UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

BIOQUÍMICA CLÍNICA

LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA

PRÁCTICA Nº01 Diagnóstico directo de Leishmania spp.

Integrantes: Pillajo Alison Fecha de la práctica

Pulgar Alexandra
Quiguri Estefania 05 de octubre del 2018

Fecha de entrega

12 de octubre del 2018

1. Objetivos:
 Reconocer al microscopio protozoos tisulares del género Leishmania spp.
 Familiarizarse con las pruebas diagnósticas de laboratorio para la investigación de
Leishmania spp.

2. Fundamento y método de la práctica:

Leishamaniasis: se refiere a un grupo ele enfermedades causadas por protozoos del género
Leishmania. Los parásitos del género Leishmania son pequeños, de 2µ a 5µ (amastigotes),
localizados dentro de los macrófagos de los huéspedes vertebrados. En los vectores se
presentan en forma alargada y con flagelo (promastigote). Esta es la forma que inocula al
vertebrado. Los promastigotes miden entre 10µ y 15µ de longitud.
Los parásitos del género Leishmania se agrupan en complejos que causan diferentes formas
clínicas, pero morfológicamente son iguales. El complejo L. donovani tiene tropismo por las
vísceras; L. tropica de localización únicamente en piel, en personas del Viejo Mundo; L.
mexicana que compromete piel en pacientes del Nuevo Mundo y L. braziliensis que afecta
piel y mucosas en el Nuevo Mundo.
El parásito es transmitido por insectos flebótomos pequeños que pican en las horas
vespertinas de zonas silvestres. Estos vectores viven en grietas o fisuras de árboles y cuevas
de animales.
La confirmación diagnóstica se hace principalmente por el hallazgo de los amastigotes en el
frotis directo coloreado y tomado del borde de la lesión. También se encuentran los parásitos
en biopsia, cultivos, y por PCR. La intradermorreacción de Montenegro detecta
hipersensibilidad tardía e indica contacto previo con el parásito. En algunos casos las pruebas
serológicas con tribuyen al diagnóstico y seguimiento, aunque son de baja sensibilidad y
especificidad.
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3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Realizar el ajuste interocular y de iluminación del microscopio antes de observar
las placas preparadas.
 Manipular con cuidado las placas preparadas, evitar romperlas con los lentes
objetivos del microscopio o durante el proceso de limpieza del aceite de
inmersión.
 Organizar grupos de trabajo

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS
- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Aceite de inmersión
- Computadora - Placas de frotis sanguíneo,
lesiones y cultivos de
Leishmania spp.
3.3. Procedimiento
a) Realizar el enfoque interpupilar y el ajuste de iluminación.
b) Colocar la placa preparada sobre la platina del microscopio.
c) Recorrer la placa portaobjeto en una sola dirección de arriba hacia abajo y de
derecha a izquierda.
d) Dibujar los campos observados al microscopio con el lente de 100x.
e) Rotular los elementos encontrados en dichos campos microscópicos

4. Resultados:
 Dibujar y rotular los elementos visualizados en la observación microscópica.
Indicar el tipo de muestra analizada. Dibujar 2 campos ópticos donde se observe
las formas de amastigotes en los tejidos y los promastigotes provenientes de un
cultivo.
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 Realizar un mapa conceptual de los tipos de muestras y una descripción breve del
proceso de toma de muestras para obtención del material para investigación de
Leishmania. (considerar la Guía del CDC para la toma de muestras)
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5. Discusión de Resultados
 Describir las principales características de los parásitos de Leishmania spp.
observados al microscopio. Indicar las diferencias entre las diferentes muestras
clínicas en donde se identifican los microorganismos.

6. Conclusiones:

 Se logró conocer toda la información acerca del protozoo Leishmania spp tales
como ciclo de vida, patología, manifestaciones clínicas, tratamiento, así como
todas sus características y su influencia en el ser humano y en el medio ambiente.
Además, se logró observar en el microscopio óptico, identificar y diferenciar los
distintos estados morfológicos de Leishmania spp.

 Finalmente se reforzó la información adquirida en clase acerca de las pruebas

diagnósticas de laboratorio para la investigación de Leishmania spp, así como la
adecuada forma para la toma de muestras de los pacientes paras las diversas
pruebas diagnósticas.

7. Cuestionario:

 Dibujar todos los estadios morfológicos de Leishmania spp. y rotular las estructuras.
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 Completar la siguiente tabla:

ETAPA
MORFÓLOGIA
TÉCNICA DE PARASITARIA MUESTRAS
VENTAJAS DESVENTAJAS
DIAGNÒSTICO IDENTIFICADA Y EMPLEADAS
DONDE. Incluir un
gráfico

Observación
microscópica directa
en frotis

Observación
microscópica directa
en biopsia

Aislamiento en
cultivo in vitro
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Detección molecular
del ADN del parásito

Pruebas serológicas

Intradermorreacción
de Montenegro

8. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición. 2012
 Ballcells. La clínica y el Laboratorio. 22va edición.
 MURRAY, P.R et al. MICROBIOLOGÍA MÉDICA, Elsevier; 7ma Ed., España
2014
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9. Anexos: