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INFORME PRE LABORATORIO BIOLOGÍA

COMPARACIÓN MICROSCOPIO Y
Nombre de la practica
ESTEREOMICROSCOPIO
Objetivos
General: determinar las diferencias entre el microscopio y el estereomicroscopio.

Específicos:
 Determinar las diferencias en la formación de imágenes entre el microscopio y el
estereomicroscopio.
 Determinar las diferencias en la magnificación de las imágenes entre el microscopio y el
estereomicroscopio.
 Determinar las diferencias en el poder de resolución entre el microscopio y el
estereomicroscopio.

Introducción Formatted Table

En algún momento de la historia temprana, los humanos debieron darse cuenta que al observar
cosas atreves de un cristal transparente, más grueso en el centro que en los bordes, estas se
veían más grandes (Bellis, 2019). Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
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El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado
pequeños como para ser vistos por la vista del ser humano. El término microscopio es la
conjunción de dos conceptos, por un lado “micro” que es equivalente a “pequeño” y “scopio” que
significa “observar”, en suma se refiere a la observación pequeña, o en menor grado.

El microscopio aumenta la capacidad de observación a


niveles de acercamiento tal que hasta hace posible el
análisis de partículas. La imagen que se obtiene es
realmente una investigación sobre la composición de los
objetos. Al estudio y análisis de los objetos pequeños se lo
denomina “microscopia” (Raffino., 2019).

La historia del microscopio empieza con la invención del microscopio compuesto, es decir, con la
idea de combinar más de una lente para observar objetos de forma aumentada. Acorde con esta
definición, la historia del microscopio empezaría a finales del siglo XVI, con el diseño de Zacharias
Janssen en el año 1590. Sin embargo, se tiene en cuenta que antes de la invención del microscopio
ya era común la utilización de lentes de aumento, también conocidas como lupas (Las lupas son
también un tipo de microscopio llamado microscopio simple). Otros indicios indican que el verdadero
inventor podría haber sido Hans Lippershey.

También Galileo Galilei presentó su microscopio óptico en 1609 utilizando un diseño basado en la
combinación de una lente cóncava junto con una lente convexa. Galileo Galilei llegó a este resultado
modificando uno de sus telescopios y quizá sin tener conocimiento del instrumento inventado por
Zacharias Janssen. En 1619 Cornelius Drebbel presentó su diseño con dos lentes convexas. En
cualquiera de los casos se asimila que el microscopio compuesto fue inventado en algún momento
entre los años 1590 y 1620. En 1625 Giovanni Faber es la primera persona en referirse a este nuevo
invento como microscopio.

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El microscopio de Zacharias Janssen

En 1590 Zacharias Janssen trabajaba junto con su padre, Hans Martens, como fabricante de
anteojos. Durante sus trabajos en el taller tuvo en algún momento la idea de conectar dos lentes
convergentes mediante un tubo. Con este simple montaje Zacharias Janssen se dio cuenta de que
podía observar objetos con aumentos significativamente mayores que los que conseguía con una
sola lente. Según los documentos de la época el aumento obtenido con este microscopio variaba
entre 3x y 9x según cual fuera la distancia entre las lentes.
Aunque este tipo de microscopio es muy diferente a los usados actualmente, su estructura básica
es la misma, con una lente actuando como objetivo y la otra como ocular. Este instrumento demostró
que la imagen aumentada con una sola lente puede ser a la vez aumentada con una segunda lente.
Se puede considerar que la verdadera historia del microscopio empieza con la invención del
microscopio compuesto, es decir, con el invento de Zacharias Janssen en 1590.
(Mundo microscopio, s.f.).

El descubrimiento de este instrumento fue importante, principalmente por sus aportes en la


investigación como se presenta en los siguientes casos:

 En 1665 apareció la investigación realizada por William Harvey sobre la circulación sanguínea,
al analizar los capilares sanguíneos.
 En 1667, Marcello Malpighi, biólogo italiano, fue el primer investigador en estudiar tejidos vivos
gracias a la observación a través del microscopio.
 El holandés Antonie van Leeuwenhoek, utilizó microscopios para describir por primera vez
diversos organismos, protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. Se lo puede
considerar como el fundador de la ciencia que estudia el comportamiento de las bacterias, dio
origen a la bacteriología.
 En 1828, W. Nicol desarrolla la microscopía
con luz polarizada.
 Robert Koch identifica, en el año 1880, los
agentes bacterianos del cólera y de la tuberculosis
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y logra colorearlos con tinte de anilina. 14 pt
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 En 1908, Köhler desarrolla el microscopio de fluorescencia.
 Lebedeff fabrica el primer microscopio de interferencia en 1930. Dos años después, Zernike
diseña el microscopio de contraste de fases.
 El microscopio electrónico, obra de E. Ruska y M. Knoll, aparece en el año 1937. Esto posibilitó
que se logre un aumento de 100.000X, un salto inmenso para la técnica.
 G. Binnig y H. Rohrer inventan el microscopio de efecto túnel en 1981, que permite aumentos
de cien millones de veces, revelando la estructura atómica de las partículas. Cinco años
después, estos científicos se hicieron merecedores del premio Nobel de Física.

