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EXTRACCIÓN LÍQUIDO - LÍQUIDO

FAJARDO MUÑOZ ANGELA SOFÍA (219095110)


JIMENEZ ROMERO ANGIE DANIELA (219095147)
LOPEZ ESTRADA JESSICA NATHALIA (219095156)
Estudiantes del Primer Semestre del Programa de Biología
Universidad de Nariño, San Juan de Pasto, Colombia
Junio de 2019

RESUMEN

Palabras clave:

disolvente contenido en el recipiente (cromatografía


ascendente sobre papel), este desarrollo es muy
INTRODUCCIÓN importante que ocurra en una atmósfera saturada de
La cromatografía puede definirse como la separación de vapores del disolvente, de otra forma el disolvente se
una mezcla de moléculas por distribución entre dos o más evaporaría del papel antes de ser reemplazado por la
fases, una de las fases es esencialmente bidimensional y acción de capilaridad, y la separación de los componentes
la fase restante, normalmente la principal está en contacto no se conseguiría. (1,3)
con ella moviéndose a contracorriente. Existen varios La técnica de cromatografía de papel es muy eficaz para
tipos de cromatografía, dependiendo del estado físico de separar pequeñas cantidades de materiales solubles en
las fases involucradas; la llamada cromatografía de agua, tales como aminoácidos, ácidos nucleicos y
partición consiste en el paso de una fase líquida móvil por azúcares. Casi todas sus aplicaciones se emplean
encima de otra fase líquida insoluble en la móvil y ampliamente en análisis biológicos y médicos. (2,3)
estacionaria en la superficie de un soporte sólido. (1) Un Su utilidad en el terreno de la química biológica, radica
ejemplo de este tipo de cromatografía es la que se realiza en que, al ser un método de análisis, preciso y muy
sobre papel, en esta se usa papel filtro como adsorbente sensible, ha permitido la separación de muchos cuerpos.
o fase sólida estacionaria y una fase orgánica móvil. En próximos unos a otros, constitutivos de las proteínas, de
esta cromatografía, la celulosa se ha impregnado con una los azúcares, de los nucleoproteidos, etc., lo cual informa,
fase inmóvil, generalmente agua, cuando la fase orgánica no solamente sobre su constitución química propiamente
móvil pasa sobre esta fase acuosa estacionaria, el dicha, sino que permite seguir sus transformaciones en
compuesto problema se reparte entre ambas fases. Un los organismos vivos, es decir, conocer mejor su
componente de la mezcla que tenga una significativa metabolismo. (4)
afinidad por el agua, permanecerá más tiempo en la capa Este procedimiento se emplea también para el control de
acuosa inmóvil y no emigrara tan rápido como un síntesis y de preparaciones, en particular de la penicilina
componente con poca afinidad por el agua; su y la estreptomicina. Por ejemplo, Gooval y Levi separan
fundamento no es estrictamente de adsorción, sino más las penicilinas por cromatografía en papel impregnado de
bien una combinación de absorción y reparto, el reparto un tampón de fosfato de pH 6'7 empleando como
ocurre entre el agua que hidrata la celulosa y la fase móvil disolvente el éter etílico saturado de agua. Las tiras de
orgánica (1,2). papel filtro se colocan luego sobre agar sembrado con un
Es importante seleccionar el sistema de disolventes para microorganismo sensible a la penicilina y se identifica
la cromatografía sobre papel, que en la mayoría de los ésta al observarse una inhibición de crecimiento; por este
casos contiene algo de agua. El desarrollo del procedimiento se ha podido averiguar que hay ocho
cromatograma se consigue suspendiendo el papel de penicilinas distintas. (4)
modo que su extremo inferior se introduzca en el
Los métodos cromatográficos han permitido progresos En la tabla 5.1 se reportan los datos de los valores Rf
muy considerables en la resolución de problemas obtenidos y los valores Rf proporcionados por el
analíticos delicados tanto en química mineral como en profesor.
química orgánica y biológica; parece ser que, en este Pigmento Rf Rf obtenido
último terreno, los resultados más sensacionales los ha proporcionado
dado principalmente la cromatografía en papel por su Clorofila a 0,40 0.40
sensibilidad y su finura. (4) Clorofila b 0,46 0.54
Violaxantina 0,56 0.63
MATERIALES Y MÉTODOS Lutenina 0,76 0.77
Inicialmente se lavaron y secaron las hojas de acelga, Β-caroteno y α- 0,99 0.93
luego se retiraron las nervaduras, se cortó en pequeños caroteno
trozos hasta lograr 2 gramos y se los depositó en un Los pigmentos fotosintéticos están representados por
mortero. Seguidamente se maceró durante pocos minutos clorofilas a y b, y un amplio grupo de sustancias
con 2 gramos de Na2SO4 y 4 gramos de arena lavada, se denominadas carotenoides. La clorofila es un complejo
pasó la pasta obtenida a un beaker de 50 mL, se agregó natural y en estructura posee un átomo central de Mg
15 mL de acetona, después se envolvió completamente contenido en un anillo de porfirina junto a un alcohol
con papel aluminio y se agitó durante 10 minutos. insaturado llamado fitol. La clorofila a y la clorofila b
Posteriormente se decantó el extracto en un beaker de 50 sólo difieren en el sustituyente del carbono C-3;
mL, se cubrió con papel aluminio dejando una pequeña mientras que la clorofila a, posee un grupo metilo (-
abertura en la parte superior y se dejó evaporar a CH3), la b dispone de un grupo aldehído (-CHO). Esta
temperatura ambiente hasta obtener la mitad del volumen diferencia se traduce en cambios de coloración y
inicial del extracto. Seguidamente se aseguró el papel además en una mayor polaridad de la b con respecto a la
cromatográfico por un extremo a la hendidura del corcho, a (5-6). Al cambiar el Mg SO4 por Na2SO4, no se
en el otro extremo se trazó una línea continua de 2cm y altera la función de este pues, tanto el Mg2SO4 como el
otra punteada de 1cm del borde, después se introdujo el Na2SO4 se emplean como agentes desecantes que
papel cromatográfico en la probeta y se determinó el deshidratan las hojas y así extraen la humedad de la
volumen de fase móvil hasta alcanzar el nivel de la línea muestra, aunque cabe resaltar que el sulfato de sodio es
punteada. Más adelante se sumergió un capilar fino de un desecante neutro, lento pero eficaz; esto conlleva a
vidrio en el extracto y se aplicó sobre el centro del punto que el proceso retarde un poco más de lo esperado;
de muestra; este se dejó secar y se repitió hasta formar además este compuesto protege electrostáticamente a la
una mancha nítida y bien definida de aproximadamente molécula de clorofila al mismo tiempo que absorbe el
0,5 cm de diámetro. Posteriormente se llenó la probeta agua optimizando el proceso de extracción de los
con la mezcla de hexano acetona (fase móvil), luego se pigmentos (6-7);. La acetona se emplea como un
introdujo el papel en la fase móvil hasta una altura de 1 disolvente debido a que los pigmentos clorofílicos son
cm del borde inferior, se ajustó el corcho y se selló insolubles en el solvente universal llamado agua; pero
herméticamente, más adelante se cubrió la cámara presentan afinidad química en solvente orgánicos como
fotográfica con una funda de papel aluminio, se esperó el la acetona; debido a que este solvente extrae todos los
tiempo necesario para que la fase móvil ascienda hasta 1 pigmentos de la hoja se le llama extractante; además la
cm bajo la base del corcho llevando consigo los característica más importante de un disolvente es su
pigmentos y los separe. Cuando esto ocurrió, se retiró el polaridad (3, 8), se elige la acetona porque además, de
papel de la probeta y se marcó el punto hasta el cual llegó acuerdo a la fuerza de elución de Snyder que, es una
la fase móvil, se secó el papel con movimientos medida cuantitativa de la polaridad de un disolvente o
pendulares, después se definió el contorno de las mezcla de disolventes y define su poder para eluir los
manchas obtenidas y se midió la longitud recorrida por analitos de una columna cuando se usa como fase móvil
cada sustancia desde el centro de la macha hasta el punto y, en cromatografía de adsorción, representa la energía
de aplicación de la mezcla, por último, se determinaron de adsorción de una molécula de eluyente por unidad de
los Rf de cada una de las sustancias separadas. área de adsorbente. Así en una tabla en orden creciente
en cuanto a elución, índice de polaridad y parámetros de
RESULTADOS Y ANÁLISIS selectividad la acetona se presenta como un compuesto
con un alto valor en cuanto a estas características en
relación a otros disolventes orgánicos (tabla 5.2) ( 9).
Tabla 5.2 Fuerza de elución, índice de polaridad y los valores Rf de los pigmentos vegetales no suelen ser
parámetros de selectividad de disolventes orgánicos. reproducibles; pero debido a que estos pigmentos han
(9) sido ampliamente estudiados, su orden relativo de
separación siempre es el mismo y puede identificarse
sin inconvenientes (6).

