CINÉTICA DE LEVADURAS

Juan C. Bedoya, Karen V. Delgado, Valentina Rodríguez

juancamilofc17@gmail.com​, karen_delgado_98@hotmail.com, valroes16@gmail.com
Universidad Icesi, Departamento de Ingeniería Bioquímica, Microbiología industrial, Cali 2019

RESUMEN

Con el objetivo de producir biomasa a partir de ​Saccharomyces cerevisiae ​y monitorear las fases de
crecimiento y los factores que inciden sobre éste; se estudiaron muestras tomadas cada dos horas de
un cultivo incubado durante 12 horas de este microorganismo en un caldo mosto. Se analizaron,
además del crecimiento de biomasa a través del tiempo, variables como el pH, la concentración de
azúcares reductores, la viabilidad y la presencia de bacterias ácido lácticas (BAL) y levaduras
salvajes, así como su impacto. De esta manera, se estudiaron los cambios que tiene dicho proceso
sobre el medio bajo el cual fue incubado y por consiguiente en el metabolismo de la levadura. Los
resultados obtenidos fueron analizados y se encontró que a través del tiempo el pH y la concentración
de azúcares reductores disminuyen, al tiempo que la biomasa aumentó y la presencia de BAL y
levaduras salvajes fue en términos simples constante, mientras que la viabilidad fue variable. Todo lo
anterior fue expuesto en gráficas y tablas debidamente estudiadas.

Palabras clave: ​levaduras salvajes, ​Saccharomyces cerevisiae​, pH, azúcares reductores, viabilidad,
biomasa, metabolismo.

INTRODUCCIÓN

Las levaduras son hongos unicelulares, estas contienen casi los mismos orgánulos de una célula
eucariota madura. El núcleo, el aparato de Golgi, las mitocondrias, el retículo endoplásmico, la
vacuola y el citoesqueleto son los más importantes. El método primario de reproducción es por
germinación y, en ocasiones, por fisión binaria (Monroy, 2016). Las levaduras se han utilizado para
hacer pan, cerveza y vino desde la antigüedad; en ese entonces las condiciones bajo las cuales se
producía etanol eran desconocidas para la población de la época. En el siglo XIX, Pasteur confirmó la
presencia de microorganismos capaces de degradar azúcares y por medio de procesos metabólicos
fermentativos, producir etanol. Las levaduras han sido explotadas por la humanidad durante muchos
años en procesos fermentativos, este no es su única aplicación, a partir de las levaduras se puede
obtener biomasa, glicerol y proteínas de organismos unicelulares (Türker, 2014).

Ahora bien, los procesos de fermentación tradicionales son llevados a cabo principalmente por la
especie de levaduras, ​Saccharomyces cerevisiae​, una levadura que utiliza la glucosa como sustrato y
posee una alta capacidad fermentativa; el uso constante de esta levadura es el motivo por el cual en
muchas ocasiones su nombre es usado como sinónimo de levaduras (sin embargo, ​S. cerevisiae es una
levadura bastante excepcional ya que es una de las pocas levaduras que pueden crecer
anaeróbicamente), además se cree que todas las levaduras son fermentativas. Contrariamente a la
creencia general, alrededor de la mitad de las especies descritas de levaduras no pueden fermentar, no
obstante, muchos de estas levadura han ganado un papel importante en la biotecnología (Türker,
2014). El aumento de la demanda de productos relacionados con la levadura ha convertido la biomasa
de la levadura en un producto valioso, y ha forzado la generación y optimización de los procesos de
producción de la biomasa de la levadura industrial, que en la actualidad generan grandes cantidades de
levadura cada año (Johannes R, 1993). La producción de estos microorganismos puede verse afectada
por factores que alteran el funcionamiento de estos, como por ejemplo, las cepas de levadura como la
S. cerevisiae son propensas a estar expuestas a cambios de las condiciones de cultivo como la
disponibilidad de nutrientes y concentración de sustancias, estos cambios pueden causarles estrés. En
el proceso de fermentación, las levaduras se exponen a tipos de estrés como el oxidativo, térmico,
osmótico o de etanol que pueden afectar la población, y la eficacia de fermentación. Es por esta razón
que estos microorganismos poseen varios mecanismos que les permite responder a diversos cambios
de condiciones y les ha permitido evolucionar de tal manera que puedan sobrevivir a los cambios que
puedan haber en su entorno (Priyanka Saini, 2018). Por este motivo es de gran importancia el estudio
de las condiciones dentro de los procesos fermentativos, en los cuales las levaduras participan
favoreciendo la obtención de productos de interés industrial.

