Universidad de la Sabana
Laboratorio de Bioquímica
ESPECTROFOTOMETRIA
Espectrofotometría: Medición y cuantificación espectrofotométrica
de los polifenoles de la Mentha spicata(Hierbabuena) mediante el uso
de la Ley de Lambert-Beer y el reactivo de Folin-Ciocalteau.
Marlon E. Bello1 & María F. Romero2
Resumen
La hierbabuena, puesto a su actividad antiséptica, tiene
la propiedad de evitar enfermedades de tipo respiratorias,
gracias a su actividad expectorante. Parte de estos
beneficios se debe a ciertas biomoléculas conocidas
como Polifenoles [4]. La actividad antioxidante de los
polifenoles permite la reducción de la producción de
radicales libres. El objetivo de la práctica fue cuantificar
la cantidad de polifenoles en dicha planta, por medio del
método de Folin-Ciocalteau, usando dos tipos de
vibración (Ultrasonido y Vórtex) [11]. Primero, se midió
la humedad encontrada en una muestra de hierbabuena.
Luego, se realizó dos mezclas de la planta con etanol
para llevarlos al ultrasonido y al vortex respectivamente,
teniendo en cuenta ausencia de luz. Finalmente, y con la
ayuda del espectrofotómetro, se midió la absorbancia de
las dos mezclas y a partir de la Ley de Lambet-Beer
determinar la concentración de polifenoles en dichas
mezclas.
Palabras Clave: Hierbabuena, Polifenoles, Folin-
Ciocalteau, Absorbancia, Ley de Lamber Beer.
Abstract
Peppermint, given its antiseptic activity, has the property
of avoiding respiratory diseases, thanks to its expectorant
activity. Part of these benefits is due to certain
biomolecules known as polyphenols. The antioxidant
activity of polyphenols allows the reduction of the
production of free radicals. The objective of the practice
was to quantify the amount of polyphenols in said plant,
by means of the Folin-Ciocalteau method, using two
types of vibration (Ultrasound and Vortex). First,
moisture found in a peppermint sample was measured.
Then, two mixes of the plant with ethanol were carried
out to take them to the ultrasound and to the vortex
respectively, taking into account the absence of light.
Finally, and with the help of the
1. Estudiante de Ingeniería Química
2. Estudiante de Ingeniería Química
spectrophotometer, the absorbance of the two mixtures
was measured and from the Lambet-Beer Law determine
the concentration of polyphenols in said mixtures.
Keywords: Peppermint, Polyphenols, Folin-Ciocalteu,
Absorbance, Law of Lambert Beer
Introducción.
El consumo de productos ricos en compuestos fenólicos
genera efectos positivos sobre la salud humana y
contribuye a la prevención de enfermedades coronarias
y de ciertos tipos de cáncer [6], [8]. La capacidad de los
polifenoles para modular la actividad de diferentes
enzimas, y para interferir consecuentemente en
mecanismos de señalización y en distintos procesos
celulares, puede deberse a las características
fisicoquímicas de estos compuestos, que les permiten
participar en distintas reacciones metabólicas de óxido-
reducción [2], [5].
Los métodos usados comúnmente para determinar y
cuantificar polifenoles totales en alimentos y vegetales
son el ensayo de la vainillina y el de Folin-Ciocalteu. El
método de Folin-Ciocalteu se basa en la capacidad de los
fenoles para reaccionar con agentes oxidantes. El ensayo
Folin-Ciocalteu se utiliza como medida del contenido en
compuestos fenólicos totales en productos vegetales [3],
[10]. El principio de este método se basa en que los
compuestos fenólicos reaccionan con el reactivo de
Folin-Ciocalteu (Figura 1.), a pH básico, dando lugar a
una coloración azul susceptible de ser determinada
espectrofotométricamente a 630 nm [1], [9]. Los ácidos
cafeico y gálico son compuestos polifenólicos con
propiedades antioxidantes presentes en algunas plantas.
Según la literatura el contenido de compuestos
polifenólicos totales expresada en equivalentes de ácido
gálico varía entre entre 1.2-3.0 g/L para la hierbabuena
[11]..
Sin embargo, el ácido gálico es muy usado en la de Lambert Beer, determinar el coeficiente de extinción
identificación de los polifenoles presentes en una mezcla molar, el cual nos servirá para cuantificar los polifenoles
de yerbabuena, ya ofrece una estimación muy cercana de presentes en la muestra.
la concentración de estos [7].
Cuantificación de Polifenoles
Se adiciona 20 µL de la solución del vórtex y del
ultrasonido a los pozos de la microplaca, la cual se hará
por duplicado y además se colocará una muestra
referencia con un blanco de etanol. Se adiciona 100 µL
del reactivo de Folin-Ciocalteau diluido en etanol en una
proporción 1:4, además de 75 µL de Na2CO3. Esta placa
se debe proteger de la oscuridad durante 15 minutos. Por
Figura 1. Reacción entre el reactivo de Folin-Ciocalteau y el último se medirá la absorbancia a 750 nm, que para este
ácido gálico. Tomado de https://bit.ly/2nwjCxQ caso, solo se podrá a 630 nm, pero que no afectará el
resultado notoriamente.
Materiales y Métodos
Resultados
Porcentaje de Humedad en Hierbabuena
Teniendo como objetivo cuantificar el porcentaje de Porcentaje de Humedad en Hierbabuena
humedad presente en una muestra de hierbabuena, se Por medio de la ecuación 1, se logró encontrar el
utiliza una estufa a 65°, en la cual durante 1 día porcentaje de humedad que presentaba cada muestra
aproximadamente, se dejará que se seque por completo 2 de hierbabuena. Los resultados se relacionan en la
muestras de 2g de la planta. Cuando se obtenga la siguiente tabla:
hierbabuena completamente libre de humedad, se
procede a pesar las muestras y así será posible calcular el Peso inicial Peso final Porcentaje de
Muestra
(g) (g) humedad (%)
% de humedad, con la siguiente ecuación:
1 2,0038 1,6859 18,9
𝑊𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 − 𝑊𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 2 2,0070 1,7053 17,7
%𝐻𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = 𝑥100% Tabla 1. Datos obtenidos para definir la humedad de la
𝑊𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙
Ecuación 1. Determinación de Humedad. Hierbabuena.