CONCLUSIONES
En esta práctica se cumplieron con los objetivos
propuestos pues se adquirió la experiencia en la
utilización de la cromatografía de papel para separación
e identificación de los componentes de una mezcla
compleja como es el caso de los pigmentos
fotosintéticos, de esta manera se identificaron gracias a
sus valores Rf siendo la clorofila el principal pigmento
presente debido a la nitidez de la mancha mostrada en el
papel cromatográfico.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Pasto, D; Johnson, C. Determinación de


estructuras orgánicas, España: Editorial Reverte,
1981, p. 24 ,37.
2. Durst, D; Gokel, G. Química orgánica
El proceso de aplicación de la muestra se repite varias experimental, Universidad de Puerto Rico:
veces para aumentar la concentración de sustancia a Editorial Reverté, 1985, p. 80.
separar; en este caso las diferencias de los valores Rf 3. Walton, H; Reyes, J; Análisis químico e
dados por el profesor y los obtenidos en el laboratorio instrumental moderno, Colorado: Editorial
pueden deberse a que una de las mayores causas de Reverté,1983, p. 323.
error y de resoluciones deficientes e indefinidas es la 4. Cordier, M; La cromatografía y sus aplicaciones
cantidad de muestra aplicada. Cuando se hace en exceso a la biología; Anales de medicina y cirugia, Vol.
o no se deja evaporar el disolvente se obtienen XXXIV, No. 105 – 106; marzo – abril,
separaciones con manchas superpuestas y, 5. O’ Connor, P; Química, experimentos y teorías,
generalmente, con colas difusas (6) esto se traduce en España: Ed. Reverte, 1977, p. 453.
un aumento o decrecimiento de la longitud de la 6. Torossi, F; Una experiencia sencilla con
muestra separada. fundamentos complejos: la separación de
Para dar explicación al porque se puede separar los pigmentos fotosintéticos mediante cromatografía
pigmentos por este procedimiento existe una teoría sobre papel, Aula y laboratorio de química, 2007,
denominada Teoría de saltos al azar que supone que las p. 45.
moléculas de un soluto se desplazan a lo largo de la 7. Gibaja, S; Pigmentos naturales; Editor UNMSM,
columna mediante una sucesión de movimientos o 1998, p. 260-263.
saltos al azar, hacia adelante y hacia atrás, simétricos, 8. Mancilla, C; Catrejon, C; Rosas, T; Blanco, E;
que ocurren con igual probabilidad y están controlados Extracción y separación de pigmentos vegetales;
por difusión (9). Universidad del valle de México: Campus
Las diferencias entre el valor Rf proporcionado por el Chapultepec.
profesor y el obtenido se dan debido a que, a pesar de 9. Polo, L; Fundamentos de cromatografía,
que este valor puede emplearse para la identificación de España: Ed. Dextra; p. 259.
los pigmentos, cabe resaltar que, está condicionado por
múltiples factores como la temperatura, características
del papel, cantidad de muestra aplicada, volatilidad y
composición del eluyente, entre otras. Por lo tanto, para
que este valor se pueda dar como una característica
propia e cada pigmento, es imprescindible especificar
todas las condiciones de la experiencia; es por esto que
ventaja de ser flexibles sin provocar disrupción de la fase
ANEXO 1: TRABAJO COMPLEMENTARIO estacionaria (2).

A. ¿En qué consiste la cromatografía de capa


delgada y la cromatografía de columna?