Finalmente, el objetivo de este estudio es evaluar los cambios en las condiciones de un cultivo de
Saccharomyces cerevisiae a​ través del tiempo durante un proceso fermentativo, de esta manera se
analizarán los porcentajes de viabilidad los cuales permiten determinar las condiciones más favorables
para la levadura, de manera que se procure mantener dichas condiciones constantes para así favorecer
no sólo la obtención de etanol sino el aumento en la biomasa. Ambos productos son de interés
industrial ya que pueden ser aprovechados por la sociedad y/o utilizados en otros tratamientos
industriales.

MATERIALES Y MÉTODOS

Cuantificación de Biomasa
se tomo con ayuda de una micropipeta 1000uL de cultivo y se adicionaron en 9 mL de solución salina
estéril 0.85% (p/v). el cual corresponde a la dilución 10​-1​. Se realizaron diluciones seriadas en base 10
desde 10​-1​ hasta 10​-5​ en solución salina estéril 0.85% (p/v). luego se pasó a hacer el recuento en
cámara de Neubauer en la cual se colocó un cubreobjetos en el centro de la cámara, con ayuda de un
capilar se puso en contacto con la muestra permitiendo que ésta suba por capilaridad, luego se puso la
punta del capilar en el borde del cubreobjetos dejando así que el líquido penetre entre la cámara y el
cubreobjetos desde el lateral por capilaridad, se debe tener cuidado no ejercer presión sobre la cámara.
Posteriormente se colocó la cámara en el microscopio, se enfocó la cuadrícula central con el objetivo
de 4x y se aumentó hasta 40x, una vez que se identificó la cuadrícula, se hace el conteo de los 25
cuadrantes, reportar el resultado de células contadas y calcular el valor de biomasa empleando la
ecuación 1 en la cual el valor obtenido corresponde a la concentración de células/mL presente en la
muestra en ese tiempo de muestreo.

Determinación del porcentaje de viabilidad

Con ayuda de la micropipeta se tomó 1000uL de cada tiempo de muestreo y se adicionaron a 9 mL de
solución salina estéril 0.85% (p/v), la cual corresponde a la dilución 10​-1​, se realizaron diluciones
seriadas en base 10 desde 10​-1 ​hasta 10​-3​ en solución salina estéril 0.85% (p/v). luego se adicionaron
12 gotas de azul de metileno 0.1% (p/v). posteriormente se colocó un cubreobjetos en el centro de la
cámara de Neubauer, con ayuda de un capilar se puso en contacto con la muestra permitiendo que esta
subiera por capilaridad, luego se puso la punta del capilar dejando que el líquido penetre entre la
cámara y el cubreobjetos desde el lateral por capilaridad, se debe tener cuidado de no ejercer presión
sobre la cámara. Después de esto, se pasó a observar la cámara en el microscopio, se enfocó la
cuadrícula central con el objetivo 4x aumentando hasta 40x, se contó por cada cuadrante tanto las
células incoloras como las células teñidas reportando el valor de cada una de ellas y se calculó el
porcentaje de viabilidad empleando la ecuación 2 en la cual el valor obtenido corresponde al
porcentaje de viabilidad de las células presentes en la muestra. 2.3. Recuento de contaminante de
proceso.

