FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO PLAN CURRICULAR

FORMATO DE GUÍA DE LABORATORIO
Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01; Fecha: 15 de enero de 2017

PRÁCTICA Nº01 Diagnóstico directo de Leishmania spp.

1. Objetivos:
 Reconocer al microscopio protozoos tisulares del género Leishmania spp.
 Familiarizarse con las pruebas diagnósticas de laboratorio para la investigación
de Leishmania spp.

2. Fundamento y método de la práctica:

Leishamaniasis: se refiere a un grupo ele enfermedades causadas por protozoos del
género Leishmania. Los parásitos del género Leishmania son pequeños, de 2µ a 5µ
(amastigotes), localizados dentro de los macrófagos de los huéspedes vertebrados. En los
vectores se presentan en forma alargada y con flagelo (promastigote). Esta es la forma
que inocula al vertebrado. Los promastigotes miden entre 10µ y 15µ de longitud.
Los parásitos del género Leishmania se agrupan en complejos que causan diferentes
formas clínicas, pero morfológicamente son iguales. El complejo L. donovani tiene
tropismo por las vísceras; L. tropica de localización únicamente en piel, en personas del
Viejo Mundo; L. mexicana que compromete piel en pacientes del Nuevo Mundo y L.
braziliensis que afecta piel y mucosas en el Nuevo Mundo.
El parásito es transmitido por insectos flebótomos pequeños que pican en las horas
vespertinas de zonas silvestres. Estos vectores viven en grietas o fisuras de árboles y
cuevas de animales.
La confirmación diagnóstica se hace principalmente por el hallazgo de los amastigotes en
el frotis directo coloreado y tomado del borde de la lesión. También se encuentran los
parásitos en biopsia, cultivos, y por PCR. La intradermorreacción de Montenegro detecta
hipersensibilidad tardía e indica contacto previo con el parásito. En algunos casos las
pruebas serológicas con tribuyen al diagnóstico y seguimiento, aunque son de baja
sensibilidad y especificidad.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Realizar el ajuste interocular y de iluminación del microscopio antes de
observar las placas preparadas.
 Manipular con cuidado las placas preparadas, evitar romperlas con los lentes
objetivos del microscopio o durante el proceso de limpieza del aceite de
inmersión.
 Organizar grupos de trabajo

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS

- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Aceite de inmersión
- Computadora - Placas de frotis sanguíneo,
lesiones y cultivos de
Leishmania spp.
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Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01; Fecha: 15 de enero de 2017
3.3. Procedimiento
a) Realizar el enfoque interpupilar y el ajuste de iluminación.
b) Colocar la placa preparada sobre la platina del microscopio.
c) Recorrer la placa portaobjeto en una sola dirección de arriba hacia abajo y de
derecha a izquierda.
d) Dibujar los campos observados al microscopio con el lente de 100x.
e) Rotular los elementos encontrados en dichos campos microscópicos

4. Resultados:
 Dibujar y rotular los elementos visualizados en la observación microscópica.
Indicar el tipo de muestra analizada. Dibujar 2 campos ópticos donde se
observe las formas de amastigotes en los tejidos y los promastigotes
provenientes de un cultivo.
 Realizar un mapa conceptual de los tipos de muestras y una descripción breve
del proceso de toma de muestras para obtención del material para
investigación de Leishmania. (considerar la Guía del CDC para la toma de
muestras)

5. Discusión de Resultados
 Describir las principales características de los parásitos de Leishmania spp.
observados al microscopio. Indicar las diferencias entre las diferentes
muestras clínicas en donde se identifican los microorganismos.

6. Conclusiones:
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

7. Cuestionario:
 Dibujar todos los estadios morfológicos de Leishmania spp. y rotular las
estructuras.

 Completar la siguiente tabla:

TÉCNICA DE ETAPA MUESTRAS VENTAJA DESVENTAJA

DIAGNÒSTICO MORFÓLOGI EMPLEADA S S
A S
PARASITARI
A
IDENTIFICAD
A Y DONDE.
Incluir un
gráfico
Observación
microscópica
directa en frotis
Observación
microscópica
directa en biopsia
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Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01; Fecha: 15 de enero de 2017
Aislamiento en
cultivo in vitro
Detección
molecular del ADN
del parásito
Pruebas serológicas
Intradermorreacci
ón de Montenegro

8. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición. 2012
 Ballcells. La clínica y el Laboratorio. 22va edición.
 MURRAY, P.R et al. MICROBIOLOGÍA MÉDICA, Elsevier; 7ma Ed., España 2014

9. Anexos: