UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Facultad de Ingeniería Ambiental

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

HIDROLISIS DEL ALMIDON - FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS

CUARTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA – SA323K

DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS

Lima, Perú
2019

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Contenido
RESUMEN ........................................................................................................................ 3

INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 3

OBJETIVOS...................................................................................................................... 4

MARCO TEÓRICO .......................................................................................................... 4

RESULTADOS:................................................................................................................ 7

DISCUSION DE RESULTADOS ................................................................................... 8

CONCLUSIONES: ........................................................................................................... 8

RECOMENDACIONES: .................................................................................................. 8

FUENTES DE INFORMACIÓN: .................................................................................... 9

ANEXOS: .......................................................................................................................... 9

APENDICE ........................................................................................................................ 9

CUESTIONARIO: .......................................................................................................... 11

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RESUMEN

El estudio de este laboratorio consiste en reconocer un m.o. en un medio,

saber si el almidon hizo hidrolisis.
Los métodos usados, son los de tinción de Gram, con eso se puede conocer
la estructura del m.o. estudiado.

INTRODUCCIÓN

Lo que llamamos almidón no es realmente un polisacárido, sino la mezcla de dos,

laminosa y la amilo pectina. Ambos están formados por unidades de glucosa, en
el caso dela amilasa unidas entre ellas por enlaces a 1-4 lo que da lugar a una
cadena lineal. En el caso de la amilo pectina, aparecen ramificaciones debidas a
enlaces a 1-6.
EL almidón sufre hidrólisis por acción de la amilasa, esta puede ser alfa amilasa o
beta amilasa, en el caso de la primera la hidrólisis produce principalmente dextrina
y en menor proporción la alfa maltosa. La beta maltosa procude alfa maltosa
totalmente debido a queactúa desde el extremo no reductor de la cadena,
catalizando la hidrólisis del segundo enlace α-1,4, rompiendo dos unidades de
glucosa (maltosa) a la vez.
Los microorganismos pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es
necesario una hidrólisis extracelular preliminar, igual que en los animales
superiores. Los distintos microorganismos elaboran para este fin una cierta
variedad de enzimas extracelulares que segregan al medio, el objetivo de esta
práctica es evaluar que microorganismos producen amilasa y son por tanto
capaces de utilizar el almidón.Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva,
Catalasa-positiva, aerobio facultativo comúnmente encontrada en el suelo.
Miembro del Género Bacillus, B. subtilis tiene la habilidad para formar una
resistente endospora protectora, permitiendo al organismo tolerar condiciones
ambientalmente extremas y es capas de producir amilasa lo cual lepermite utilizar
el almidón con fuente nutritiva, por lo tanto, en una placa Agar almidon, ala
presecia del lugos

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OBJETIVOS

✔ Entender los procesos bioquímicos de distintas reacciones enzimáticas

como son la fermentación e hidrólisis.
✔ Comprobar la presencia de almidón en diferentes cultivos y valorar si esa
presencia está o no justificada
✔ Describir el patrón de las reacciones producidas por los microorganismos
y comprobar la reacción mediante pruebas químicas.
✔ Determinar cuáles son los productos de metabolismo asociados a los
substratos y microorganismos seleccionados para este ejercicio.

MARCO TEÓRICO

Almidon:

 Es un hidrato de carbono complejo (C6H10O5), inodoro e insípido, en forma

de grano o polvo. El almidón es el principal carbohidrato de reserva en la
mayoría de las plantas. En las hojas el almidón se acumula en los
cloroplastos, donde es un producto directo de la fotosíntesis. En los órganos
de almacenamiento, se acumula en los amiloplastos, en los cuales se forma
después de la translocación de sacarosa u otro carbohidrato provenientes de
las hojas.

 En los vegetales, el almidón se encuentra en uno o más granos amiláceos en

un plastidio. La cantidad de almidón en diversos tejidos depende de muchos
factores genéticos y ambientales. El almidón se acumula a la luz del día
cuando la fotosíntesis excede las tasas combinadas de respiración y
translocación, después parte de él desaparece por la noche.

 Se presentan dos tipos de almidón en la mayoría de los granos

amiláceos: amilosa y amilopectina, ambos compuestos por unidades de d-
glucosa unidas por enlaces ð-1, 4. Las uniones ð-1, 4 hacen que las cadenas
de almidón se enrollen en forma de hélices. La amilopectina consta de

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moléculas muy ramificadas, cuyas ramas se localizan entre el C-6 de una
glucosa de la cadena principal y el C-1 de la primera glucosa en la cadena que
forma la rama (enlaces ð-1, 6). Las amilosas son más pequeñas y contienen
de cientos a miles de unidades de glucosa, numero que depende de la especie
y las condiciones ambientales.

