica, San José, Costa Rica.

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Figura N°2. Grafique en una misma gráfica el porcentaje difundido vs tiempo. 3 puntos.

1,40 Hidrofilico Cold Cream Lipofilico

1,20
Porcentaje difundido / %

1,00

0,80

0,60

0,40

0,20

0,00
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo / min

Figura 2. Porcentaje difundido de los ungüentos vs tiempo

Fuente: Cuadros No5, No 6 y No 7.

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Figura N°3. Grafique en una misma gráfica el porcentaje por difundir vs tiempo. 3 puntos.

Hidrofilico Cold Cream Lipofilico

99,80
Porcentaje por difundir / %

99,70
99,60
99,50
99,40
99,30
99,20
99,10
99,00
98,90
98,80
98,70
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo / min

Figura 3. Porcentaje que queda por difundir de los ungüentos vs tiempo

Fuente: Cuadros No5, No 6 y No 7.

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Figura N°4. Grafique el logaritmo natural del porcentaje por difundir vs tiempo (ecuación de
la recta y el r2). 7 puntos.

Hidrofilico Cold Cream Lipofilico


4,6030
4,6020
Ln del porcentaje por difundir

4,6010 Ln% = 1E-05t + 4,6012


4,6000 R² = 0,6037
4,5990
4,5980
4,5970 Ln% = 2E-06t + 4,598
R² = 0,4352
4,5960
4,5950
4,5940 Ln% = -9E-05t + 4,5983
R² = 0,9766
4,5930
4,5920
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo / min

Figura 4. Logaritmo del Porcentaje que queda por difundir de los ungüentos vs tiempo

Fuente: Cuadros No5, No 6 y No 7.

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Figura N°5. Velocidad de difusión vs tiempo. 3 puntos.

Hidrofilico Cold Cream Lipofilico


7,0E-07
Velocidad de difusión / molmin-1cm-2

6,0E-07

5,0E-07

4,0E-07

3,0E-07

2,0E-07

1,0E-07

0,0E+00
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo / min

Figura 5. Velocidad de difusión de los ungüentos vs tiempo

Fuente: Cuadros No5, No 6 y No 7.

DISCUSIÓN (20 puntos)

Una forma farmacéutica se compone de un principio activo, que es la sustancia con efecto
medicamentoso o terapéutico, así como varios excipientes que tienen como objetivo el
facilitar la administración y luego la liberación del principio activo, la liberación es el proceso
mediante el cual se separa el principio activo del medicamento o forma farmacéutica para ser
posteriormente absorbido en el organismo. Este proceso depende en gran medida de la forma
farmacéutica y de la vía de administración que se utilice (1).
En el caso de este laboratorio, se utilizó la forma farmacéutica de ungüento cuya vía de
absorción es percutánea y su administración es tópica. El principio activo debe atravesar las
distintas estructuras que componen la piel hasta llegar a la circulación. El factor limitante
para la absorción de estas formas farmacéuticas es la liberación del principio activo, y es

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necesario que suceda de manera adecuada y efectiva para lograr una correcta absorción y por
ende conseguir el efecto terapéutico deseado (2).
Los ungüentos con ácido salicílico (figura 6) se absorben de manera percutánea luego de la
administración tópica, sin embargo, a dosis normales la exposición sistémica se considera
insignificante por lo que su efecto es local. Debido a la acción queratolítica de este ácido, se
utiliza para eliminar el exceso de queratina en los trastornos de la piel hiperqueratósicos,
como por ejemplo las verrugas comunes y plantares, en la psoriasis, dermatitis seborreica,
callos y a su vez funciona para tratar el acné (3)

Figura 6. Estructura molecular del ácido salicílico (4).


La molécula de ácido salicílico, como se observa en figura 6, posee una parte polar
constituida por los grupos hidroxilo junto con el ácido carboxílico y una parte predominante
que es no polar, conformada por un anillo aromático. Lo anterior hace que la molécula posea
un comportamiento no polar en disolución y sea más afín a bases de ungüento lipofílicas (5)
y estas se utilizan como vehículos del fármaco.
Para determinar la cantidad (concentración) de ácido salicílico liberada de los diferentes tipos
de ungüentos que se utilizaron en este laboratorio (hidrofílico, lipofílico y uno tipo cold
Cream), se utilizó la técnica de espectrofotometría UV-Visible, midiendo la absorbancia del
complejo salicilato de hierro (III) que se forma como producto de la reacción entre el ácido
salicílico y el nitrato de hierro (III), utilizando previamente un sistema de difusión del
ungüento a una solución acuosa de nitrato de hierro (III) a través de un trozo de papel celofán,
que funcionó como una membrana semipermeable.
En la figura 1 se observa la curva de absorbancia que se obtuvo de soluciones patrón con
distintas concentraciones conocidas del complejo, así como la ecuación de la recta su
respectivo r .
2

