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2019
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1.- Requisito indispensable: Antes de realizar cada práctica leer cuidadosamente el protocolo
de la práctica para familiarizarse con el trabajo que va a desarrollar. Al conocer el protocolo
disminuye la posibilidad de que ocurran accidentes y además puede aprovechar el tiempo de
manera eficaz.
2.- Prohibido: Comer, beber, fumar y distraer al Profesor a la hora de la práctica y el acceso
a toda persona ajena al área.
3.- Protección: Llevar el equipo de protección personal necesario. Esto garantiza que
cualquier accidente que pueda ocurrir sea de menor gravedad, de no acatar las reglas no se
permitirá acceso a la práctica.
4.- Material y Equipo: Aportado por el alumno: Debe llevar aquellos materiales
estrictamente necesarios para la práctica que va a desarrollar.
Aportado por la Institución: Será solicitado con tiempo suficiente antes de la práctica y será
entregado mediante un vale al alumno.
Ser cuidadoso con todo el material y equipo que utilice para evitar accidentes y deterioro del
mismo en las prácticas.
5.- Limpieza: Dentro del área que se va a trabajar se comienza limpiando el área de trabajo
y se repite este procedimiento después de que se haya terminado.
6. Higiene: Durante la sesión de trabajo lavarse las manos con agua y jabón antes de hacer
cualquier procedimiento y al finalizar repita el mismo procedimiento para mantener buenas
condiciones higiénicas.
OBJETIVO
Diferenciar el sistema de defensa del organismo humano, desde su origen hasta el foco de
infección o el encuentro con el antígeno.
FUNDAMENTO
Los leucocitos (glóbulos blancos) son células que circulan por la sangre con la función de
combatir infecciones o cuerpos extraños. Son parte de las defensas inmunitarias del
organismo, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del cuerpo.
Existen dos grupos de leucocitos: los granulocitos (neutrófilos, basófilos y Eosinófilos) y los
agranulocitos (monocitos y linfocitos).
Los Eosinófilos poseen actividad fagocítica: se “comen” los agentes extraños. Sus gránulos
tienen sustancias que degradan lo fagocitado, sobre todo las larvas de parásitos. Además,
inician y regulan las reacciones alérgicas.
Los monocitos poseen actividad fagocítica bactericida. Ante estímulos químicos pueden
seguir a los neutrófilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hígado y pulmón, dando lugar a
macrófagos tisulares que forman el sistema retículo-endotelial, encargado de remover
material extraño circulante en sangre.
Los linfocitos B constituyen la memoria del pool linfocitario circulante (10%- 20%).
Maduros, pasan de la médula ósea a la sangre y se dirigen hacia los órganos linfáticos
periféricos para ubicarse en los folículos linfoides. Bajo estímulo antigénico
se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folículo linfoide. Pueden
seguir un proceso de estimulación hasta transformarse en inmunoblastos, y éstos en células
plasmáticas secretoras de inmunoglobulinas. Pueden también regresar al estado pequeño
linfocito B con memoria inmunológica, para pasar a formar parte del manto o corona.
Los linfocitos T forman una población mayoritaria. En el adulto normal oscilan entre 65% y
75%, con variaciones según la edad. Ejercen sus efectos mediante la liberación de proteínas
solubles, citocinas, encargadas de la transmisión de señales a otras células, o bien mediante
interacciones directas con otras células.
MATERIAL
• Agujas
• Jeringas
• Torundas
• Torniquete
• Alcohol
• Microscopio óptico
• Portaobjetos
• Tinción de Wright
• Aceite de inmersión
• Papel para microscopio
MÉTODO
1) Mezclar la sangre durante 3 minutos.
2) Realizar un frotis sanguíneo.
Poner una gota de sangre sobre un portaobjetos y con otro portaobjetos limpio, se deslizara
la gota sin hacer presión, pero uniforme. Dejar secar y después se fija con metanol,
sumergiéndolo y sacándolo rápidamente, después se introducirá en el.
PRACTICA N° 2 CONTEO LEUCOCITARIO INMUNIDAD NATURAL
OBJETIVO
Comprender la importancia de las células inmunológicas con relación a la presencia de
agentes agresores o lesiones.
FUNDAMENTO
Los leucocitos (glóbulos blancos) son células que circulan por la sangre con la función de
combatir infecciones o cuerpos extraños. Son parte de las defensas inmunitarias del
organismo, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del cuerpo.
