Análisis de Sangre

agentes hemolíticos
1. 2.
Levi Patterson 1-745-849 Tifanny Navarro 4-781-2352
3.
Gabriela Rodríguez 4-799-2349
Bioquímica (Qm.235), Escuela De Tecnología Médica, Facultad De Ciencias
Naturales Y Exactas, Universidad Autónoma De Chiriquí. David, Chiriquí,
Republica De Panamá.
Email: 1. levipatterson28@gmail.com 2 .tifannydalet@gmail.com
3.
gabyroqui1998@gmail.com

Resumen:
Este laboratorio tuvo como objetivo principal el estudio del comportamiento de los
cambios en la presión osmótica del medio circundante que se dan en los glóbulos rojos.
Para ello, se extrajo cierta cantidad de muestra sanguínea y se procedió a realizar la
primera prueba la cual consistía en observar los efectos que tiene la variación de la
presión osmótica esto se realizó agregando 2 gotas de sangre en 4 donde en el tubo el
#1 y el #2 se dio la hemolisis por turgencia el #3 en este los eritrocitos se encontraban
en un medio isotónico y en el #4 se observó la deshidratación del eritrocito por
encontrarse en un medio hipertónico. Para la segunda prueba diluimos la muestra en
diferentes solucione s y agregamos 2 gotas de (jabón diluido , cloroformo, y alcohol95%)
en donde se observó la hemolisis del eritrocito en la solución que contenía jabón y la
hemolisis parcial en el que se le añadió cloroformo, mientras que en el alcohol luego
de la hemolisis se precipitó al fondo del tubo, determinándose que la hemolisis de los
eritrocitos puede ser provocada por varios agentes en un medio isotónico y que la
variación de la presión osmótica del medio puede provocar daños en la célula hemática
“eritrocito”.

Palabras claves: hemolisis, análisis, osmosis, isotónico, eritrocito, agentes

químicos.
Objetivos:
 Estudiar los efectos de los cambios en
la presión osmótica del medio
circundante sobre los glóbulos rojos.
 Estudiar diversos medios químicos que
producen hemolisis de los eritrocitos.
 Reconocer la importancia de los
efectos osmóticos en la administración
de soluciones por vía intravenosa.
Marco teórico:
El eritrocito humano es una célula en forma de
disco bicóncavo que no posee núcleo. la
principal función es transporte de oxígeno y
CO2.
este se comporta como un osmómetro, ya que
se hincha o se contrae con un descenso o
aumento de la presión osmótica del fluido
circundante. En una solución suficiente
hipotónica, el lóbulo rojo se hincha, se rompe
la membrana celular y ocurre el fenómeno
conocido como hemolisis. La hemolisis puede
ser provocada en un medio isotónico por
varios agentes, tales como jabones,
detergentes y cloroformo. virtualmente todos Fórmula cponcentracio
los constituyentes en el eritrocito están en semidesarroll nes
ada: CH3-CH2-
solución y después de ocurrir la hemolisis se OH
difunden al medio, dejando un residuo Punto de
insoluble o fortasma que representa la inflamabilidad
membrana original. La hemolisis excesiva es : 286 K (13 ℃)
Temperatura
causa de una serie de trastornos. (Martínez.
crítica: 514 K
Y. 2019). (241 ℃)
Materiales y Reactivos
Sapo --- son glucósidos ---
Descripcion Capacidad Cantidad nina de esteroides o
de triterpenoide
s,
Tubos de - 4
ensayo
jeringa 5ml 1

Nom For Prop. físicas Toxicidad

bre mul y quimicas
a
Cloru Na Masa No se
ro de CL molar: 58.44 g/ considera
sodio mol peligroso
Denominación
de la
IUPAC: Sodiu
m chloride
Punto de
fusión: 801 °C
Producto de
solubilidad: 3
7,79 mol²

Cloro CH Densidad: 1.4 altamente irrita

form Cl3 9 g/cm³ nte en estado
o Punto de líquido, produce
ebullición: 61. efectos
2 °C irritantes
Masa en nariz, garga
molar: 119.38 nta, ojos y piel.1
g/mol 6
No obstante,
Otros no se han
nombres: Clor descrito efectos
oformo, irritantes en
tricloruro de estado
metilo gaseoso.
Solubilidad en
agua: 0,8
g/100 ml
293,15 K (20
°C)

Jabo --- ---- ----

n
etano C2H Densidad: 789 Puede resulta
l 5OH kg/m³ peligroso en
Punto de altas
ebullición: 78.
37 °C
 Resultados
Metodología. Cuadro #1 Hemolisis Por Efecto Osmótico
A. Hemolisis por efecto osmótico.
Tu ml ml Co Observaciones
bo de de nc.
Añadir 2 gotas N° ag Na Fin
A 10 ml de nacl al
de sangre. ua Cl al
0.9, colocar en
Conservar uno 2%
cada uno de los
de los tubos
tubos de ensayo 1 10 0 0
como control.