En la figura 2 se muestran los valores de porcentaje de ácido salicílico difundido según el


tipo de ungüento en el que se encontraba contenido. Se aprecia claramente que conforme
avanza el tiempo el porcentaje difundido de la base hidrofílica es mayor, seguido por el
porcentaje de la cold cream y de ultimo la base lipofílica (hidrofóbica). Estos resultados

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tienen sentido ya que al tratarse de un medio acuoso, difundirá más el ungüento afín al medio
que en este caso es la base hidrofílica.
En cuanto al porcentaje de los ungüentos que queda por difundir con respecto al tiempo
(figura 3), el comportamiento es inverso al de la figura 2. En este caso, queda por difundir
mayor cantidad en la base lipofílica, luego sigue en ese orden la cold cream y por último la
base hidrofílica. Esto coincide con lo esperado puesto que el ungüento hidrofílico al tener
mayor porcentaje de ácido difundido, tiene menos principio activo disponible para difundir.
En la misma figura 3 se observa al inicio de las curvas de la base hidrofílica y la cold cream
que éstas se intersecan, esto podría deberse a que la masa del ungüento agregada en cada caso
es distinta, y al depender de la masa se presenta este tipo de comportamientos en los primeros
minutos.
Al linealizar los datos utilizando un modelo cinético de orden uno, se obtiene el logaritmo
natural del porcentaje por difundir con respecto al tiempo que se pueden apreciar en la figura
4, donde se observa el comportamiento similar al de la Figura 3, en este caso el mayor
porcentaje por difundir corresponde a los datos del ungüento lipofílico y el menor porcentaje
por difundir corresponde al ungüento hidrofílico. Además, es posible notar que el
comportamiento del ungüento hidrofílico es más brusco, lo cual se comprueba con el valor
de la pendiente mayor que el de los otros dos ungüentos. Es importante resaltar que la
pendiente en este modelo cinético corresponde a la velocidad de la reacción (4), por lo que
en este caso el ungüento que libera su principio activo más rápidamente es el hidrofílico,
posteriormente el ungüento cold cream y el que presentaría una menor constante de velocidad
es el ungüento lipofílico. Sin embargo, debido a que las absorbancias del ungüento lipofílico
y del cold cream no variaban significativamente por la reabsorción del complejo en el papel
celofán, este resultado se vio un poco desviado del ideal, basta con observar los R2 de las
rectas.
La velocidad de difusión instantánea en el tiempo se denota en la Figura 5, en general para
los tres tipos de ungüentos esta disminuye en función del tiempo, sin embargo, es evidente
que en los primeros 25 minutos la diferencia de velocidad de difusión entre los tres tipos de
ungüentos es mayor que después de los 25 minutos, cuando los valores de velocidad son
similares para los distintos ungüentos. Esto coincide con lo esperado pues la velocidad de
difusión de un fármaco está relacionada con la Ley de Fick, por lo tanto; factores como el
área de superficie, el gradiente de concentración, la permeabilidad de la membrana, así como
su espesor afectan la difusión del principio activo. En este caso se observa que la velocidad
de difusión es mayor cuando la concentración de principio activo en el medio es cero, pero
conforme avanza el tiempo el gradiente de concentración es menor (6). En las últimas
mediciones se observa un comportamiento constante, esto indica que se está llegando al
equilibrio de difusión, que ocurre cuando las concentraciones de fármaco son semejantes en
ambos lados de la membrana (4)(7).

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Al observar las gráficas anteriores es evidente que el ungüento hidrofílico presenta mayor
velocidad de difusión, así como mayor porcentaje de difusión y menor porcentaje por
difundir, debido a que la liberación se da en condiciones similares para los tres tipos de bases,
es fácil inferir que esta diferencia se debe a la naturaleza de los ungüentos y cómo estos
interactúan con la estructura del principio activo, y a su vez con el medio en el cual se libera
el fármaco. Por ello el ácido salicílico se libera con mayor facilidad del ungüento hidrofílico
y con menor facilidad del ungüento lipofílico, mientras que con el ungüento cold cream tiene
un comportamiento intermedio.

CONCLUSIONES (10 puntos)

Se logró comprobar que hay una correlación lineal entre la absorbancia y la concentración
del ácido salicílico, donde a mayor concentración, mayor absorbancia.
Con base en el análisis de los datos obtenidos del presente laboratorio se puede concluir que
existe diferencias en el porcentaje difundido, porcentaje por difundir, así como la velocidad
de difusión según la naturaleza del ungüento que se utilice en la forma farmacéutica, se
determinó que el ungüento hidrofílico presenta mayor porcentaje de principio activo
difundido, menor porcentaje de principio activo por difundir y mayor velocidad de difusión,
seguido por el ungüento cold cream y por último el ungüento lipofílico es quien presenta
menor porcentaje difundido, mayor porcentaje por difundir y menor velocidad de difusión.
Además, se observó un comportamiento de difusión acorde con la Ley de Fick y una
tendencia a presentar una velocidad de difusión constante en los tres ungüentos conforme
avanza el tiempo, lo cual indica que se está cerca de alcanzar el equilibrio con el medio
En general los resultados obtenidos fueron los esperados para este laboratorio, a excepción
de la parte de las velocidades de difusión, dado el problema de la reabsorción que pasó con
el papel celofán mal acomodado. Como recomendación es necesario ser cuidadosos a la hora
de armar un sistema o un equipo de trabajo, tomar las mediciones de manera adecuada y ser
organizados, de esta forma se reduce la posibilidad de incurrir en errores que repercutan en
los resultados.

BIBLIOGRAFÍA (3 puntos)

1. ACS Reagent Chemical. Monograph. Salicylic Acid.DOI:10.1021/acsreagents.4318,


2017.
2. Bolaños J, March M. Farmacología Ocular. Barcelona: Ediciones UPC, 2002.

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3. Herrero GH, Gonzalez AM, Chavarino AP, Garcia FZ. Tratado de Medicina
Farmacéutica. Madrid: Editorial Médica Panamericana, 2010.
4. Le J. Distribución del fármaco en los tejidos. Manual MSD.Merck Sharp & Dohme
Corp. Recuperado de: https://www.msdmanuals.com
5. Standard G. Drug Monograph. Salicylic Acid. ClinicalKey. Elsevier, 2017.

6. Silverthon D. Fisiología Humana. Un Enfoque Integrado. Buenos Aires: Médica,


2009.
7. Aulton M. Farmacia, La ciencia del diseño de las formas farmacéuticas. Madrid:
Elsevier, 2004.

ANEXOS

Cuadro No8. Análisis de datos de la regresión lineal de la figura 1.

Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación
múltiple 0,999774619
Coeficiente de determinación
R^2 0,999549289
R^2 ajustado 0,999399052
Error típico 0,006268971
Observaciones 5

ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de Suma de Promedio de los
libertad cuadrados cuadrados
Regresión 1 0,2614689 0,2614689
Residuos 3 0,0001179 3,93E-05
Total 4 0,2615868

Coeficientes Error típico Estadístico t


Intercepción 0,0127 0,00657495 1,9315729
Variable X 1 0,008085 0,00010 81,5668601

Fuente: Datos de Excel generados a partir del cuadro No2 del presente informe.

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Universidad de Costa Rica
Facultad de Farmacia
Departamento de Farmacia Industrial
FA-0338 Laboratorio de Biofarmacia y
Farmacocinética
II ciclo 2018

Cuadro No9. Análisis de datos para la regresión lineal del logaritmo natural del porcentaje
difundido con respecto al tiempo para el ungüento Hidrofílico

Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación
múltiple 0,98825578
Coeficiente de determinación
R^2 0,97664949
R^2 ajustado 0,97431444
Error típico 0,00025117
Observaciones 12

ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de Suma de Promedio de los
libertad cuadrados cuadrados
Regresión 1 2,6387E-05 2,6387E-05
Residuos 10 6,3088E-07 6,3088E-08
Total 11 2,7018E-05

Coeficientes Error típico Estadístico t


Intercepción 4,59827256 0,00015459 29745,539
Variable X 1 -8,5913E-05 4,2008E-06 -20,4513129

Fuente: Datos de Excel generados a partir del cuadro No5 del presente informe.

Cuadro No10. Análisis de datos para la regresión lineal del logaritmo natural del porcentaje
difundido con respecto al tiempo para el ungüento cold cream

Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación
múltiple 0,65966081
Coeficiente de determinación
R^2 0,43515239
R^2 ajustado 0,37866763
Error típico 5,3116E-05
Observaciones 12

15
Universidad de Costa Rica
Facultad de Farmacia
Departamento de Farmacia Industrial
FA-0338 Laboratorio de Biofarmacia y
Farmacocinética
II ciclo 2018

ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de Suma de Promedio de los
libertad cuadrados cuadrados
Regresión 1 2,1735E-08 2,1735E-08
Residuos 10 2,8213E-08 2,8213E-09
Total 11 4,9948E-08

Coeficientes Error típico Estadístico t


Intercepción 4,5980013 3,2691E-05 140651,466
Variable X 1 2,4657E-06 8,8836E-07 2,77558825
Fuente: Datos de Excel generados a partir del cuadro No6 del presente informe.

Cuadro No11. Análisis de datos para la regresión lineal del logaritmo natural del porcentaje
difundido con respecto al tiempo para el ungüento lipofílico.

Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación
múltiple 0,77696052
Coeficiente de determinación
R^2 0,60366764
R^2 ajustado 0,56403441
Error típico 0,00016611
Observaciones 12

ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de Suma de Promedio de los
libertad cuadrados cuadrados
Regresión 1 4,2029E-07 4,2029E-07
Residuos 10 2,7594E-07 2,7594E-08
Total 11 6,9623E-07

Coeficientes Error típico Estadístico t


Intercepción 4,60119878 0,00010224 45005,7237
Variable X 1 1,0843E-05 2,7782E-06 3,90273608

Fuente: Datos de Excel generados a partir del cuadro No7 del presente
informe.

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