 La formación de almidón ocurre sobre todo por un proceso que implica la

donación repetida de unidades de glucosa provenientes de un azúcar
nucleotidico similar al UDPG y que se denomina difosfoglucosa de adenosina,
ADPG.

Hidrólisis del almidón:

 La hidrólisis implica la ruptura de un enlace mediante la adición en medio del

mismo de los elementos del agua. Los polisacáridos de la dieta se metabolizan
mediante hidrólisis a monosacáridos.

 La mayoría de los pasos de la degradación de almidón a glucosa pueden ser

catalizados por tres enzimas distintas, si bien hay otras más que se necesitan
para completar el proceso. Las tres primeras enzimas son una ð-amilasa, ð-
amilasa y almidón fosforilasa. Al parecer solo la ð-amilasa puede atacar
gránulos de almidón intactos, por lo que cuando participan la ð-amilasa y la
almidón fosforilasa, es probable que actúen sobre los primeros productos
liberados por la ð-amilasa. La ð-amilasa ataca de manera aleatoria enlaces 1,4
en las moléculas de amilosa y amilopectina, al principio creando huecos al
azar en los granos de almidón y liberando productos que aun son grandes. En
cadenas de amilosa no ramificadas, el ataque repetido por la ð-amilasa
produce maltosa, un disacárido que contiene dos unidades de glucosa. Sin
embargo, la ð-amilasa no puede atacar los enlaces 1,6 localizados en los
puntos de ramificación de la amilopectina, por lo que la digestión de
amilopectina cesa cuando aun quedan dextrinas ramificadas con cadenas de
longitud corta. Muchas ð-amilasas son activadas por Ca+, lo cual es una de
las razones por las que el calcio es un elemento esencial.

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 La ð-amilasa hidroliza al almidón en ð-maltosa; la enzima actúa primero solo

sobre los extremos no reductores. La ð-maltosa cambia con rapidez, por
mutarrotación, para formar las mezclas naturales de isomeros ð y ð. La
hidrólisis de amilosa por la ð-amilasa es casi completa, pero la degradación de
amilopectina es incompleta porque no son atacados los enlaces de los puntos
de ramificación. La actividad de ambas amilasas implica la incorporación de
una molécula de H2O por cada enlace roto, por lo que son enzimas hidrolasas.
Las reacciones hidrolíticas no son reversibles, de modo que no se pueden
detectar síntesis de almidón por amilasas. Las amilasas están diseminadas en
diversos tejidos pero son mas activas en las semillas que están germinando,
ricas en almidón. Es probable que la ð-amilasa tenga más importancia que la
ð-amilasa para la hidrólisis de almidón. Gran parte de la ð-amilasa se localiza
dentro de los cloroplastos, muchas veces unida a los granos de almidón que
atacara. Actúa tanto en el día como por la noche aunque, por supuesto,
durante la luz de día hay producción neta de almidón por la fotosíntesis.

 La amilopectina solo es degradada parcialmente por la acción del almidón

fosforilasa. La reacción procede de manera consecutiva a partir del extremo
no reductor de cada cadena principal o cadena ramificada hasta a unos
residuos de glucosa de las uniones ð-1,6 de las ramificaciones, por lo que de
nuevo que dan dextrinas. La amilosa, que tiene pocas ramificaciones, se
degrada casi por completo, por eliminación repetida de unidades de glucosa a
partir del extremo no reductor de la cadena. La almidón fosforilasa esta
ampliamente distribuida en la planta y a veces resulta difícil determinar que
enzima digiere la mayor parte del almidón en las células de interés.