A los otros cuatro, 2 de cloroformo

añadirle y 2 de alcohol. 2 7.5 2.5 0.5
respectivamente, 2 Agitar
hotas de una rapidamente y
solucion saturada dejar la solucion
de jabon. en reposo
3 5.5 4.5 0.9

Observar los
tubos y
comparelos cpn
el control 4 3.5 6.5 1.3
Ilustración 1 Hemolisis Por
Efecto Osmótico
B. Hemolisis por agentes químicos.

En 4 tubos de ensayos preparar: ml de

agua, nacl 2%,

Agitar bien y a cada uno agregar 2 gotas

de globulos rojos.

Agitar de nuevo y dejar sedimentar la

muestra por unos minutos . observar
Cálculos
luego y Resultados.
el grado de hemolisis de acuerdo
ala intensidad del color rojo del liquido.

Ilustración 2 Fragilidad De La Membrana Efectos Osmótico

 Este proceso está definido por la tonicidad del
medio en el que se encuentran los eritrocitos.
Cuadro #2 Hemolisis Por Agentes Químicos Por ejemplo, en una solución hipotónica con
respecto al eritrocito, éste pasa por un estado
Muestra de sangre Químicos de turgencia (se hincha por el exceso de
Observaciones líquido) y luego esta célula estalla debido a la
presión” según (Miranda D. 2017). Como
Tubo control podemos apreciar en el cuadro #1 de los
En solución resultados iniciamos poniendo a prueba la
isotónica fragilidad de la membrana ante trastornos
Célula
osmóticos donde se sometió la célula
completamente
normal hemática o eritrocitica a diversos cambios en
Cloroformo su medio observando así su fragilidad. En el
Hemolisis parcial primer tubo #1 el cual contenía 10ml de agua
del eritrocito destilada y las 2 gotas de sangre; los glóbulos
rojos se encuentran en un medio hipotónico
por lo que el agua del medio pasara a la
célula que es donde se encuentra mayor
Alcohol al 95% cantidad de solutos como proteínas, enzimas
Las células
pero aun así no hay mayor cantidad de agua
eritrociticas
precipitaron por lo que presenta una variación de la
presión sobre la membrana y ocurre la
hemolisis como se observa claramente la
Jabón
Ilustración 3 Hemolisis Por Agentes solución se homogenizo lo cual es indicativo
Químicos
Hemolisis del
eritrocito de que ocurrió el proceso de hemólisis.
Mientras que en tubo #2 al cual le añadimos
contenía 7,5 ml de agua, 2,5 ml de NaCl 2% y
la concentración final fue de NaCl 0,5 % la
solución se homogenizo lo que nos indica
como anteriormente mencionamos que es un
indicativo de que ocurrió el proceso de
hemolisis, donde los glóbulos rojos en un
medio hipotónico sufren este proceso donde
se da el estallido de los glóbulos rojos en este
caso por variación de la presión osmótica a
estar en un medio donde hay mayor cantidad
de solvente q de soluto. Por otro lado para el
tubo #3 donde añadimos 5,5 ml de agua, 2,5
ml de NaCl al 2% y con una concentración
final de 0,9% la solución salina es una
solución isotónica, por lo que si pones en ella
glóbulos rojos (2 gotas de sangre), éstos se
mantendrán en un estado íntegro, es decir,
Discusión de los resultados completos y estables; siendo este el mismo
medio que se encuentran en el plasma
Inicialmente se nos es necesario conocer que sanguíneo es decir no alteramos el medio en
es la hemolisis pues “La hemólisis el que se encuentran normalmente por lo que
(eritrocateresis) es el fenómeno de la se mantienen completamente normal su
desintegración de los eritrocitos (glóbulos estructura. (Shawn, O. 2001)
rojos o hematíes). El eritrocito carece de
núcleo y orgánulos, por lo que no puede
repararse y muere cuando se «desgasta».
Por último, realizamos la prueba con el tubo
#4 que contenía 3,5 mL de agua, 6,5 ml de
NaCl 2% y una concentración final de NaCl
1,3% (mayor de 0,9 %) “los glóbulos rojos se
encontraban en un medio hipertónico lo que
nos indica que ocurrió el fenómeno de
plasmólisis mediante el cual la célula se
contrae en un medio hipertónico, la salida del
agua de la célula continua hasta que la
presión osmótica del medio y de la célula sean
iguales ocasionando que esta se contraiga y
puede llegar a morir por deshidratación “según