Curva de Calibración
Extracción de Polifenoles Se realizó la curva de calibración tomando diferentes
Para esta parte de la práctica se utilizaron concentraciones del ácido gálico utilizando las
aproximadamente 5g de hierbabuena previamente unidades 𝜇𝑔/𝑚𝐿. Se debe tener en cuenta que el
cortada, y se mezclan con 20 mL de etanol (C2H6O) en primer dato que se tomó no tenía concentración
un tubo falcon, el cual debe estar totalmente sellado (para alguna del ácido gálico, por ende, éste se tomó como
evitar que cualquier intensidad lumínica afecte la “Blanco”. Los resultados se relacionan en la
medición de la absorbancia). Como siguiente paso y con siguiente tabla:
la ayuda del vórtex, la solución se agita 5 veces, cada
agitación dura 1 minuto y se deja reposar durante 4 Datos curva
minutos. Por último, se filtra la solución en un matraz Concentración Absorbancia
Promedio
aforado, y se lleva a un volumen de 25 mL agregando (ug/mL) 1 2
más etanol. Este procedimiento se repite, solo que ahora 0 0,064 0,041 0,053
la agitación se hará en ultrasonido durante 4 veces, en 5 0,054 0,046 0,050
intervalos de 10 segundos.
10 0,053 0,101 0,077
20 0,084 0,124 0,104
Curva de Calibración
En tubos eppendorf 100 µL se preparan los estándares de 40 0,111 0,106 0,109
ácido gálico correspondientes (5, 10, 20, 40, 80 y 160 80 0,251 0,257 0,254
µg/mL) usando como solvente etanol. Posteriormente se 160 0,404 0,490 0,447
realiza la gráfica Absorbancia VS Concentración y así Tabla 2. Datos obtenidos sobre la absorbancia presente a
determinar la ecuación de la recta determinadas concentraciones de Ácido Gálico.

𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏 Posterior a esto se realizó una gráfica para poder

Después de haber obtenido dicha ecuación, y teniendo observar la tendencia de los datos. En esta parte del
como valor de “y” la absorbancia medida, se puede informe se realizó una operación matemática en el
cuantificar el ácido gálico encontrado, y usando la Ley cual se rechazarán datos que no permitan obtener una
 tendencia lineal bien definida. Este criterio se obtuvo uno. Los resultados se relacionan en la siguiente
al realizar un intervalo de confianza en el programa tabla:
de ayuda Excel, en donde se agregaron los datos y
Muestra Vórtex Ultrasonido
una razón del 30% de confianza.
N°1 0,592 0,193
0,500 N°2 0,739 0,201
0,450 Tabla 3. Absorbancia de las muestras problema de
0,400 Hierbabuena.
0,350
Absorbancia

Con los datos recopilados durante toda la práctica y

0,300 mediante el uso de la ecuación 2, se procede a encontrar
0,250 la concentración de las muestras problema en unidades
0,200 de 𝜇𝑔/𝑚𝐿 . Se debe realizar una operación
0,150 matemática despejando la variable “X” de la ecuación
0,100 que equivaldría a la concentración, y así mismo la
0,050 variable “Y” sería la absorbancia de la muestra.
0,000
0 50 100 150 200 𝑌 − 0,0536
Concentración (ug/mL) 𝑋=
0,0025

Gráfica 1. Absorción VS Concentración (Datos sin Los resultados se relacionan a continuación:

rechazar)

Se puede observar que los datos número 2 y 5 de la Muestra Vórtex Ultrasonido

tabla, donde sus concentraciones son 5 y 40 𝜇𝑔/𝑚𝐿 , Concentración N°1
respectivamente, no dejan obtener una tendencia 215,36 55,76
(𝝁𝒈/𝒎𝑳)
lineal correcta, por esta razón se rechazan estos dato.
El resultado se presenta en la siguiente gráfica. Concentración N°2
274,16 58,96
(𝝁𝒈/𝒎𝑳)
Tabla 4. Concentración obtenida de las muestras problema de
0,500 Hierbabuena.
0,450
Para poder encontrar los gramos usamos las
0,400
concentraciones que obtuvimos anteriormente. Se
0,350 debe multiplicar dicha concentración por 25 mL,
Absorbancia