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RESULTADOS:
Hidrólisis del almidón:

HIDRÓLISIS
PLACA Observacion
COLONIA A COLONIA B

GRUPO N°1 No hay No hay

COLONIA DE BACTERIA DE BAÑO FIA (1 hidrolisis hidrolisis

ml) crema anaranjadas

No hay La distribución
GRUPO N°2
No hay
hidrólisis de la colonia A
COLONIA DE BACTERIA DE BAÑO FIA
hidrólisis
Anaranjadas fue irregular
(10-1 ml)

GRUPO N°3
Hay hidrólisis Hay hidrólisis
COLONIA DE BACTERIA DE PILETA FIA
anaranjado crema
(1 ml)
No se realizon
una adecuada
GRUPO N°4 frotis en
COLONIA DE BACTERIA Pileta FIA (10-1 ninguno de los
ml) 2 sectores A y
B

No se realizon
una adecuada
GRUPO N°5 frotis en
COLONIA DE BACTERIA DE BAÑO FIC (1 ninguno de los
ml) 2 sectores A y
B

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DISCUSION DE RESULTADOS
- No se realizó un adecuado frotis en ninguno de los 2 sectores A y B, en el grupo
4 y 5.
-En el grupo 2 A, no se obtuvo resultados debido a una mala distribución del agar
nutritivo.
-Se puede apreciar que el grifo del baño de la FIC está más apto para el consumo
humano.

CONCLUSIONES:
I. Hidrólisis del almidón

✔ La presencia del color azul violeta alrededor de la colonia indica que la

prueba es positiva, es decir que la bacteria ha hidrolizado el almidón
mediante la amilasa.
✔ La no presencia del color azul violeta alrededor de la colonia indica que la
prueba es negativa, es decir que la bacteria no ha hidrolizado el almidón
mediante la amilasa.

RECOMENDACIONES:
▪ El medio de cultivo no debe sobrecalentarse pues el almidón puede
hidrolizarse y dar falsos positivos.
▪ Para un óptimo crecimiento bacteriano en cualquier tipo de agar es
primordial una buena siembra por estrías, con el cuidado de no dañar el
agar.
▪ La prueba debe interpretarse inmediatamente después de añadir el
reactivo LUGOL porque éste tiende a desvanecerse con el tiempo.
▪ Nunca pipetear con la boca ya que podríamos contaminar el medio o
ingerir agua con agentes patógenos.
▪ Revisar cuidadosamente los procedimientos del laboratorio para no
obviar pasos importantes como la correcta colocación de los tubos
Durham.

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FUENTES DE INFORMACIÓN:

1.- Michael Madigan,John Martinko,Jack Parker ,Biología de los microorganismos

,Madrid,Editorial Pearson ,2004.

DARNELL, J., et al. “Biología Celular y Molecular”. Editorial Médica Panamericana,

Barcelona, 2003. Cuarta edición.
LODISH Harvey and Arnold Berk. 2005. Biología Celular y Molecular. 5 edición
Editorial Panamericana

SOLOMÓN .2008. Biología. Octava edición Editorial Mc Graw-Hill

ANEXOS:

APENDICE
Tiene las siguientes partes:
 DIAGRAMA DE FLUJO

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 DATOS CALCULADOS

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CUESTIONARIO:

1.- Define

a) Enzima

Se denomina enzimas a un conjunto de proteínas encargadas de catalizar

(disparar, acelerar, modificar, enlentecer e incluso detener) diversas reacciones
químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles. Esto quiere decir
que son sustancias reguladoras en el cuerpo de los seres vivos, por lo
general disminuyendo la energía inicial requerida para poner en marcha la
reacción.

Las enzimas son indispensables para la vida y catalizan alrededor de

4000 reacciones químicas conocidas, siempre que sean estables las
condiciones de pH, temperatura o concentración química, ya que las enzimas, al
ser proteínas, pueden también desnaturalizarse y perder su efectividad.

b) Hidrolisis

Hidrólisis es una reacción química entre una molécula de agua y otra de

macromolécula, en la cual la molécula de agua se divide y sus átomos
pasan a formar unión de otra especie química. Esta reacción es importante
por el gran número de contextos en los que el agua actúa como disolvente.

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c) Fermentación
La fermentación es un proceso catabólico de oxidaciónincompleta, que
no requiere oxígeno, y cuyo producto final es un compuesto orgánico.
Según los productos finales, existen diversos tipos de fermentación.

2.- ¿A que se denomina enzima extracelular y enzima intracelular?