(Cambell,2002). Como se puede observar en
la ilustración 2 el tubo #4 se observa
claramente este fenómeno.
También realizamos otras pruebas donde
intentamos probar que efecto tienen sobre los
eritrocitos la exposición ante agentes
químicos. “Los compuestos químicos como
solventes orgánicos (cloroformo, etanol) o los
detergentes estos pueden producir hemólisis
en un medio isotónico, pues la parte no polar
de la membrana celular se disuelve en ellos”
según. (Harvey, 2001). Para esta prueba en
el tubo #1 añadimos 10 mL de NaCl al 0,9 %
mas 2 gotas de sangre en este medio no hay
movimiento neto de agua y el volumen celular
se mantiene por lo tanto este sería nuestro
tubo control para comparar los resultados de
las demás soluciones después de dejar
reposar 15 minutos. Al tubo #2 se agregó
también 10 ml de NaCl al 0,9 % ,2 gotas de
sangre, y 2 gotas de cloroformo esperamos
15 minutos y observamos y pudimos apreciar
una hemolisis parcial como se observa en la
ilustración #4 el tubo #2 se ve claramente que
no está totalmente homogenizado pero si se
observa en comparación con el tubo control si
presenta hemolisis “El proceso de hemólisis
química en el cloroformo se da ya que es un
compuesto orgánico y estos son capaces de
disolver los componentes lipídicos de la
membrana y actuar de la misma manera que
lo haría otro disolvente orgánico” según .
(Keane, 2007). Por otro lado en el tubo#3 se
adicionó de igual manera la solución de NaCl
0,9% ,2 gotas de sangre y 2 gotas de alcohol
al 95% esto disolvió “La membrana de los
glóbulos rojos causando la lisis de estos; al
disolver su membrana provoco la liberación al
medio externo del grupo hemo de la
hemoglobina que está en el interior de los
glóbulos rojos, y que es el responsable del
color rojo de la sangre”. Según
(Donovan,2002) ; también pudimos observar
la formación de un precipitado en el fondo del
tubo que contenían los glóbulos rojos
destruidos esto indica un daño en las
membranas celulares de los hematíes
(eritrocateresis). Por otro lado también
realizamos la prueba en el tubo #4 donde
añadimos también 10 ml de NaCl al 0,9 %
se agregó 2 gotas de sangre más 2 gotas de
una solución saturada de jabón lo que dio
lugar a la lisis de los glóbulos rojos ya que
ocurrió la destrucción de la membrana celular
de los hematíes; “Lo que ocurre con el jabón
(detergentes) es que contienen moléculas
anfipáticas, esto es que en un extremo de sus
moléculas son hidrofílicas (solubles en agua)
y por otro son hidrofóbicas. Entonces, las
membranas son compuestas por fosfolípidos,
que también tienen un extremo soluble en
agua y otro hidrofóbico. Entonces los
detergentes lo que hacen es unir sus extremos
hidrofílicos con el extremo hidrofílico de los
fosfolípidos y sus partes hidrofóbicas con los
extremos hidrofóbicos de los fosfolípidos. Al
realizar estas interacciones literalmente
disuelven las membranas y las solubilizan
provocando una evidente hemolisis”. Según.
(Murray, 2009.)
Cuestionario
1. En base a los resultados ¿Cuál es la
referencia osmótica mínima?
R: La prueba de fragilidad osmótica indica la
resistencia de los eritrocitos a la ruptura por
acción de la presión osmótica, ejercida sobre
la membrana eritrocitaria, al colocarlos en
soluciones salinas hipotónicas; es un
indicador de la razón volumen/superficie
celular, importante para el diagnóstico
diferenciado y la evolución de determinados
tratamientos. Para el estudio de la fragilidad
osmótica en eritrocitos normales, obtenidos
de sangre periférica de individuos
supuestamente sanos, se calculó el
porcentaje de hemólisis en presencia de
soluciones con concentraciones decrecientes
de NaCl. Para la resistencia globular mínima
se toma como valor de referencia el 10 % de
hemólisis, que representa el valor máximo
permisible para considerar la hemólisis dentro
de los límites normales. Se toma como valor
de referencia para la resistencia globular
máxima el 90 % de hemólisis. Cuando los
eritrocitos se colocan en una solución
hipotónica, se incrementa el flujo de agua
hacia el interior para lograr el equilibrio de
concentraciones de solutos entre el interior y
el exterior celular, los eritrocitos se hinchan
hasta alcanzar el punto crítico, donde la
membrana pierde su integridad y ocurre la
hemólisis. La habilidad de los eritrocitos
normales para resistir la hipotonicidad
proviene de su forma bicóncava y las
propiedades elásticas de las membranas, las
que permiten que la célula aumente su
volumen hasta un 70 % antes de que la
Membrana se estire; una vez superado este
límite ocurre la hemólisis.
2. analizar cada uno de los tubos y
explicar el efecto de cada agente
químico. Explicar en cuales tubos se
produjo hemolisis y porque
Químicos
Observaciones
Tubo control
En solución isotónica
Célula completamente normal es el estado
normal de los eritrocitos en el plasma
Cloroformo Hemolisis parcial del eritrocito El
proceso de hemólisis química en el cloroformo
se da ya que es un compuesto orgánico y
estos son capaces de disolver los
componentes lipídicos de la membrana y
actuar de la misma manera que lo haría otro
disolvente orgánico”
Alcohol al 95%
Las células eritrociticas precipitaron
La membrana de los glóbulos rojos causando
la lisis de estos; al disolver su membrana
provoco la liberación al medio externo del
grupo hemo de la hemoglobina que está en el
interior de los glóbulos rojos, y que es el
responsable del color rojo de la sangre.
También pudimos observar la formación de un
precipitado en el fondo del tubo que contenían
los glóbulos rojos destruidos esto indica un
daño en las membranas celulares de los
hematíes (eritrocateresis).
Jabón
Hemolisis del eritrocito “Lo que ocurre con el
jabón (detergentes) es que contienen
moléculas anfipáticas, esto es que en un
extremo de sus moléculas son hidrofílicas
(solubles en agua) y por otro son hidrofóbicas.
Entonces, las membranas son compuestas por
fosfolípidos, que también tienen un extremo
soluble en agua y otro hidrofóbico. Entonces
los detergentes lo que hacen es unir sus
extremos hidrofílicos con el extremo hidrofílico
de los fosfolípidos y sus partes hidrofóbicas
con los extremos hidrofóbicos de los
fosfolípidos. Al realizar estas interacciones
literalmente disuelven las membranas y las
solubilizan provocando una evidente
hemolisis”.
Conclusiones
 Logramos ver los efectos que tiene
sobre las células los diferentes
cambios de su medio y como se ve su
membrana perjudicada tanto al
aumentar la cantidad de soluto es decir
al volver su medio hipertónico como el
volverlo hipotónico causa daños
irreversibles de la membrana del
eritrocito.
 Estudiamos como los agentes
químicos “orgánicos” afectan la
membrana produciendo así
hemolisis parcial o completa del
eritrocito.
 Observamos la importancia que tiene el
mantener la homeostasis del sistema
“plasma”, ya que al alterase este de
cualquier manera las células hemáticas
“eritrocitos “se ven afectas y con ellas
el suministro de oxígeno y sistema de
excreción de CO2.
Referencias Bibliográficas
 (Martínez. Y. 2019).bioquímica de los
fluidos corporales recuperado de :
http://abagnarelli-
bioquimica.blogspot.com/2015/12/340-
fluidos-corporales.html
 Murray Robert. Harper Bioquímica
ilustrada. 28ª edición Editorial Mc
Graw Hill Lange. China,2009
 Donovan, A Biquimica .3ª edición
la Editorial Medica panamericana.
Uruguay, 2002. Recuperado de :
https://www.uninet.edu/tratado/c060
206.html
 Shawn, O. Bioquímica de la vida .4ª
edición Editorial ciencia ingeniería.
España, 2001. Recuperado de :
https://www.academia.edu/2289879
6/fisiolog%c3%ada-
biotecnolog%c3%ada_2015-
i_laboratorio_1_permeabilidad_de_l
a_membrana_celular
 (Miranda D. 2017). Fisiologia
sanguínea “hemolisis” Medline plus
recuperado de :
https://medlineplus.gov/spanish/enc
y/article/003641.htm
 Harvey, R. 2007. Bioquímica. 3a
Edición. interamericana, Buenos aires
recuperado de
https://www.tirant.com/libreria/libro/bio
quimica-richard-a-harvey-
9788415840855