Existen dos grupos de leucocitos: los granulocitos (neutrófilos, basófilos y Eosinófilos) y los
agranulocitos (monocitos y linfocitos).
Los Eosinófilos poseen actividad fagocítica: se “comen” los agentes extraños. Sus gránulos
tienen sustancias que degradan lo fagocitado, sobre todo las larvas de parásitos. Además,
inician y regulan las reacciones alérgicas.
Los monocitos poseen actividad fagocítica bactericida. Ante estímulos químicos pueden
seguir a los neutrófilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hígado y pulmón, dando lugar a
macrófagos tisulares que forman el sistema retículo-endotelial, encargado de remover
material extraño circulante en sangre.
Los linfocitos B constituyen la minoría del pool linfocitario circulante (10%-20%). Maduros,
pasan de la médula ósea a la sangre y se dirigen hacia los órganos linfáticos periféricos para
ubicarse en los folículos linfoides. Bajo estímulo antigénico, se activan y proliferan formando
el centro germinal en el interior del folículo linfoide. Pueden seguir un proceso de
estimulación hasta transformarse en inmunoblastos, y éstos en células plasmáticas secretoras
de inmunoglobulinas. Pueden también regresar al estado quiescente de pequeño linfocito B
con memoria inmunológica, para pasar a formar parte del manto o corona.
Los linfocitos T forman una población mayoritaria. En el adulto normal oscilan entre 65% y
75%, con variaciones según la edad. Ejercen sus efectos mediante la liberación de proteínas
solubles, citocinas, encargadas de la transmisión de señales a otras células, o bien mediante
interacciones directas con otras células.
MUESTRA
MÉTODO
1) Mezclar la sangre durante 5 minutos.
2) Tomar una alícuota de sangre con la pipeta de leucocitos.
3) Limpiar la punta de la pipeta sin perder líquido.
4) Llenar la pipeta con solución de Turk hasta el 1.1.
5) Mezclar el contenido de la pipeta en el agitador de pipetas.
6) Desechar las primeras 3 gotas de la pipeta de blancos.
7) Depositar la cuarta gota de la solución en la cámara de Newbauer.
8) Leer la cámara en el microscopio bajo objetivos 10x y 40x.
9) Hacer el conteo en los cuadrantes para leucocitos (4 cuadrantes).
10) Multiplicar el total por 100.
Nota: los leucocitos se observan como puntos formes luminosos y oscuros.
a) Realizar un frotis sanguíneo. Con la técnica que se mencionó en la práctica anterior
b) Leer en el microscopio bajo 40x.
c) Contar los leucocitos hasta 100 con ayuda del contador.
¿Cuáles son los valores normales del recuento leucocitario? ¿Qué indica un valor elevado en
el recuento?
LEUCOCITOS VALORES RELATIVOS (%)
Neutrófilos segmentados 55-65
Neutrófilos en banda 0-1
Eosinófilos 0,5-4,0
Basófilos 0.5-1
Monocitos 4-8
Linfocitos 25-35
FUNDAMENTO
El sistema fagocítico mononuclear cumple dos funciones principales, cada una llevada a cabo
por un tipo de célula procedente de médula ósea:
Los fagocitos poseen receptores para el componente C3b del sistema del complemento, así
como para la región constante de las inmunoglobulinas. Esto permite que los
microorganismos opsonizados puedan adherirse, facilitando la fagocitosis.
MUESTRA
Sangre venosa con anticoagulante heparina. Una cepa pura de Staphylococcus aureus,
coagulasa negativo.
MATERIAL
• Agujas
• Jeringas
• Torundas
• Torniquete
• Alcohol
• Asa de siembra ,mechero de alcohol
• Tubos de ensayo de 12 x 75 mm
• Pipetas Pasteur con bulbo
• Microscopio óptico
• Aceite de inmersión
• Portaobjetos
• Tinción de Wright
• Termómetro
• Baño María a 37oC
• Cronómetro
• Papel para microscopio
MÉTODO
1) Identificar 1 tubo de ensayo de 12 x 75 mm;
2) Agregar 2-3 gotas de sangre (MUESTRA) de la cepa Staphylococcus aureus al tubo.
3) Incubar el tubo preparado en baño María por 30 minutos.
4) Realizar un frotis sanguíneo de la muestra que será el control negativo.
Y se realizara otro frotis con la muestra del tubo incubado y con la cepa bacteriana 5) Teñir
los frotis con la técnica de Wright.