0,300 volumen resultante para las muestras problemas al

0,250 adicionar todos los reactivos. Posteriormente se
0,200 utilizó un factor de conversión con el fin de obtener
las unidades de gramos. (1𝑥106 )
0,150
0,100
Muestra Vórtex Ultrasonido
0,050
0,000 Polifenoles N°1 (g) 5,384𝑥10−3 1,394𝑥10−3
0 50 100 150 200
Polifenoles N°2 (g) 6,854𝑥10−3 1,474𝑥10−3
Concentración (ug/mL)
Tabla 5. M de polifenoles en 25 mL de solución problema.
Gráfica 2. Absorción VS Concentración (Datos
rechazados) Ahora se procede a encontrar el coeficiente de extinción
molar presente en la curva patrón, para esto se debe
Teniendo en cuenta solamente esta gráfica se procedió tener en cuenta la expresión de la Ley de Lambert-Beer:
a hallar la ecuación dando como resultado:
𝐴=𝜀∗𝐶∗𝑙
𝑌 = 0,0025𝑋 + 0,0536 Donde se tiene que:
Ecuación 2. Ecuación de la recta de la curva de Calibración. A= Absorbancia
𝜀 =Coeficiente de extinción Molar
Cuantificación de los polifenoles C= Concentración del cromóforo
Después de realizar el procedimiento de extracción
L=Longitud del paso óptico que contiene la muestra
de polifenoles mediante los métodos; Vórtex y Ecuación 3. Expresión de la Ley de Lambert-Beer
Ultrasonido. Continuando con la práctica, se
procede a la medición de la absorbancia de cada
muestra; se realiza de forma duplicada para cada
Se realiza un despeje en la ecuación 3, para poder el fin de poder comparar el rendimiento de cada proceso
encontrar el dato deseado. Se toma como longitud del al obtener los resultados de concentración.
paso óptico una distancia de 3 cm. El método de Vórtex tiene como base el mezclar una
disolución de acuerdo un impulso periódico generado
𝑚𝐿 por un motor y en el cuál se puede controlar la velocidad
0,0025 𝑚𝐿
𝜇𝑔 deseada y el tiempo que se requiera [15]. Por otro lado,
𝜀= = 0,00083
3 𝑐𝑚 𝑐𝑚 ∗ 𝜇𝑔 la técnica con ultrasonido está basada en la propagación
de ondas mecánicas conformada por un conjunto de
Se realiza un factor de conversión para lograr obtener ciclos, definidos como la combinación de altas y bajas
las unidades de 𝑀 −1 𝑐𝑚 −1 , unidades respectivamente presiones, denominadas compresiones y rarefacciones,
del coeficiente de fracción molar. respectivamente [16].
Los resultados que se obtuvieron en la práctica permiten
𝑚𝐿 1𝑥106 𝜇𝑔 170,12 𝑔 1𝐿
𝜀 = 0,00083 ∗ ∗ ∗ observar que la concentración de las muestras
𝑐𝑚 ∗ 𝜇𝑔 1𝑔 1 𝑚𝑜𝑙 1000 𝑚𝐿 utilizando el método de vórtex es muchísimo mayor a
𝐿
𝜀 = 141,20 = 141,20 𝑀−1 𝑐𝑚−1 las muestras con el ultrasonido. Esta diferencia se le
𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚
atribuye a que el método de ultrasonido utiliza energía
que se le adiciona a la muestra para que se logre crear
Discusión de Resultados
un vacío en la superficie y así, las moléculas no logran
absorber toda esta energía y se rompen. Cuando sucede
Porcentaje de Humedad en Hierbabuena
esto, la estructura de las moléculas se ve muy afectada
El porcentaje que se encontró en la literatura referente a
ya que está aumentando la velocidad de interacción
la humedad que posee la hierbabuena es menor al 13%
junto a la temperatura, generando que al romperse y re-
[12]. Este dato fue obtenido utilizando diferentes
acomodarse, no puedan generar los mismos enlaces que
métodos de secado y cuya temperatura variaba, como lo
tenían. Esto disminuye notablemente la concentración
es el secado solar cubierto con nylon, con polietileno
de polifenoles ya que, al entrar en contacto con tanta
transparente ó secado a galón [13]. La hierbabuena
energía, no logran poder reconstruirse al final de la
tiene su producción en ligeras ricas en materia orgánica,
dilución, perdiendo su estructura y su función [17]. Por
y no presenta una exigencia con la humedad de la zona
otro lado, en el método vórtex, al estar en constante
[14].
agitamiento, se logran romper los enlaces que tienen las
El porcentaje de humedad obtenido en la presente
moléculas dentro de la solución, pero esto no altera su
práctica es de aproximadamente 18,3%, realizando un
forma estructural interna.
promedio entre los datos obtenidos. Se puede observar
que el dato está cercano al expresado en la literatura, sin
Según lo encontrado en la literatura, los datos varían
embargo, no alcanza a entrar en el rango en el que se
en cuanto al tipo de hierbabuena utilizada. En cinco
expresa. Esta variación se le atribuye a diversos factores
Mentha spicata se evidenció que por cada 2g de
que lograron presentarse durante la toma del porcentaje,
muestra seca, la concentración de polifenoles varía
principalmente a posibles errores en la toma de datos al
entre 7,5 y 44,66 𝝁𝒈/𝒎𝑳, tomando un volumen de 5
pesar las muestras, ya sea por error humano o así
mL y su absorbancia a 760 nm [18,19]. Utilizando un
mismo, por la humedad presente en el medio que
debido factor de conversión las concentraciones a un
interfirió al pesar los crisoles. Adicional a esto, se pudo
volumen de 25 mL equivaldrían a 93,75 y 558,25
determinar que otro posible desliz se dio al escoger las
𝝁𝒈/𝒎𝑳, respectivamente. Esto nos deja ver que las
hojas de la hierbabuena, ya que, aunque algunas hojas
concentraciones obtenidas en la práctica,
se mostraban de un color más oscuro que otras, no se
específicamente las muestras con el método vórtex,
logró obtener el peso necesario para el secado y se llegó
si se encuentran en el rango que ofrece la literatura,
a utilizar hojas de un color más claro. Esto se explica ya
dejando comprender que este método comparado con
que las hojas que posee un color más oscuro y un olor
el ultrasonido es mucho más eficiente.
más penetrante, son las que están con mayor
constitución proteica y de nutrientes.
Ley de Lambert-Beer
Cabe destacar, que el resultado obtenido, aunque no se
En la práctica se realizaron operaciones matemáticas
logró consolidar en el rango deseado, si estuvo en gran
para poder despejar el coeficiente de extinción molar de
proporción cercano a él, lo que deduce que el secado en
la ecuación 3, que relacionaba directamente las
horno realizado en esta práctica, si puede llegar a entrar
variables de absorbancia (A), la concentración del
al rango, pero se debe tener un mayor cuidado en el
cromóforo (C), longitud del paso óptico (l) y el
manejo de las muestras.
coeficiente de extinción (𝜀) respectivamente. Al
despejar 𝜀 de la ecuación nos damos cuenta que la
Cuantificación de Polifenoles
absorbancia es directamente proporcional y que la
La cuantificación realizada en la presente práctica se
concentración junto con la longitud es inversamente.
llevó a cabo utilizando dos métodos de preparación de
Esto nos deja ver que para poder encontrar el
las muestras problema; Vórtex y Ultrasonido. Esto con
coeficiente solo se debe dividir la pendiente que
hallamos en la ecuación 2 entre la longitud del paso
óptico. Se toma la pendiente ya que ésta relaciona 11. Universidad Politécnica de Valencia (2010).
directamente la absorbancia con la concentración del Determinación de Polifenoles totales por medio del
cromóforo gracias a la curva patrón que realizamos en método de Folin-Ciocalteau. Tomado de
primer lugar. https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/52056/
Teniendo en cuenta que la absorbancia de las muestras Garcia%20Mart%EDnez%20et%20al.pdf?sequenc
fue obtenida a 750nm, no se logró hallar el coeficiente e=1.
a esta absorbancia. Sin embargo, se podría comparar 12. Sanchez, E., Leal, I. M., Pino, J., & Carballo, C.
con los coeficientes encontrados a 225 nm, ε = 26500 (1998). ESTANDARIZACIÓN DE Mentha spicata
(M-1 cm-1) y el otro a 260 nm con ε = 21200 (M-1 cm- L MEDICAMENTO HERBARIO CON
1) [20]. A razón de esto, se logra afirmar que el ACTIVIDAD ESPASMODICA. Revista cubana
coeficiente de extinción molar encontrado en la práctica Plant Med, 3(1), 26-30. Tomado de
es, posiblemente, el verdadero a una absorbancia a
http://bvs.sld.cu/revistas/pla/vol3_1_98/pla06198.p
750nm, ya que si se compara con la literatura y se
df
entiende que a mayor longitud de onda el coeficiente de
13. Banchero, L., Carballo, S., & Telesca, J. (2009).
extinción disminuye, nuestro dato entra en el rango
MANUAL DE SECADO SOLAR DE ESPECIES
deseado.
MEDICINALES Y AROMÁTICAS PARA
PREDIOS FAMILIARES. Tomado de:
Bibliografía
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Romero en la Dieta del Cordero. Tomado de
http://taninos.tripod.com/acidogalico.htm?pagewan
https://bit.ly/2B67LjM
ted=all
Anexos 𝑨 = 𝟐 − 𝐥𝐨𝐠 %𝑻
𝐴 = 2 − log 82
Cuestionario 𝐴 ≅ 𝟎, 𝟎𝟖𝟔𝟐