Se ha avanzado técnicamente incrementando el nivel de ampliación de los microscopios, y esto a


su vez posibilitando que la ciencia médica realice
investigaciones cada vez más exhaustivas acerca del
comportamiento de microorganismos y estudio
de células. El avance gracias a la implementación y
desarrollo del microscopio fue enorme en el siglo
XVIII. (Raffino., 2019)

Las observaciones microscópicas de Robert


i/ microscopio usado por Hooke iiIlustración de un piojo
Hooke realizada por Robert Hooke

Uno de los primeros científicos en utilizar el microscopio con fines científicos fue Robert Hooke,
quien en 1665 publicó una de sus obras más importantes titulada Micrographia.

El libro Micrographia presentó ilustraciones de las observaciones realizadas por Robert Hooke
mediante un microscopio compuesto, incluyendo insectos, plantas, etc. que por primera vez se
pudieron ver a gran escala.
Una de las aportaciones más importantes de Robert Hooke fue introducir la palabra célula para
describir las estructuras que observó en una muestra de corcho.

Algunas de las ilustraciones incluidas en Micrographia alcanzaban un aumento de hasta 50x. Hooke Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
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introdujo la iluminación de las muestras mediante una vela. Esto permitió observar las muestras con
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mejor claridad y es equivalente al sistema utilizado actualmente mediante un foco y un condensador
de luz.

El microscopio de Antonie van Leeuwenhoek

Antonie van Leeuwenhoek (Delft, 1632-1723) contribuyo a la microscopía al


descubrir una nueva técnica de fabricación de lentes que le permitió alcanzar
aumentos de hasta 200x.
Antonie van Leeuwenhoek trabajaba inicialmente como comerciante de telas. Su interés por la
microscopía empezó con el objetivo de fabricar mejores lentes para analizar la calidad de las telas
con las que comerciaba.
Los microscopios construidos por Antonie van Leeuwenhoek eran microscopios simples (una sola
lente). Su avanzada técnica de fabricación le permitía obtener lentes de gran aumento a la vez que
evitaba las aberraciones de la luz que tenían todos los microscopios compuestos del momento.

Antonie van Leeuwenhoek mantuvo en secreto sus técnicas de fabricación de lentes, pero no sus
descubrimientos. Durante años publicó los resultados de sus observaciones que incluyeron todo tipo
de fenómenos microscópicos. Algunas de las observaciones más importantes que documentó
incluyen las fibras musculares, distintos tipos de bacterias y los glóbulos rojos de la sangre. Su
contribución a la ciencia hizo que todavía hoy se le conozca como el padre de la microbiología.

Las aberraciones de los primeros microscopios

Las aberraciones ópticas aparecen debido a


características no ideales de las lentes y a la naturaleza de la luz.
Esto se traducía en una pérdida importante de nitidez en las
imágenes observadas y limitó la popularidad del
microscopio entre los científicos.
Los dos tipos de aberración que tenían un mayor efecto en los primeros microscopios eran la
aberración cromática y la aberración esférica. Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
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iv / Aberración esférica: Los rayos incidentes
convergen en puntos distintos debido a la
curvatura de la lente

 Corrección de aberración cromática: se dio hasta 1730 donde el inventor Chester Moore Hall
encontró una combinación de lentes que corregía significativamente la aberración cromática. Su
descubrimiento pudo ser directamente aplicado a otros instrumentos ópticos como los
binoculares. Pocos años más tarde fue aplicado al microscopio y se empezaron a construir los
primeros objetivos libres de aberración cromática.

 Corrección aberración esférica: en 1830, Joseph Jackson Lister perfeccionó la idea de Chester
Moore Hall para corregir además la aberración esférica. Joseph Jackson Lister demostró que
esta aberración podía ser corregida variando la distancia entre lentes.

Estas dos aportaciones, resultaron en lentes acromáticas de alta calidad. Gracias a estas lentes fue posible
construir microscopios que evitaban las aberraciones ópticas más importantes. Esto contribuyó a cambiar
la percepción que se tenía del microscopio y lo convirtió en un instrumento fiable para la investigación
científica, especialmente en el campo de la medicina. (Mundo microscopio,
s.f.)

iii/ Aberración cromática: La rayos de luz de


distinta longitud de onda (color) convergen en Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
puntos distintos. 14 pt
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Fundamento teórico

3. Partes de un microscopio

4. Con un sistema de giro, el revólver permite el intercambio de los lentes.

Las diferentes partes que componen un microscopio comúnmente están divididas en sistema
mecánico y sistema óptico, son:

Sistema mecánico

Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales que dan estabilidad al
microscopio y mantienen los elementos ópticos correctamente alineados.

 Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre la cual se
montan el resto de elementos. Acostumbra a ser la parte más pesante para proporcionar
suficiente equilibrio y estabilidad al microscopio.
 Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del microscopio
que conecta todas sus partes... Tanto las lentes del objetivo como del ocular se encuentran
también conectadas al brazo del telescopio.
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 Platina: Esta es la superficie donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su posición 14 pt

vertical con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos tornillos para Formatted: Font color: Auto
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generar una imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el centro a través del cual se ilumina
la muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas a la platina que permiten mantener la muestra
en posición fija.
 Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha colocado
sobre la platina.
 Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra respecto
el objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es ajustado
posteriormente mediante el tornillo micrométrico
 Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más preciso
de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión el
desplazamiento vertical de la platina.
 Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada objetivo
proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el más adecuado a cada
aplicación.
 Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular con
los objetivos.

Sistema óptico

El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la luz en las
direcciones necesarias y así acabar generando una imagen aumentada de la muestra.

 Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia la
muestra. La posición del foco en el microscopio depende de si se trata de un microscopio de
luz transmitida o de luz reflejada.
 Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz
provenientes del foco a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes del foco son
divergentes. El condensador consiste en un seguido de lentes que cambian la dirección de
estos rayos de modo que pasen a ser paralelos o incluso convergentes.
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 Diafragma: El diafragma es una pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a la
muestra. Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina. El punto óptimo del
diafragma depende del tipo de muestra observada y de su transparencia.
 Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra y
que producen la primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una distancia focal muy
corta. En los microscopios modernos distintos objetivos están montados en el revólver. Este
permite seleccionar el objetivo adecuado para el aumento deseado. El aumento del objetivo
junto con su apertura numérica suele estar escrito en su parte lateral.
 Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de
imagen. El ocular amplio la imagen que ha sido previamente aumentada mediante el objetivo.
En general, el aumento aportado por el ocular es inferior al del objetivo. En función del número
de oculares se puede distinguir entre microscopios monoculares, binoculares e incluso trino
culares. La combinación de objetivo y ocular determina el aumento total del
microscopio.

v: microscopio trinocular= dos lentes


vi: microscopio compuesto oculares para el observador y un lente
monocular vii: microscopio compuesto para cámara (ubicado encima de los
binocular otros lentes)
viiiviiivii: microscopio Formatted: Font: (Default) Arial
compuesto binocular

 Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para corregir la
dirección de la luz. (Mundo Microscopio, s.f.)

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Tipos de microscopios

Existen diversos tipos de microscopios que fueron utilizados a través de la historia, y también existen
actualmente microscopios diseñados con un propósito en especial, algunos de estos son:

 Microscopio óptico: Utiliza luz visible y un sistema de lentes ópticas para aumentar imágenes
de pequeñas estructuras. Por tal motivo, también es conocido como microscopio de luz o
microscopio de campo claro. (Bioenciclopedia, s.f.)

 Microscopio simple: Este tipo de microscopio dispone de una única lente y es más
habitualmente conocido como lupa. Con un microscopio simple pueden conseguirse grandes
aumentos. (Mundo Microscopio, s.f.)
 Microscopio compuesto: Este tipo de microscopio es aquél que dispone de por lo menos dos
lentes. Este es el caso más habitual en todos los microscopios modernos. Normalmente los
microscopios disponen de distintas lentes tanto en el objetivo como en el ocular para corregir las
aberraciones ópticas y alcanzar una imagen con buena calidad. (Mundo Microscopio, s.f.)
 Microscopio de luz ultravioleta: Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como
el nombre indica, con luz ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que
la luz visible utilizada en los microscopios ópticos. La ventaja principal de utilizar esta técnica es
que puede alcanzarse una resolución mejor que con luz visible. Además, el contraste obtenido
en la muestra es distinto que en los microscopios ópticos. (Mundo Microscopio, s.f.)
 Microscopio de fluorescencia: Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan
las propiedades de fluorescencia para generar una imagen de la muestra. Este microscopio
permite observar sustancias que emiten luz propia cuando son iluminadas con una longitud de
onda determinada. Para ello la muestra es habitualmente iluminada con una lámpara xenón o
con una lámpara de vapor de mercurio. (Mundo Microscopio, s.f.)

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 Microscopio petrográfico: También conocido como microscopio petrográfico. Este 14 pt

microscopio es en realidad un tipo de microscopio óptico al que se la han añadido Formatted: Font color: Auto
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dos polarizadores. Esto significa que la onda de luz utilizada para observar la muestra tiene una
dirección de oscilación concreta. Este tipo de microscopio es muy útil para observar estructuras
cristalinas de rocas y minerales. (Mundo Microscopio, s.f.)

 Microscopio en campo oscuro: Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra


oblicuamente. De este modo los rayos de luz que llegan al objetivo no provienen directamente
del foco de luz sino que han sido dispersados primero por la muestra. Esta técnica permite ver
muestras que de otro modo no serían visibles debido a su transparencia. (Mundo Microscopio,
s.f.)

 Microscopio de contraste de fase: en este La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del
medio de propagación. Esta propiedad es utilizada en el microscopio de contraste de fases ya
que la luz atraviesa la muestra con distintas velocidades en distintas secciones. (Mundo
Microscopio, s.f.)
 Microscopio de luz polarizada: Es un microscopio de campo claro al cual se le adicionan filtros
que modifican la luz. También se denomina microscopio petrográfico o metalúrgico por su uso
inicial en el estudio de minerales, sin embargo su aplicación se ha extendido al campo de la
biología, medicina, química y muchas otras disciplinas.
 Microscopio confocal: Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar
la muestra de forma global se ilumina punto a punto de forma sucesiva y se reconstruye la imagen
al final del proceso. (Mundo Microscopio, s.f.)
 Microscopio electrónico: En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino
que se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra dentro de una cámara de
vacío. Su principio de funcionamiento se basa siempre en capturar los electrones dispersados u
omitidos por la muestra y así poder reconstruir una imagen. (Mundo Microscopio, s.f.)

o Microscopio electrónico de transmisión: Permite observar detalles internos de la


estructuras a través de una visión bidimensional. Posee tres sistemas esenciales: un
cañón de electrones, un generador de imágenes y un sistema de grabación de
imágenes. En este instrumento se aprovecha la colisión y la dispersión provocada entre
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un haz de electrones con una muestra preparada, lo que brinda información de acuerdo
a la orientación y estructura de los cristales presentes (Bioenciclopedia, s.f.)

o Microscopio electrónico de barrido: En este tipo de instrumento rebotan electrones


especímenes recubiertos con metales que proporcionan imágenes tridimensionales. Aquí
los electrones interactúan con los átomos de la muestra, produciendo señales que
contienen información sobre la topografía de la superficie y la composición de la muestra.
(Bioenciclopedia, s.f.)
 Microscopio de sonda de barrido: es aquel que tiene el transmisor en la parte exequimal del
lente (Objetivo 4x). Este microscopio electrónico utiliza una sonda que recorre la superficie del
objeto a estudiar. (Ecured, s.f.)

 Microscopio de efecto túnel: Este instrumento fue el primero en generar imágenes de


superficies a nivel atómico, con lo que dio origen a toda una familia de microscopios de sonda
local. Una punta metálica y afilada se acerca a una superficie, lo que genera una tensión entre
esta punta y la muestra a analizar. Debido a esta distancia interatómica, se establece una
corriente, cuya intensidad es sensible a la distancia punta-muestra. (Bioenciclopedia, s.f.)

 Microscopio de fuerza atómica: Es un tipo de microscopía de sonda de barrido de muy alta


resolución, con capacidad para detectar fuerzas del orden de los nanonewtons. Es requerido
para el desarrollo de la nanotecnología; es decir, el estudio de la materia a escala atómica,
molecular y supramolecular. (Bioenciclopedia, s.f.)

 Microscopio de luz transmitida


En este tipo de microscopio la luz atraviesa la muestra. Para esta clase de microscopios es
necesario preparar la muestra cortándola en láminas muy finas. La muestra se ilumina desde debajo
la platina. La preparación de la muestra hace que esta sea semitransparente y parte de la luz pueda
atravesarla y llegar al objetivo para ser observada posteriormente a través del ocular. (Mundo
Microscopio, s.f.)

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 Microscopio de luz reflejada: En este caso la luz ilumina la muestra y parte de esta es reflejada 14 pt

y dirigida al objetivo. De este modo es necesario iluminar la muestra desde la parte superior de Formatted: Font color: Auto
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la platina. Este tipo de microscopía es utilizada para examinar materiales opacos como pueden
ser estructuras metálicas, materiales cerámicos, etc. (Mundo Microscopio, s.f.)

 Microscopio Invertido: Este microscopio que se inventó en 1850, lleva su fuente de luz y
condensador en la parte superior por encima de la platina, apuntando hacia abajo. Mientras que
los objetivos y la torreta están debajo del escenario apuntando hacia arriba. Se utiliza para mirar
células y organismos vivos en el fondo de un recipiente grande. (Bioenciclopedia, s.f.)

Sistemas ópticos: el microscopio

En óptica geométrica se denomina sistema óptico a un conjunto de superficies que separan


medios con distintos índices de refracción.

Estas superficies pueden ser refractantes o espejos, pero no tienen por qué ser de revolución ni
presentar ningún tipo de alineación. Con frecuencia nos encontramos con sistemas formados por
superficies esféricas, con sus centros de curvatura situados sobre una misma recta llamada eje del
sistema o eje óptico. (Wikipedia, s.f.)

El microscopio cuenta con dos lentes convergentes una en le ocular y la otra en el objetivo, teniendo
en cuenta esto las lentes convergentes son más gruesas por el centro que por el borde, y concentran
(hacen converger) en un punto los rayos de luz que las atraviesan. A este punto se le llama foco (F)
y la separación entre él y la lente se conoce como distancia focal (f).

Existen principalmente tres tipos de lentes convergentes:

 Biconvexas: Tienen dos superficies convexas


Planoconvexas: Tienen una superficie plana y otra convexa

Cóncavoconvexas (o menisco
convergente): Tienen una superficie ligeramente Field Code Changed
cóncava y otra convexa (Educaplu.org, s.f.) Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
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Aberraciones en el microscopio

Hay varios tipos de aberraciones:


 De esfericidad, relacionadas con la forma esférica de la lente: Se producen por falta de
convergencia de las ondas luminosas que pasan por la periferia de la lente cuando no son
enfocadas en el mismo punto que aquellas ondas que
pasan por el centro, las cuales son refractadas
ligeramente; mientras que las que inciden en la periferia
son refractadas en mayor grado y convergen en
diferentes puntos focales. (LA MICROSCOPÍA:, s.f.)

Causas:
 Daños en el objetivo, grasa de los dedos y restos de aceite de inmersión en la lente
frontal del objetivo.
 Cubreobjetos de espesor o índice de refracción inadecuado.
 Longitud de tubo incorrecta.
 Medio de montaje inadecuado.
 Espesor excesivo de la muestra.

 aberraciones geométricas: Incluyen una variedad de efectos, tales como:


 Astigmatismo: No se puede enfocar simultáneamente líneas verticales y horizontales.
 Coma: Se produce una degradación de la imagen de un punto, se ve similar a un cometa.
 Distorsión: Se manifiesta en la forma del objeto, afectando particularmente a los bordes. Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
El objeto se ve en forma de barril o de cojín. 14 pt
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 Curvatura del campo: El campo se ve con bordes curvos, deformando la imagen.

 Aberraciones cromáticas:
 Aberración cromática de posición: Los distintos colores o longitudes de onda de la luz
se enfocan a diferentes distancias de la lente. La imagen aparece rodeada de anillos con
variedad de colores según el enfoque.


 Aberración cromática de magnitud: Los rayos de luz de un determinado color se
proyectan con más aumentos que los rayos de luz de otro color. (Alicante, s.f.)

Tipos de objetivos:
Tomando en cuenta el grado de corrección de las aberraciones hay dos categorías de objetivos para
el microscopio, los objetivos acromáticos y los objetivos apocromáticos. En cada categoría se
distinguen aún dos grupos, los objetivos secos y los objetivos de inmersión. Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
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 Objetivos acromáticos: corrección cromática para la luz azul y roja. Corrección de
esfericidad para el verde. Dan mejores resultados con filtro de luz de color verde y son ideales
para microfotografía blanco y negro. Se asume que un objetivo es acromático cuando no
posee ninguna denominación.
 Objetivos semi-apocromáticos: Elaborados a partir de cristales de fluorita. Corrigen para el
azul, el rojo y en cierto grado para el verde. La corrección de esfericidad es para dos colores, el
verde y el azul. Dan buenos resultados con luz blanca y están mejor diseñados para la
microfotografía en colores.
 Objetivos apocromáticos: más alto nivel de corrección de aberraciones, son muy costosos.
Presentan corrección cromática para cuatro colores (azul oscuro, azul, rojo y verde); corrección
de esfericidad para dos o tres colores. Son los mejores objetivos para microfotografía y video a
color. Debido a su alto grado de corrección, estos objetivos poseen mayores aperturas numéricas
que los acromáticos y las fluoritas.

 Objetivos secos y objetivos de inmersión: Estos objetivos difieren entre sí por la naturaleza
del medio interpuesto entre el cubre-objeto de la lámina histológica y la lente frontal del objetivo.

o Objetivos secos: el medio interpuesto es el aire cuyo índice de refracción (n=1) es muy
diferente del índice del vidrio porta y cubre-objeto (n=1,5).
o Objetivos de inmersión: el medio que separa al cubre-objeto de la lente frontal del
objetivo es un líquido cuyo índice de refracción es lo más próximo al del vidrio. Este líquido
puede ser agua destilada (n=1,33) o aceite de cedro, que posee un índice de refracción
(n=1,515) casi idéntico al del vidrio.

La ventaja de los objetivos de inmersión consiste en la disminución o eliminación de la refracción de


los rayos luminosos entre el aire y el objetivo, en consecuencia la luminosidad de la imagen está
aumentada, mientras que en los objetivos secos, está disminuida. Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
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(Practica 1: El Micoscopio Optico. Observacion microscopica de los organismos, s.f.)

Tipos de oculares
 Oculares de Huygens: Empleados con los objetivos acromáticos y formados por dos lentes
plano-convexas cuya convexidad está dirigida hacia el objetivo y el diafragma se ubica entre
ambas (También denominado ocular negativo porque la imagen se forma entre las dos lentes).
 Oculares de Ramsden: Conocido como ocular positivo, formado por varias lentes unidas entre
sí y colocadas por encima del diafragma.
 Oculares compensadores: Son oculares que corrigen la diferencia de aumento para los
diversos colores (diferencia cromática de aumento) que se aprecia en los objetivos
apocromáticos.

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xixviii: características de los objetivos.
C Formatted: Caption, Centered, Line spacing: single
 Oculares de proyección: Posee una lente que permite ixx: Código de colores en objetivos
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microscópicos
la proyección de la imagen en una pantalla colocada a Formatted: Font: +Body (Calibri), 12 pt
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cierta distancia del ocular, ideal para dibujar o para exhibición.
Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
 Oculares aplanéticos: Tienen la propiedad de formar un campo perfectamente plano y el poder 14 pt
de resolución es igual tanto en el centro como en la periferia del campo óptico. Formatted: Font color: Auto
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 Oculares peri-planáticos: Aplanan la curvatura de campo que se produce con objetivos de
mayor aumento. Son semejantes a los oculares de tipo Huygens pero con doble lente ocular. (La
microscopia, s.f.)

Conceptos básicos en microscopia´


Otros conceptos importantes para comprender y manejar de forma óptima el microscopio son:
 Aumentos: el aumento es la proporción entre el tamaño de la imagen observada al microscopio
y el tamaño real del objeto:
A= Tamaño imagen _
______________1qqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqqq
q{}-

Tamaño objeto

Los aumentos no tienen unidades. Recuerde que el aumento total se calcula como :

AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular (La microscopia, s.f.) Formatted: Default Paragraph Font, Font: (Default)
+Body (Calibri), 12 pt, Italic, Font color: Auto, Pattern:
Clear
 Poder de resolución: es la capacidad de las lentes para mostrar separados, con nitidez dos
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Do not check
puntos situados muy próximos entre sí, este ayuda a determinar la capacidad para distinguir spelling or grammar

entre detalles finos de un espécimen. Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Normal, Centered, Space After: 12 pt,
 Límite de resolución: es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos del objeto para Pattern: Clear
que puedan visualizarse claramente separados.
 Poder de definición: consiste en la capacidad de dar imágenes nítidas en todo el campo de
visión, tanto en el centro como en la periferia.
 Profundidad de campo o poder de penetración: es el espesor de un micro preparado
aceptablemente nítido en un nivel de enfoque determinado. La profundidad de campo se
relaciona inversamente con los aumentos, es decir, que a menor aumento hay mayor profundidad
de campo, y a mayor aumento hay menor profundidad de campo.
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 Distancia de trabajo del objetivo: es la distancia entre la parte anterior de la lente del objetivo 14 pt
y el micro preparado observado, cuando este está enfocando correctamente. Formatted: Font color: Auto
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 Campo de visión: proporción del micro preparado que se observa en la imagen. Se expresa en
milímetros que se pueden ver en todo el campo de visión al observar por los oculares.
 Magnificación: se mide teniendo en cuenta la máxima agudeza visual conseguida y la
amplificación necesaria para realizar una actividad concreta.