Recuento de bacterias ácido-lácticas

se realizaron diluciones seriadas en base 10 tomando 1000uL de cultivo adicionando a 9 mL de
diluyente, se realizaron las diluciones hasta 10​-5​. Luego con ayuda de un asa estéril se tomó una gota
de cada una de las diluciones y se sembró en superficie en agar MRS, se dejaron incubar las cajas
durante 48 h a una temperatura de 35 C, finalizando el tiempo de incubación se realizó el recuento de
colonias.

Recuento de levadura salvajes

se realizaron diluciones seriadas en base 10 tomando 1000uL de cultivo adicionando a 9 mL de
diluyente, se realizaron las diluciones hasta 10​-5​. Luego con ayuda de un asa estéril se tomó una gota
de cada una de las diluciones y se sembró por duplicado y en superficie en agar lisina, se dejaron
incubar las cajas durante 48 h a una temperatura de 35 C, finalizando el tiempo de incubación se
realizó el recuento de colonias.

Medición de pH
Se tomó la muestra correspondiente y se realizó la medición de pH con ayuda del pH metro teniendo
cuidado de haber calibrado antes de su uso.

Cuantificación de azúcares en fermentación.

Se cubrió un tubo de 16x150 con papel aluminio evitando así el paso de luz, se tomó con ayuda de la
micropipeta 250uL de la muestra y 250uL del reactivo DNS y se adicionaron en el tubo, se calentó en
baño maría durante 5 min y posteriormente se detuvo la reacción ya que se colocan los tubos en hielo
durante 5 min. Luego de esto, se adicionaron 2.5mL de agua destilada a cada uno de los tubos de
reacción. Se ajustó el cero de absorbancia del espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm, se
calibró el espectrofotómetro con un blanco que contenía reactivo DNS y agua destilada, luego se pasó
a leer la absorbancia de los tubos de reacción, (En caso de tener un valor de absorbancia por encima
de 1.0 se debe realizar una dilución de la muestra inicial y repetir el procedimiento) Finalmente se
reemplazó el valor obtenido en la ecuación 3 de la recta obtenida.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Para la cuantificación de Biomasa descrita anteriormente se tomaron muestras cada 2 horas de un

proceso fermentativo de 12 horas. Para cada una de las muestras se realizó un conteo en cámara de
Neubauer que por medio de la ecuación 1 lanzó los resultados expuestos en la tabla 1. Así mismo, en
esta tabla se exponen los valores de pH para cada muestra, al igual que los resultados de porcentaje de
viabilidad calculado a partir de la ecuación 2 con datos provenientes del recuento de Biomasa en
células/mL de ​Saccharomyces cerevisiae​.

N o. de células X F actor de dilución

(1)
(1 x 10 −4 ) x n
25
 T otal de células − Células muertas
T otal de células x 100 ​ (2)

Un proceso que durante este estudio tomó una amplia importancia fue el método del DNS. Este se
basa en la relación entre azúcares reductores presentes en una muestra dada y el ácido
3,5-dinitrosalicílico, donde se produce la reducción de este en ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, que
presenta una coloración naranja que puede ser cuantificable colorimétricamente por medio de la
medición de la absorbancia en un rango de 540-570 nm (María Alejandra Canseco Grellet, 2015). tal
como lo muestra la figura 1.

Figura 1.​ Método del DNS para cuantificación espectrofotométrica de azúcares reductores.

Ya con los datos de absorbancia obtenidos y por medio de la utilización de ecuación lineal que
representa la curva de calibración del método, la cual fue proporcionada como ​y = 0,3795x - 0,0132
R² = 0,9938, se procedió a determinar las concentraciones de azúcares reductores presentes en las
muestras. Dichas concentraciones, además de los anteriormente expuestos, fueron consumadas en la
tabla 1. Finalmente en esta tabla se encuentran expuestos los datos obtenidos a partir del recuento de
las unidades formadoras de colonias de bacterias ácido lácticas (BAL) y levaduras salvajes en agares
MRS y Lisina respectivamente.