1. La absortividad molar de cierto soluto es de 2.1 x Pero

104. Calcular la transmitancia para una solución 2.00 𝑻 = 𝟏𝟎−𝑨 𝑨=𝛆∗𝑪∗𝑰
x 106 M utilizando una cubeta de 5.00 cm.
Y reemplazando en la ecuación de transmitancia
𝐿𝑒𝑦 𝑑𝑒 𝐿𝑎𝑚𝑏𝑒𝑟𝑡 − 𝐵𝑒𝑒𝑟 𝑻 = 𝟏𝟎−𝜺𝑪𝑰
𝑇 = 10−0,0862
𝑨= 𝛆∗𝑪∗𝑰
𝑇 = (0,82)(100%) = 𝟖𝟐%
A= (2.1 x 104/cmM) (5 cm) (2 x 10-6 M)
A= 0.21 Con la concentración modificada se afectaría el valor
de la transmitancia calculado
𝟏 𝟏
𝑻= 𝑨 = 𝒍𝒐𝒈 𝑇 = 10−4(0,0862)
𝟏𝟎𝑨 𝑻
𝑇 = (0,452)(100%)
1 𝑇 = 𝟒𝟓, 𝟐%
𝑇=
100.21
𝑇 = 0.616 ≅ 𝟎. 𝟔𝟐
Así queda en evidencia el cumplimiento de la ley de
Lambert-Beer.
2. Se sabe que una sustancia tiene una absortividad Con 2C el valor de la transmitancia será
molar de 14000 a su longitud de onda de máxima
𝑇 = 10−2(0,0862)
absorción. Calcular que molaridad de esta sustancia
𝑇 = (0,6723)(100%)
podrá medirse en un espectrofotómetro, si se desea
𝑇 = 𝟔𝟕, 𝟐𝟑%
que la lectura de la absorbancia sea de 0.850, en una
cubeta de 1.00 cm.
5. Cuando se analiza una muestra que contiene hierro
𝑨
𝑨=𝛆∗𝑪∗𝑰 𝑪= (II) por el método del 𝛼 − 𝛼´ bipiridilo se obtiene
𝜺𝑰
0.850 una transmitancia de 57,5% contra un blanco de
𝐶= reactivos, en una cubeta de 1,00 cm. Si la
(14000)
(1.00 𝑐𝑚) absortividad molar del 𝛼 − 𝛼´ bipiridilo ferroso es
𝑀𝑐𝑚
de 8,650. ¿Cuál será la concentración del hierro en
𝐶 = 𝟔. 𝟎𝟕 𝒙 𝟏𝟎−𝟓 𝑴 la muestra, en moles/litro?