 Tipos de magnificación: Existen cuatro posibilidades según el efecto que consiguen.


 Aumento del tamaño: La imagen retiniana depende del tamaño fuente. Si la
aumentamos, el usuario verá mejor ya que tendrá más células sensibles
estimuladas.
 Disminución de la distancia: Cuanto más cerca se encuentre un objeto, mayor
será su imagen retiniana y mejor se verá.
 Aumento angular: Es el efecto que se da en los telescopios, logrando una
gran magnificación. Están constituidos por un sistema óptico con varias lentes
capaces de cambiar la inclinación con la que incide la luz en ellos.
 Aumento por proyección: La magnificación se realiza proyectando una imagen
sobre una superficie mayor. Tal y como ocurre en las televisiones o en las
diapositivas. (Informacion de opticas, 2018) Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Do not check
spelling or grammar
Formatted: Font: Bold
 Apertura numérica. Es la capacidad de recoger luz de una lente. Para lentes secas su valor
máximo es de 1, pero por las limitaciones físicas de la calidad de las lentes, raras veces
sobrepasan el valor de 0,95. Cuanto mayor sea la apertura podremos conseguir mayor resolución
y brillo en la imagen. Estas propiedades son especialmente útiles en microscopia de
fluorescencia.
 Eficiencia cuántica: Es un índice que nos indica la sensibilidad a la luz de un dispositivo
electrónico de captura de fotones como un fotomultiplicador. Indica el porcentaje de los fotones
que consiguen arrancar un electrón y por tanto generar una corriente eléctrica detectable por el
sistema electrónico.
 Objetivos de inmersión. Son aquellos cuya apertura numérica es mayor de 1, en la práctica
son todos los de 100x, la mayoría de los de 60x y casi nunca los de 40x o menores. (Madrid, s.f.)
Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
14 pt
Formatted: Font color: Auto
Formatted: Font color: Auto

19
 Correcciones ópticas: Indicaciones
acerca del tipo de lentes utilizadas en el
objetivo para corregir las aberraciones ópticas.
 Longitud del tubo: Este número indica
la distancia en milímetros que debe
haber entre el objetivo y el ocular para que la
imagen se forme correctamente. El
símbolo infinito se utiliza para indicar que los rayos son completamente paralelos al salir del
objetivo.
 Espesor del cubreobjetos: Este número indica el espesor en milímetros del cubreobjetos que
debe utilizarse para minimizar las aberraciones ópticas.
 Código de color: Mediante un código de colores suele indicarse el aumento proporcionado por
el objetivo. La mayoría de los fabricantes siguen el estándar incluido en la siguiente sección de
este artículo. Adicionalmente, en el caso de los objetivos de inmersión, un segundo color indica
el medio de inmersión que debe utilizarse. (Mundo Microscopio, s.f.) Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Do not check
spelling or grammar, Border: : (No border)
Formatted: Border: : (No border)

Montaje en microscopio

Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),


14 pt
Formatted: Font color: Auto
Formatted: Font color: Auto

20
El montaje de las muestras en el microscopio es a menudo crucial para la visión exitosa. A estas
formas de montaje se les ha prestado mucha atención en los últimos dos siglos y es una zona muy
desarrollada con muchas técnicas especializadas y, a veces muy sofisticados.

 Montaje en seco: es el tipo más sencillo de montaje, el objetivo no es más que colocar en
la diapositiva la muestra a analizar. Un cubreobjetos se puede colocar en la parte superior
para proteger la muestra y el objetivo del microscopio. Se recomienda el uso de
portaobjetos estándar.
 En fresco o montaje temporal: En un montaje húmedo, la muestra se coloca en una gota
de agua u otro líquido contenido entre el portaobjetos y el cubreobjetos por la tensión
superficial. Este método se utiliza comúnmente para ver los organismos microscópicos que
crecen en el agua del estanque o de otros medios líquidos, especialmente cuando el
estudio de su movimiento y el comportamiento. En este tipo de montaje se recomienda el
portaobjetos con cavidades.
 Montaje preparado o montaje permanente: Para la investigación patológica y
biológicas, la muestra por lo general se somete a una preparación histológica compleja
que puede involucrar el corte en secciones muy finas con un micrótomo, que se fijan en la
superficie del portaobjetos, la eliminación de cualquier agua contenida en ella, la tinción
partes específicas del mismo, la limpieza para que sea transparente, e impregnando o
infiltrante con alguna sustancia sólida transparente. Para este tipo de montaje se requieren
portaobjetos tratados, ya sea con poli-lisina o con recubrimiento hidrofóbico. (Jazmin, 2014). Formatted: Font: 12 pt, Not Bold

 Tinción: Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para Formatted: Font: Not Bold, All caps

mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son


sustancias que usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en
tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de
microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y
examinar grandes cortes de tejido, poblaciones celulares o incluso para resaltar organelos
dentro de células individuales.

Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),


ESTEREOMICROSCOPIO 14 pt
Formatted: Font color: Auto
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21
Conocido también como microscopio de disección, es el microscopio óptico más simple. Tienen
pareja de oculares y objetivos que funcionan simultáneamente. La imagen formada por un
estereomicroscopio es virtual, amplificada y derecha y la muestra se observa en relieve (visión
estereoscópica). La distancia de trabajo es relativamente grande, 3.5 a 20 cm aprox., lo que
permite un espacio de trabajo amplio entre el objetivo y la muestra.

  Microscopio de Campo
Microscopio óptico Tamaño relativo de estructuras Formatted: Centered
oscuro Formatted Table
microscópicas
Formatted: Centered, Indent: Left: -0.05", No bullets
or numbering
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt


Formatted: Centered
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Centered, Indent: Left: -0.05", No bullets
or numbering



microscopio de luz
ultravioleta Microscopio invertido Objetivo seco Formatted: Centered, Space Before: 0 pt, After: 8 pt,
Line spacing: Multiple 1.08 li, No bullets or
numbering, Pattern: Clear
Formatted: Centered, Space Before: 0 pt, After: 8 pt,
Line spacing: Multiple 1.08 li, No bullets or
numbering, Pattern: Clear

Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),


14 pt
Formatted: Font color: Auto
Formatted: Font color: Auto

22
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Centered
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Centered
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Centered, Indent: Left: -0.05", No bullets
 or numbering

 Objetivo de inmersión microscopio de polarización
Microscopio de fluorescencia
luz reflejada y transmitida
Formatted: Left, Indent: Left: -0.05", No bullets or
numbering

Formatted: Heading 3, Space After: 0 pt, Line spacing:


1.5 lines, Font Alignment: Auto
Formatted: Font: Not Bold, All caps
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Font color:
Auto, All caps
Formatted: Heading 3, Indent: Left: 0.5", Space After:
0 pt, Line spacing: 1.5 lines, Font Alignment: Auto

Manejo microscopio Formatted: Font: 14 pt, Bold

1. Pon el objetivo de menor aumento y, mirando a través del ocular, coloca el espejo, el Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
diafragma y el condensador para que se logre la máxima iluminación. El espacio iluminado
que se observa a través del ocular se llama campo.
2. Coloca la preparación en la platina, de forma que el material a observar quede iluminado. Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

3. Mirando por fuera acerca al máximo el objetivo a la preparación, para ello utiliza el tornillo Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
macro métrico. (Nunca se debe acercar el objetivo a la preparación mirando por el ocular, Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

pues se puede romper la preparación o el objetivo)


4. Mirando por el ocular, mueve el macro métrico muy despacio de forma que la preparación se Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
aleje del objetivo hasta conseguir una buena visión. Una vez logrado el enfoque, precisa lo Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

más posible con el tornillo micrométrico. Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

5. Para conseguir una iluminación óptima utiliza el condensador y el diafragma. Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
6. Mueve la preparación, o la platina si es móvil, y busca una buena zona de la preparación.
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7. Si quieres más aumentos, aleja el objetivo de la preparación con el macro métrico y coloca el
objetivo siguiente en aumentos. Repite los pasos desde el 3 en adelante.
8. Para utilizar el objetivo de inmersión, hay que poner una gota de aceite de inmersión sobre la
preparación, poner el objetivo y bajarlo hasta que la lente esté en contacto con el aceite, luego
hay que enfocar alejando. (htt) Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Do not check
spelling or grammar
Formatted: Font: (Default) Arial

    Formatted: Left, Space Before: 0 pt, After: 8 pt, Line


spacing: Multiple 1.08 li, No bullets or numbering,
Pattern: Clear
Formatted Table

   

   

Normas para el cuidado y uso del microscopio y del estereomicroscopio

A. Trasporte y limpieza
 El transporte del microscopio se tiene que realizar con las dos manos, una lo sujeta por el
Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
brazo y la otra por la base, manteniéndolo siempre en posición vertical. Nunca debe 14 pt

inclinarse ni darse la vuelta. Formatted: Font color: Auto


Formatted: Font color: Auto

24
 Cuando el microscopio esté en la mesa, no debe moverse hasta que termine la práctica.
Se moverá el observador, nunca el aparato.
 El foco de iluminación estará encendido solamente mientras dure la observación, evitando
así el excesivo recalentamiento de la lámpara.
 Las lentes deben limpiarse con frecuencia con un trapo suave. Es imprescindible eliminar
el aceite del objetivo de inmersión antes de que se seque.
 Cuando no se utiliza debe protegerse con una funda.
 Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída de los oculares o de la fuente
de luz.
 El aparato debe apoyarse hacia el centro de la mesa.
 No mover el microscopio hasta terminada la práctica.
 Nunca se deben de poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo. Si alguna lente
se ensucia, esta se debe limpiar con papel de arroz y xilol.
 No debe sacar de su sitio ni el ocular ni los objetivos
 Al finalizar la practica verifique que el objetivo de inmersión no tenga aceite, de ser lo
contario proceder a limpiar.

B. Ajustes al aparato antes de hacer las observaciones


 Mover los tubos oculares para encontrar la distancia interpupilar adecuada para cada
observador.
 Enfocar la muestra con el ocular fijo y luego con el foco ajustable del otro ocular.

C. Observación de muestras
Microscopio
 Asegurarse que la lámina portaobjetos este seca antes de colocarla sobre la platina.
 Al inicio de la observación escoger el objetivo de menor aumento.
 Al enfocar, evitar que el objetivo de mayor aumento choque con el micro preparado. Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
14 pt
 Cuando se cambie de observador se mueve el observador no el aparato.
Formatted: Font color: Auto
Formatted: Font color: Auto

25
Estereomicroscopio

 Colocar en la platina la placa de contraste adecuada según la muestra que se vaya a


observar.

Ambos aparatos

 Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del aparato (objetivos, tornillos
de ajuste de enfoque…).

D. Uso cómodo de los aparatos


 Inclinar la cabeza lo menos posible.
 Inclinar la parte superior de la espalda lo menos posible.
 Evitar posiciones inconfortables de brazos y manos.
 Evitar movimientos repetitivos.

E. Problemas más corriente de los aparatos


 Aparecen burbujas de aire. Poner una gota de agua en una esquina del cubre para
que entre por capilaridad o bien montar de nuevo el material con un poco más de agua.
 El campo de visión no aparece totalmente iluminado. Mirar si el objetivo está bien
colocado.
 El material se ve borroso y no se puede enfocar. Limpiar el objetivo.
 Se observan puntos oscuros en el campo de visión. La preparación puede estar sucia.
Moverla para comprobar si los puntos se mueven también.
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
 Puede estar sucio el ocular. Girar la lente para ver si se mueven las manchas. Limpiar
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Highlight
lo que corresponda.
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
 Aparecen huellas dactilares en el ocular. Limpiarlo. (PDF). Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Do not check
spelling or grammar
Formatted: Font: 14 pt, Bold
F. Otros instrumentos para montajes en microscopio. Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),
14 pt
Formatted: Font color: Auto
Formatted: Font color: Auto

26
 Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada plana de vidrio de diferentes
dimensiones (típicamente 75 por 25 mm y aproximadamente 1 mm de espesor), se
utiliza para fijar muestras que posteriormente serán examinadas con un microscopio.

 El cubreobjetos es una fina hoja de material transparente (normalmente 20 mm x 20 Formatted: Font: 12 pt

mm) o rectangular (de 20 mm x 40 mm comúnmente). Se coloca sobre un objeto que Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 +
Aligned at: 0.75" + Indent at: 1"
va a ser observado bajo microscopio, el cual se suele encontrar sobre un portaobjetos, Formatted: Font: 12 pt, Font color: Auto
se suele usar en campos como la química y la biología Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Font: 12 pt, Font color: Auto
 Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

G. Reglas de bioseguridad en el laboratorio Formatted: Font: 12 pt, Font color: Auto


Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
 Usar en el área de trabajo los elementos de protección necesarios.
Formatted: Font: 12 pt, Font color: Auto
 Lavarse las manos antes de empezar y concluir la práctica.
 Las mesas de trabajo debe permanecer libre de todo aquello que no sea esencial para
la práctica.
 Mantener el sitio de trabajo limpio para disminuir riesgo de contaminación.
 No consumir alimentos ni fumar dentro del laboratorio.
 Seguir las instrucciones del docente para la manipulación de los elementos del
laboratorio.

Formatted: Font: 14 pt, Bold, Font color: Auto


Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li, Numbered +
Level: 1 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 +
Alignment: Left + Aligned at: 0.2" + Indent at: 0.45"
Formatted: Font: 10 pt, Not Bold
Formatted: Indent: Left: 0.45", Line spacing: Multiple
1.15 li
Bibliografía Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li, Numbered +
1. (s.f.). Obtenido de La microscopia: Level: 1 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 +
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%20de%20observaci%F3n.%20%20Microscopio.pdf Formatted: Font color: Auto
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Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li

Formatted: Font: (Default) +Headings (Calibri Light),


14 pt
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Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
H. Diagrama de flujo: Tipos de montajes Formatted ...
Formatted ...

MICROSCOPIO Formatted ...


Propiedades Formatted ...
 Montaje en seco
Formatted ...
  En fresco o montaje
Instrumento para la
temporal Formatted ...
observación de objetos
 Resolución  Montaje preparado o Formatted
pequeños ...
 Magnificación montaje
Formatted ...
 Aumento  Tinción
 Poder de resolución Formatted ...
 Poder de definición Partes microscopio Formatted ...
Normas para cuidado y
 Profundidad de campo
uso del microscopio y Formatted ...
 Distancia de trabajo del
estereomicroscopio. Formatted
objetivo ...
 Base o pie
 Campo de visión Formatted ...
 Brazo
 Apertura numérica  Platina Ver páginas 23, 24, 25 Formatted ...
 Eficiencia cuántica  Pinzas
 Código de color Formatted ...
 Tornillo macrométrico
 Correcciones ópticas  Tornillo micrométrico Formatted ...
  Revólver Tipos de microscopio y
Formatted ...
 Tubo aberraciones ópticas
 Foco o fuente de luz Formatted ...
 Condensador Formatted ...
Oculares
 Diafragma Páginas 10-15 Formatted ...
 Objetivo
Tipos Formatted ...
 Ocular Formatted ...
 Oculares de Huygens
Formatted ...
 Oculares de Ramsden
Objetivos
 Oculares compensadores Formatted ...
 Oculares de proyección
Tipos Formatted ...
 Oculares aplanéticos
 Oculares peri-planáticos Formatted ...
 Objetivos acromáticos
 Objetivos semi-apocromáticos Formatted ...
 Objetivos apocromáticos Formatted ...
 Objetivos secos
 Objetivos de inmersión Formatted ...
Formatted ...
Código de colores en Formatted ...
objetivos Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
29 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
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Formatted ...
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