El agar MRS es un agar selectivo para el crecimiento de bacterias ácido lácticas; la proteosa peptona,
el extracto de carne, el extracto de levadura y la glucosa constituyen la fuente nutritiva, puesto que son
los compuestos que aportan nitrógeno, vitaminas, carbono y minerales. Por su parte el monooleato de
sorbitán, las sales de sodio, magnesio y manganeso son los que proporcionan los cofactores que
promueven el crecimiento bacteriano al tiempo que inhiben el crecimiento de otros microorganismos.
De igual forma el citrato de amonio inhibe el crecimiento de bacterias gram negativas (S.A., MRS.
Agar, 2015). Por otra parte, el agar Lisina es un medio selectivo; ya que al contener la lisina como
única fuente de nitrógeno permite el crecimiento diferenciado de levaduras salvajes (Torres, M. 2007).

Tabla 1.​ Variables para el análisis de la producción de biomasa en levaduras.

HORA Biomasa % de concentración Absorbancia pH Recuento Recuent
Saccharomyc viabilidad de azúcares (Dilución) BAL o Lev.
e cerevisiae reductores Salvajes
(Cel/mL) (g/mL)

6,50E+0
0 3,60E+06 83,33 22,13 0,097 (100) 2,8 6,00E+05 5
 8,00E+0
1 5,10E+05 92,44 27,66 0,118 (100) 3,8 3,40E+05 5

1,38E+0
2 2,30E+06 97,44 25,97 0,111 (100) 3,6 6,60E+05 6

3,70E+0
4 1,10E+08 81 17,39 0,079 (100) 3,5 3,31E+07 6

1,17E+0
6 8,30E+07 85,71 16,33 0,075 (100) 3,8 9,90E+06 6

3,00E+0
8 6,50E+06 89,8 21,34 0,094 (100) 3,8 1,14E+06 6

2,14E+0
10 1,17E+08 88,4 17,56 0,080 (100) 3,9 5,00E+06 6

9,30E+0
12 8,50E+06 85 23,18 0,101 (100) 3,7 2,20E+06 5

Gráfica 1​. Relación hora vs Factor z

De la gráfica anterior se pueden obtener varias observaciones importantes. En primer lugar es

importante resaltar el comportamiento que, a través del tiempo, tiene la concentración de azúcares
reductores. En un inicio, la concentración de azúcares reductores aumenta, que se puede observar
mejor en la gráfica 2, después disminuye considerablemente pero aun así tiene a aumentar de nuevo.
Lo anterior, puede pensarse como un error durante el estudio, pues informes como el de (Carolina
Peña, 2008) y (MSc.Yanet Boffill-Rodríguez, 2014) muestran, a través de métodos similares a los
expuestos en este documento, que la concentración de azúcares reductores disminuye con el tiempo.

Gráfica 2.​ Relación de [Azúcares reductores] Vs hora

A pesar de lo anterior; una posible razón que puede justificar lo que pasó, es que, teniendo en cuenta
que el mosto usado para el tratamiento fue de malta, con una composición expuesta en la tabla 2
(Rocha., 2009) este medio contiene concentraciones apreciables de vitaminas del complejo B, tales
como la tiamina, riboflavina, niacina, piridoxina, ácido pantoténico, biotina e inositol, requeridas por
las células de levadura puesto que estas vitaminas participan en el metabolismo de muchas reacciones
esenciales (Rodríguez, 2013). Tiene como rol, entre muchos otros, proveer de energía al
microorganismo, básicamente degradando los carbohidratos en glucosa; tiene importante participación
en las reacciones del metabolismo energético, la tiamina actúa en el metabolismo de los carbohidratos
como coenzima en la descarboxilación de los ácidos pirúvico y cetoglutámico, piridoxina actúa como
coenzima en una amplia variedad de transformaciones metabólicas de los aminoácidos (J. Castor,
1952).