𝑨 = 𝟐 − 𝐥𝐨𝐠 %𝑻
𝐴 = 2 − log(57,5)
3. El porcentaje de transmitancia de una solución
𝐴 = 𝟎, 𝟐𝟒𝟎𝟑
acuosa de fumarato de sodio a 250 nm y 25°C, es de
𝑨
19,2 % para una solución 5 x 10-4 M en una celda de 𝑪=
𝜺𝑰
1.00 cm. Calcular la absorbancia y la absortividad 0,2403
molar correspondiente. 𝐶=
8,650
( ) (1𝑐𝑚)
𝑀𝑐𝑚
𝑨 = 𝟐 − 𝒍𝒐𝒈%𝑻 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 1𝑚3
𝐶 ≅ 0,028 3 ( )
𝑚 1000𝐿
𝐴 = 2 − 𝑙𝑜𝑔19.2
−𝟓 𝒎𝒐𝒍𝒆𝒔
𝐴 = 𝟎. 𝟕𝟏𝟔 𝐶 = 𝟐, 𝟖 × 𝟏𝟎
𝑳
𝑨
𝑨 =𝛆∗𝑪∗𝑰 𝜺=
𝑪𝑰 6. Utilizando una cubeta de absorción de 1,00 cm, se
determinó la transmitancia de la luz de 436 nm (436
0.76 A) para una solución de bromo en tetracloruro de
𝜀=
(5 𝑥 10−4 𝑀)(1.00 𝑐𝑚) carbono, encontrándose los siguientes resultados:
𝟏𝟒𝟑𝟐
𝜀= 5,46 × 3,5 ×10- 2,1 ×10- 0,64 ×1
𝑴𝒄𝒎 C (M) 1,25 ×10-3
10-3 3 3
0-3
4. Una solución de concentración C de una sustancia
%T 1,0 3,0 16,0 34,3 57,0
coloreada tiene un %T de 82,0. Si la concentración
de cuadriplica en %T es de 45,0. Demostrar que la Absorbancia 2 1,52 0,796 0,465 0,244
solución obedece la ley de Lambert-Beer y calcular
el %T para una concentración 2C. Calcular la absortividad molar (𝜀)
2 𝟑𝟔𝟔,𝟑
a) 𝜀 = (5,46×10−3 M)(1𝑐𝑚) ≅ 𝑴𝒄𝒎
Se sabe que:
 1,52 𝟒𝟑𝟒,𝟑 poder interpolar la curva estándar de manganeso a
b) 𝜀 = (3,5×10−3 M)(1𝑐𝑚) ≅ 𝑴𝒄𝒎 535 nm de la última solución, se tomó una alícuota
0,796 𝟏𝟕𝟗,𝟎𝟒
c) 𝜀 = (2,1×10−3 M)(1𝑐𝑚)
≅ y se diluyó en una solución 1:2. La transmitancia de
𝑴𝒄𝒎
0,465 𝟑𝟕𝟐 la solución medida en un espesor de 1 cm es de 40%.
d) 𝜀 = (1,25×10−3 M)(1𝑐𝑚)
≅ Si la absortividad molar es de 2300 L/mol,
𝑴𝒄𝒎
0,244 𝟑𝟖𝟏,𝟐𝟓 determine:
e) 𝜀 = ≅
(0,64×10−3 M)(1𝑐𝑚) 𝑴𝒄𝒎 a) % de Mn en la muestra
b) mg/K de Mn en la muestra
7. Se sabe que las sales de VO+2 tienen una
absortividad molar 12,000 a su longitud de onda de 𝑨
máxima absorción. Si se utiliza celda de 10,00 cm, 𝑪=
𝜺𝑰
calcular cuántos mg/mL de VP+2 deberán estar
presentes para producir una absorbancia de 0,573. 2 − 𝑙𝑜𝑔40
(PM Vo+2 = 91,942 𝐶=
2300
(1𝑐𝑚)
𝑀𝑐𝑚
𝑨
𝑪=
𝜺𝑰 𝟐
0,573 𝐶 = 𝟏, 𝟕𝟑 𝑿 𝟏𝟎−𝟒 𝑴 ( )
𝟏
𝐶=
12
( ) (10𝑐𝑚)
𝑀𝑐𝑚 𝑚𝑜𝑙
𝐶 = 3,46 𝑋 10−4 ∗ (0.05𝐿)
𝐿
10−3 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 91,42𝑔 1000𝑚𝑔
𝐶 ≅ (4,775 × )×( )×( ) 𝟏.𝟕𝟑 𝒙 𝟏𝟎−𝟓 𝒎𝒐𝒍
𝑚3 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝐶=
0,005 𝐿
1𝑚3
×( )
1000000𝑚𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝒎𝒈 𝐶 = 3.46 𝑥 10−3 ∗ (0.25𝐿)
= 𝟒, 𝟒 × 𝟏𝟎−𝟒 𝐿
𝒎𝑳
55 𝑔
8. La absortividad molar (𝜀) del ácido benzoico en 𝒎𝒐𝒍 = 8,65 𝑥 10−4 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑀𝑛( )
1 𝑚𝑜𝑙 𝑀𝑛
metanol es aproximadamente es 1970 a 275nm.
𝑚𝑜𝑙 = 0,0475 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑀𝑛
¿Cuál será la máxima concentración de ácido
0.0475
benzoico, en g/mL que puede usarse en una celda de 𝑚𝑜𝑙 = ∗ 100% = 𝟒. 𝟕𝟓%
1,00 c, para que la absorbancia no exceda de 0,013? 1
𝑨
𝑪= 1000𝑚𝑔 1
𝜺𝑰 𝑚𝑜𝑙 = 0.0475 𝑔 ( )∗( )
0,0013 1𝑔 1000 𝑘𝑔
𝐶= = 𝟒𝟕𝟓𝟎𝟎 𝒎𝒈/𝑲𝒈
1950
( ) (1𝑐𝑚)
𝑀𝑐𝑚
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 122,12𝑔 1𝑚3
𝐶 ≅ (6,7 × 10−6 ) ( ) ( )
𝑚3 1𝑚𝑜𝑙 1 × 106 𝑚𝐿
𝒈
= 𝟖, 𝟏𝟒 × 𝟏𝟎−𝟑
𝒎𝑳

9. Una solución de permanganato de potasio de

concentración C tiene una transmitancia de 60,0%
en una celda de 1,00 cm., a una determinada
longitud de onda. Si se dobla la concentración,
calcular. El %T

𝑨 = 𝟐 − 𝐥𝐨𝐠 %𝑻
𝐴 = 2 − log(60) ≅ 0,22
𝑻 = 𝟏𝟎−𝜺𝑪𝑰
𝑇 = 10−2(0,22) ≅ 0,36 × (100%) = 𝟑𝟔%

10. Una muestra de 1,000 g que contiene manganeso se

determinó por espectrofotometría, se preparó un
extracto de 250 mL de la solución de concentración
desconocida, se tomó una alícuota de 5 mL y se
diluyó en un balón aforado de 50 mL. Luego, para