Cromatografía de capa fina


La cromatografía de capa fina es una aplicación especial
de cromatografía de adsorción, en la cual se utiliza una
capa fina de adsorbente soportada encima de una
superficie plana en lugar de una columna rellena de
adsorbente. La elución, o más propiamente el desarrollo
Figura 1.1 Montaje típico para cromatografía en capa fina
del cromatograma se consigue por el movimiento capilar
TLC: cámara cromatografía, placa cromatografía, fase
ascendente del disolvente a través de la capa fina de
móvil y fase estacionaria colocada sobre la placa de
adsorbente. Aunque se queda limitado a usar un solo
vidrio que actúa como soporte.
sistema de disolventes, no obstante, después de usar un
disolvente el cromatograma puede secarse y desarrollarse
Cromatografía en columna
de nuevo con un segundo sistema de disolventes bien en
Se emplea para la separación de mezclas y purificación
la misma dirección o en ángulo recto al primer desarrollo.
de sustancias a escala preparativa, como fase estacionaria
Para escoger el disolvente adecuado, se tendrá en cuenta
(adsorbente) se usa, generalmente, sílice o alúmina
el adsorbente y los productos a separar, es aconsejable
contenida en una columna. El disolvente pasa a través de
efectuar una serie de ensayos previos con varios
la columna por efecto de la gravedad o bien con
disolventes para determinar cuál será el que conduzca a
aplicación de presión. El tamaño de la columna está
una mejor separación. Para ellos se preparan una serie de
determinado por la cantidad de mezcla a separar, la
pequeñas placas y se les coloca la muestra
relación de masa de muestra de adsorbente es de 1: 100 a
desarrollándolas en los distintos solventes. La
1: 500. La velocidad a la cual el disolvente fluye a través
visualización del cromatograma, para localizar la
de la columna se denomina velocidad de elusión y es
posición de cada uno de los compuestos en la mezcla
importante en la efectividad de la separación. En general,
separada, dependerá de los tipos de moléculas presentes
el tiempo que la mezcla a separar permanece en la
en la muestra original, si todos los compuestos son
columna es directamente proporcional a la magnitud del
coloreados bastará la inspección ocular para distinguir las
equilibrio entre las fases estacionaria y móvil. Por lo
manchas.
tanto, compuestos similares pueden eventualmente
La cromatografía de capa fina puede emplearse también
separarse si permanecen en la columna el tiempo
para trabajos de tipo preparativo con cantidades
suficiente. El tiempo que una sustancia permanece en la
relativamente pequeñas, empleando capas de adsorbentes
columna, depende de la velocidad del flujo del disolvente
más gruesas (2000 µ) y aplicando la muestra en forma de
y esta es afectada, en gran medida por el
una banda lineal en vez de una mancha en forma circular.
“empaquetamiento” de la fase estacionaria dentro de la
Se desarrolla solo una estrecha sección del cromatograma
columna y, en menor medida, por la presión y la
con el uso de indicadores para localizar las bandas de las
temperatura del sistema. Si el flujo es muy lento, las
sustancias, se separan entonces las bandas de la placa y
sustancias de la mezcla, cuando están en el disolvente,
el producto del adsorbente (1).
pueden difundir más rápidamente que la velocidad a la
Este tipo de cromatografía consta de un sistema en dos
cual se mueven hacia abajo en la columna (3).
fases, una sólida (fase estacionaria) que se aplica en
forma de capa delgada, absorbente, usualmente entre
0.10 a 0.25mm de grueso para fines analíticos y en los
casos que se desea aislar un compuesto el grosor puede
variar entre 0.5 – 2.0 mm. Esta capa es fijada a una placa
o lamina firme de vidrio, aluminio o plástico que actúa
como soporte. A través de la fase estacionaria transita un
líquido o solvente (fase móvil o eluente). De los tres
materiales usados como soporte, el vidrio es el más
popular, aunque el aluminio o el plástico ofrecen la
3. Lamarque, A; Maestri, D. Fundamentos teórico-
prácticos de química orgánica. Primera edición.
Córdoba: Encuentro grupo editor. 2008. P. 63
4. Universidad autónoma de Madrid.
Cromatografía en capa fina. [En línea].
Disponible en:
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos
/practicas/actuales/guion-p6.pdf. [Ultimo
acceso: 27/06/2019]

Figura 1.2 Cromatografía en columna

B. ¿Cuáles son los principales solventes y mezcla


solventes utilizados en cromatografía?

Los dos adsorbentes (fase estacionaria) más ampliamente


utilizados son el gel de sílice (SiO2) y la alúmina
(Al2O3), ambas de carácter polar. La alúmina anhidra es
el más activo de los dos, es decir, es el que retiene con
más fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para
separar compuestos relativamente apolares
(hidrocarburos, haluros de alquilo, éteres, aldehídos y
cetonas). El gel de sílice, por el contrario, se utiliza para
separar sustancias más polares (alcoholes, aminas, ácidos
carboxílicos). El proceso de adsorción se debe a
interacciones intermoleculares de tipo dipolo‐dipolo o
enlaces de hidrógeno entre el soluto y el adsorbente,
además el l adsorbente debe ser inerte con las sustancias
a analizar y no actuar como catalizador en reacciones de
descomposición.
Los disolventes más comúnmente empleados son:
Hexano, tetraclorometano, cloroformo, diclorometano,
acetato de etilo, acetona, 2‐propanol, metanol, agua. En
general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos
puntos de ebullición y viscosidad, lo que les permite
moverse con rapidez. Raramente se emplea un disolvente
más polar que el metanol, usualmente se emplea una
mezcla de dos disolventes en proporción variable (4).

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Pasto, D; Johnson, C. Determinación de
estructuras orgánicas. Barcelona: Editorial
Reverte S.A. 1981, p. 31-33.
2. Guarnizo, A; Martínez, P. Experimentos de
química orgánica con enfoque en ciencias de la
vida. Armenia, Colombia: Ediciones Elizcomi.
P. 101

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