La malta ​además de aportar aminoácidos como fuente de nitrógeno, esta es sumamente rica en
minerales como el magnesio, potasio, hierro, zinc, fósforo, sodio y calcio; los cuales contribuyen a la
actividad enzimática de la levadura puesto que estos pueden ser usados como cofactores para sus
enzimas. Las fuentes de carbono incluyen polisacáridos y disacáridos como la sacarosa y la
maltotriosa; azúcares que no son reductores. Se ha informado que las levaduras pueden utilizar
fructosa, glucosa, maltosa, sacarosa y maltotriosa como fuentes de energía. Generalmente la levadura
remueve los azúcares del medio en un orden estricto: la sacarosa es hidrolizada extracelularmente por
invertasas y es la primera en ser consumida, seguida de la glucosa y fructosa, finalmente maltosa,
disacárido formado por dos moléculas de glucosa y maltotriosa, un polisacárido formado por tres
moléculas de glucosa (Hammond, 2002); estos son escindidos en azúcares más simples como la
glucosa por medio de la acción enzimática de la levadura en su etapa de adaptación, son, ahora sí,
detectados por el DNS, ya que dichos azúcares simples que surgen de la ruptura de los complejos si
son reductores. De manera que esto puede causar un aparente aumento en la concentración de
azúcares reductores.
 Tabla 2.​ Componentes del mosto de malta.

Otro aspecto que se debe analizar de la gráfica 1 es el cambio en el porcentaje de viabilidad. Es

importante notar como los porcentajes son muy variables para la mayoría de las horas reportadas.
Según (Torres, M. 2007) hay una fase llamada la fase de muerte en que las levaduras, una vez
detienen la producción de biomasa, las células que no son viables mueren. Pero, como lo que se busca
es la producción de biomasa, sería una pérdida la muerte de estos microorganismos. Además de que
ninguno de los valores de viabilidad muestra una fase de muerte total. De esta manera la alta
desviación entre los datos de viabilidad puede deberse a altas concentraciones de etanol, este es el
principal producto metabólico de las levaduras durante la fermentación y es cuantitativamente el
principal producto biotecnológico a escala global. Un dilema a confrontar en la tecnología de las
levaduras es la acumulación del etanol durante la fermentación que actúa como estrés químico potente
hacia las células de levaduras. Los principales efectos del etanol pueden ser tóxicos y afectar la
viabilidad de la célula y su crecimiento, en la biosíntesis de macromolécula y en la estructura de la
membrana y su función (​Suárez, 2016​); además el etanol puede actuar como inhibidor de la
fermentación a partir de un 8 %. Riegel (2003) afirma, que no es recomendable terminar la
fermentación con un grado alcohólico muy elevado. Aun así, teniendo en mente los valores expuestos
en la gráfica 1 y la tabla 1 en cuanto a la viabilidad, se observa que las horas en las que se presentan
menores porcentajes fueron en la 0, 4 y 12. Una posible explicación para esto puede ser que al ser
estas horas las que definen la fase adaptativa, puede que algunas de las levaduras no fueron capaces de
esto al tiempo que se dio su muerte.

Para el crecimiento de biomasa a partir de la ​Saccharomyce cerevisiae d​ ebemos tener en cuenta la