6) Poner una gota de aceite de inmersión a los frotis y distribuirlo homogéneamente. 7)
Revisar los frotis en el microscopio bajo el objetivo de 100x.
Describa el proceso de la fagocitosis.
¿Qué papel juega en fagocitosis el complemento C3b y C4b?, ¿Qué defectos pueden
presentar los fagocitos; qué consecuencias traen consigo?
PRACTICA N° 3 BRUCELOSIS:
Aspectos generales y Serodiagnóstico Prueba rápida en placa con antígeno Rosa de Bengala
ROSA DE BENGALA
OBJETIVO Desarrollar la prueba de tarjeta rosa de bengala como prueba tamiz para
diagnóstico de brucelosis.
METODOLOGÍA
2) Antes de utilizar cualquier antígeno se debe llevar a cabo una prueba del antígeno a utilizar
con un suero control positivo y un suero control negativo. Se depositan 0.08 ml de suero
positivo en un óvalo de la placa serológica y 0.08 ml de suero negativo en otro óvalo, se
agrega una gota de antígeno en cada uno, se mezcla con aplicador y se somete a rotación
mecánica o eléctrica durante cuatro min.
3) Con una pipeta serológica (Bang) se extrae suero (a temperatura ambiente) problema.
Manteniendo la pipeta en ángulo de 45° se deposita en una placa de vidrio serológica, en el
primer óvalo se depositan 0.08 ml, en el segundo 0.04 ml, en el tercero 0.02 ml, 0.01 y 0.005
ml.
VALORES DE REFERENCIA:
Generalmente títulos de 1:40 ó 1:80 son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos mayores
de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnóstico de enfermedad cuando estén
acompañados de la sintomatología clínica. Títulos mayores de 1:320, son concluyentes
¿Cómo se defiende las bacterias del género Brucella del sistema inmunológico?
PRACTICA N°4: SISTEMA ABO Y RH
TIPIFICACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS
1. INTRODUCCIÓN
SISTEMA ABO: Los eritrocitos poseen en su membrana sustancias antigénicas
determinadas genéticamente, las cuales pueden identificarse mediante anticuerpos
específicos. El primer grupo de estas sustancias fue identificado por Landsteiner en 1901, y
le llamó sistema ABO, el cual consiste en que un individuo tiene en sus glóbulos rojos uno,
dos o ninguno de los dos antígenos (A y/o B) pertenecientes a este sistema. Así, los
individuos pueden ser del tipo A, si solamente poseen el antígeno A; del tipo B, si únicamente
tienen el antígeno B; del tipo AB si poseen ambas, o del tipo 0 si no tienen ninguno de los
dos. La naturaleza química de los determinantes antigénicos es polisacarídica.
Aproximadamente el 85% de la población posee sustancias con características antigénicas y
estructurales similares a las presentes sobre las membranas de los eritrocitos en prácticamente
todas las secreciones corporales. A estos individuos se les llama secretores. Los
carbohidratos que forman estructura antigénica A y B en la membrana de los glóbulos rojos,
también están presentes en otros materiales biológicos como bacterias, alimentos y otros
agentes ampliamente distribuidos que constituyen un persistente estímulo. Los humanos
reaccionan a este estímulo produciendo anticuerpos contra aquellos antígenos que no forman
parte de su propia estructura celular. Por esta razón, el anticuerpo anti-A se produce en
personas del grupo AB, que contienen ambos antígenos, no forman dichos anticuerpos. A
estos anticuerpos se les llama isohemaglutininas.
Sistema Rh
En 1939. Levine y Stetson reportaron el caso de una mujer con severa reacción hemolítica
después de la transfusión sanguínea proveniente de su esposo. El antígeno responsable fue
diferente de los ya conocidos en la época. En 1940, Landsteiner y Winier inmunizaron
conejos y cobayos con eritrocitos de monos Macacus rhesus, basandose en la suposición de
que en los eritrocitos de estos monos podrían existir antígenos similares a los de los humanos.