curva de crecimiento microbiano, esta consiste en que un microorganismo (bacteria, hongo o
levadura) se le inocula en un medio de cultivo apropiado para su desarrollo y se le dan las condiciones
óptimas para su crecimiento, este presenta una curva de crecimiento típica, donde fácilmente se podría
graficar en función del tiempo la concentración celular. En esta curva se presentan unas fases, las
cuales serán fase de adaptación, fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte. En la fase de
adaptación que será la primera fase en la que la cepa estará, como su nombre lo indica es cuando esta
se está adaptando a su entorno, en esta etapa se localiza en un medio ambiente que les favorece para
su desarrollo lo que irá generando una gran actividad metabólica, pero sin multiplicarse. En esta fase
hay una gran producción de enzimas, un incremento en los componentes estructurales y en la
concentración del ARN mientras que el ADN permanece constante.
El tiempo en que la cepa dure en esta fase dependerá de las condiciones del medio, si estas son
desfavorables en cuanto a cantidad de sustrato, temperatura y pH se llevará a cabo un periodo de
latencia. En contraste a esta situación si las condiciones son óptimas pasará a la fase logarítmica. La
fase logarítmica el metabolismo es bastante activo y dirigido esencialmente a obtener energía y
construir para multiplicarse, por esto su pared celular es más delgada ya que constantemente está
promoviendo a este incremento de biomasa. Una vez más esta fase durará dependiendo de qué tan
favorables sean sus condiciones y mientras más favorables sean sus condiciones, más rápido será el
consumo de nutrientes, por esto a medida que transcurre el tiempo, las condiciones se tornan más
desfavorables hasta que se llega a un estado de equilibrio en el cual se produce ligera multiplicación,
pero también muerte; este estado se denomina fase estacionaria. En esta fase la población se estabiliza
y hay ciertos cambios morfológicos en la célula, como por ejemplo en la pared celular, esta se pone
más gruesa para resistir a la adversidad de la falta de nutrientes. Por último llega la fase de la muerte,
en esta se disminuye el número de células viables; al aumentar la mortalidad disminuye la
concentración en biomasa. (Torres, M. 2007).

De acuerdo a lo anterior y los resultados obtenidos, podemos observar cómo se relacionan estos datos.
Se esperaría que en los primeros tiempos la cantidad de biomasa de la levadura fuera constante,
aunque en el tiempo 0 y 2 se puede ver una constancia, pero no un aumento, en el tiempo 4 hay un
aumento, pero en el tiempo 6 vuelve a continuar disminuyendo, hasta llegar a casi cero en el tiempo 8
por lo que se podría asumir que desde el tiempo 0 y 6 las células estén en un estado de adaptación.
Desde la hora 8 se puede evidenciar claramente el aumento en la biomasa hasta llegar a la hora 10, por
lo que se podría tomar que la cepa está atravesando por la fase logarítmica. Por último podemos
concluir que podríamos relacionar el tiempo 12 con la fase de muerte ya que hubo una disminución
muy alta.

En este estudio se utilizó como medio de fermentación un mosto a base de malta. Este mosto contiene
el almidón de la malta en forma de azúcares fermentables por levaduras, glucosa. Con este sustrato S.
cerevisiae p​ uede realizar la ruta metabólica de glicolisis y tomar dos rutas dependiendo de las
condiciones del medio. Si la concentración de oxígeno es poca y la de glucosa alta, realizara
fermentación alcohólica, pero si el oxígeno es abundante y la glucosa está diluida, la utilizará
preferiblemente como base de su crecimiento y reproducción, sin inhibir la producción simultánea de
etanol. Esto es posible gracias a que a partir de los productos de la glicolisis se desencadenan las
demás rutas metabólicas necesarias para el crecimiento de la biomasa de la levadura. A continuación
se presenta una tabla con la secuencia de productos y las rutas metabólicas que los retoman como
sustratos. (Espitia, L. 2009)
 Tabla 3:​ Rutas metabólicas con sustratos y productos relacionados

Adicionalmente hay condiciones de temperatura, fuente de nitrógeno o carbono, nutrientes y posible

contaminación que también pueden afectar la integridad del organismo, porque la membrana celular
es la única barrera que está soportando todos los efectos. La principal consecuencia que pueden tener
estas condiciones en la célula, en especial el etanol, es la modificación la permeabilidad de la
membrana a los protones (H+) creando una inhibición de la bomba ATPasa. Si esta se inhibe, la
homeostasis del pH de la célula necesitará más energía para realizarse, pero llegará un punto en que
no se puede mantener el equilibrio de la entrada y salida de protones causando muerte celular.
(Jancome, M. 2009)

Por otro lado como se mencionó anteriormente el pH del medio también es cambiante, lo cual puede
verse sustentado en que estos medio de cultivo suelen ser contaminados con bacterias ácido lácticas y
levaduras salvajes. Las BAL tiene como producto final de su homo o heterofermentación el ácido
láctico y en la heterofermentación produce adicionalmente acetato y etanol, potenciando el posible
daño por protones previamente descrito. Adicionalmente los contaminantes bacterianos como las
BAL, establecen un efecto competitivo por el substrato de ​S. cerevisiae​, conduciendo a un menor
rendimiento de biomasa o la introducción de productos indeseables, teniendo en cuenta que, tiene
condiciones de vida muy similares a las de cultivo, su crecimiento es rápido y limita la disponibilidad
de glucosa para la levadura principal del proceso. En las destilerías han sido encontrados
microorganismos contaminantes como: ​Lactobacillus sp, Sporolactobacillus sp, Zymomonas sp,
Micrococcus sp, Acetobacter sp y Gluconobacter sp ​(Bayona, 2002).

Por otro lado las levaduras salvajes también limitan la disponibilidad de nutrientes para las levaduras
de cultivo, ya que son organismos contaminantes en cualquier proceso industrial. Se caracterizan por
cambiar el brillo de la cerveza volviendo más turbia e impidiendo su correcta floculación y también
pueden causar olores y sabores no deseados en el producto final. Estos organismos a pesar de que
tienen una reproducción y fermentación distintas a las levaduras de cultivo, consumen glucosa y la
convierten en ácido acético principalmente, afectando el correcto crecimiento de S. cerevisiae​.
(Jacques, K. 1999).

La presencia del ácido láctico y acético producido por estos contaminantes altera el pH y
también afectará la integridad de ​S. cerevisiae​, debido que los ácidos no disociados entran por la
membrana hasta equilibrarse con el ambiente y una vez en el interior de la célula se disocian por
que su pKa es menor al pH interno. Esto causa que la célula expulse protones por la ATPasa
para aumentar su pH nuevamente, pero los ácidos entrarán de nuevo causando una acidificación
constante. Y relacionando esto con las afecciones del etanol sobre el flujo de los H+ hacia
afuera de la célula, va a llegar un punto en el que el interior de la célula será demasiado ácido y
estará cargado de protones, lo que también causará su muerte. Por los aspectos previamente
descritos es vital para la levadura desarrolle mecanismo preventivos o de protección
principalmente en su membrana y/o metabolitos. La presencia de oxígeno permite la correcta
síntesis de ergosterol para el crecimiento de biomasa, este ergosterol es el encargado de la
tolerancia del etanol porque permite que la membrana adquiera una fase LβI interdigitada, la
cual es similar a un gel que protegerá la célula del ambiente. En la figura 2 se muestra las
modificaciones de las fases LOo a LβI de la membrana. (Venegas et al 2012). Esto permite que
la membrana de la celulasa más rígida y el etanol no afecte la a ATPasa y su correcto
funcionamiento permitirá el control del pH interno de la célula. (Espitia L, 2009)

Figura 1:​ Modificaciones de la membrana

CONCLUSIONES

● La variabilidad de datos para el crecimiento de biomasa a partir de la ​Saccharomyce

cerevisiae, ​se debe a que se utilizó un mosto a base de malta y no se dieron las condiciones
más óptimas para su crecimiento.
● El control de los cultivos por contaminaciones y la estabilidad del cultivo propio es esencial
para la supervivencia de las levaduras de cultivo. Si no se tiene el correcto ambiente su
membrana se puede ver comprometida y de ahí sus funciones de regulación por homeostasis,
llevándola a la muerte.
● Este estudio permitió determinar y cuantificar los contaminantes microbianos presentes en la
producción de biomasa, de acuerdo con lo reportado, estos microorganismos son BAL y
levaduras salvajes en un nivel promedio del orden 106 UFC/ml.
● El aumento en la concentración de azúcares reductores al principio del proceso se debe a la
hidrólisis de polisacáridos y disacáridos presentes en el mosto de malta.
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