El suero obtenido aglutinaba los glóbulos rojos de los monos rhesus y del 85% de la
población humana blanca. Hasta ese momento todo sugería que el supuesto antígeno hallado
por Landsteiner y Wiener en monos, y el supuesto antígeno descrito por Levine y Stetson en
humanos, era el mismo. Posteriores investigaciones demostraron que los supuestos antígenos
eran diferentes; se determinó que la mayoría de los humanos tienen el antígeno del mono
rhesus y además otro diferente, pero relacionado. A sugerencia de Levine, se conservó la
demostración del factor Rh para el antígeno humano, y se le asignó el nombre de LW al
antígeno común al hoimbre y al mono. A mediados de la década de los 40, se habían
identificado cinco antígenos como pertenecientes al actualmente denominado Rh. Estos
cinco antígenos (C, c, D, E, e) se combinan entre sí, dando lugar a diversos
patronesantigénicos. El D tiene dominancia antigénica. Los individuos que presentan el
antígeno D en sus eritrocitos se denominan Rh(+), y aquellos que no tienen el antígeno D se
denominan Rh(-).
Además de los sistemas AB0 y Rh pueden ser detectados otros sistemas antigénicos de la
membrana de los eritrocitos (Lewis, Duffy, MN, Ss. Li, etc). Estos sistemas se consideran
secundarios. El conocimiento de los antígenos sanguíneos ABO y Rh. Como antígenos
celulares importantes en transfusiones sanguíneas, en medicina legal y en la isoinmunización
materno-fetal. Los anticuerpos del sistema ABO son principalmente de clase IgM. Por lo
que son altamente aglutinantes y fijadores de complemento. Por este motivo, la
determinación de este sistema es de gran relevancia en transfusiones sanguíneas. 2.
MATERIALES Y REACTIVOS
Material por equipo 1 Frasco de torundas de alcohol 2 portaobjetos 3 pipetas Pasteur Jeringa
desechable de 5 mL con aguja de 21x32mm 2 tubos de ensaye de 13x 100mL 1 pipeta
serológica de 5 mL 1 pipeta serológica de 1 mL 5 palillos de madera Sueros tipificadores
anti-A, anti-B, anti-AB, Eritrocitos humanos tipo A, B y 0, en suspensión al 5% 2 tubos de
ensaye 10 x 75mm Tubo con tapón de rosca Suero tipificador anti-D comercial Solución
salina al 0.85%, suero de Coombs
Tipificación Sanguínea
2. Rotular una placa o portaobjetos de la siguiente manera: anti-A, anti-B, anti-AB y testigo.
Rotular otra placa diferente con: A, B y 0. 3. Del mismo tubo donde se dejó coagular la
sangre, con una pipeta pasteur tomar eritrocitos del fondo (de los no atrapados en el coágulo).
Colocar una gota de esta suspensión en el portaobjetos que tiene las marcas anti A, anti-B,
anti-AB y testigo. 4. Cerca de cada gota, adicionar una gota de suero comercial anti-A, anti-
B y antiAB, según corresponda y en el lugar marcado como testigo, colocar una gota de la
solución de albúmina al 25%. Mezclar primero suavemente con un palillo y después con
movimientos rotatorios. 5. Buscar la presencia de aglutinación antes de 25 seg.
Esto indicaría que los eritrocitos probados corresponden al grupo sanguíneo B. 6. Para buscar
las isohemaglutininas, en la otra placa marcada como A, B y 0, colocar una gota del individuo
frente a las marcas y agregar cerca una gota de eritrocitos previamente tipificados de tipo
sanguíneo A, B y 0, según corresponda. 7. Mezclar suavemente, primero con ayuda de un
palillo y después con movimientos rotatorios en forma de 8. Buscar la presencia de
aglutinación.
1. Con una pipeta Pasteur colocar cuatro gotas de sangre en un tubo con tapón de rosca que
contenga 2 mL de SS.
2. Marcar dos tubos: Rh y Testigo, colocar una gota de eritrocitos en cada uno.
7.Si no hay en ninguno incubar a 37°C, 20 min y lavar 3 veces con SS centrifugando a 1500
rpm 2 min. Después de la última centrifugación remover el sobrenadante y adicionar al
paquete celular dos gotas de suero de Coombs.
NOMBRE:________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Entregar reporte con los resultados y llenar la tabla: donde aglutina reportar por cruces
CASO 1:
CASO 2:
1. Rojas, W., Anaya, J. M., Cano, L. H., Gomez, L. M. & Lopera, D. Inmunología de
Rojas. (2012).
2. Kuby, C. Inmunology of Kuby. (2012).
3. Tizard I. Inmunología veterinaria. (2009).
4. Cansino G, Arjona G. Manual de prácticas de inmunología. (2013)