Enzima extracelular

En Bacteria y Fungi, las exoenzimas juegan un rol integral en permitir a los

organismos interactuar de manera efectiva con su ambiente. Muchas bacterias
usan enzimas digestivas para romper nutrientes en sus alrededores. Una vez
digeridos, estos nutrientes entran en la bacteria, donde éstos son usados para
activar vías celulares con la ayuda de las endoenzimas

Enzima intracelular

Son aquellas que se activan por fuera de la membrana plasmática o pared

celular de células, muchas de ellas cumplen procesos metabólicos catalíticos
destinados a la degradación de la materia en energía química, un ejemplo notorio
de estas enzimas son las que por exocitosis ( adherencia de membrana entre el
lisosoma y la membrana plasmática de la célula) en forma de una vacuola
excretora libera el contenido enzimático para degradar la materia orgánica o bien
para realizar la fagocitosis por fuera de la célula( digestión extracelular) en el caso
de que los virus puedan ingresar a la célula huésped, este es el principal
mecanismo de defensa, la liberación de enzimas lisosómicas

3.- ¿Que es el almidon y la proteína?

Almidon

El almidón, o fécula, es una macromolécula que está compuesta de dos

polisacáridos, la amilosa (en proporción del 25 %) y la amilopectina(75 %). Es
el glúcido de reserva de la mayoría de los vegetales. Gran parte de las
propiedades de la harina y de los productos de panadería y repostería pueden
explicarse conociendo las características del almidón.

Proteína

Por sus propiedades fisicoquímicas, las proteínas se pueden clasificar en

proteínas simples (holoproteidos), formadas solo por aminoácidos o sus

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derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), formadas por aminoácidos
acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas
por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Las proteínas son
necesarias para la vida, sobre todo por su función plástica (constituyen el 80 %
del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por sus
funciones biorreguladoras (forman parte de las enzimas) y de defensa
(los anticuerpos son proteínas).

4.- ¿ Que son Polipéptidos?

Polipéptido es el nombre utilizado para designar un péptido de tamaño

suficientemente grande; como orientación, se puede hablar de más de
10 aminoácidos. Cuando el polipéptido es suficientemente grande y, en particular,
cuando tiene una estructura tridimensional única y estable, se habla de
una proteína.

La clasificación de los péptidos según el número de aminoácidos de su cadena no

es claro, ni universalmente aceptado. Como aproximación podemos hablar
de Oligopéptido: de 2 a 10 aminoácidos; Polipéptido: de 10 a 50
aminoácidos; Proteína: más de 50 aminoácidos.
Las proteínas con una sola cadena polipeptídica se denominan proteínas
monoméricas, mientras que las compuestas de más de una cadena polipeptídica
se conocen como proteínas multiméricas.

5.- ¿Como se almacena la energía en la celula?

Trifosfato de adenosina (ATP), molécula que se encuentra en todos los

seres vivos y constituye la fuente principal de energía utilizable por las células para
realizar sus actividades. El ATP se origina por el metabolismo de los alimentos en
unos orgánulos especiales de la célula llamados mitocondrias. El ATP se

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comporta como un coenzima, ya que su función de intercambio de energía y la
función catalítica (trabajo de estimulación) de las enzimas están íntimamente
relacionadas. La parte adenosina de la molécula está constituida por adenina, un
compuesto que contiene nitrógeno (también uno de los componentes principales
de los genes) y ribosa, un azúcar de cinco carbonos. Cada unidad de los tres
fosfatos (trifosfato) que tiene la molécula, está formada por un átomo de fósforo y
cuatro de oxígeno y el conjunto está unido a la ribosa a través de uno de estos
últimos. Los dos puentes entre los grupos fosfato son uniones de alta energía, es
decir, son relativamente débiles y cuando las enzimas los rompen ceden su
energía con facilidad. Con la liberación del grupo fosfato del final se obtienen siete
kilocalorías (o calorías en el lenguaje común) de energía disponible para el trabajo
y la molécula de ATP se convierte en ADP (difosfato de adenosina). La mayoría
de las reacciones celulares que consumen energía están potenciadas por la
conversión de ATP a ADP incluso la transmisión de las señales nerviosas, el
movimiento de los músculos, la síntesis de proteínas y la división de la célula. Por
lo general, el ADP recupera con rapidez la tercera unidad de fosfato a través de la
reacción del citocromo, una proteína que se sintetiza utilizando la energía
aportada por los alimentos. En las células del músculo y del cerebro de los
vertebrados, el exceso de ATP puede unirse a la creatina, proporcionando un
depósito de energía de reserva.

La liberación de dos grupos fosfatos del ATP por la enzima adenilato ciclasa forma
AMP (monofosfato de adenosina), un nucleótido que forma parte de los ácidos
nucleicos o el material del ADN. Esta enzima es importante en muchas de las
reacciones del organismo. Una forma de AMP llamada AMP cíclico originado por
la acción de ésta contribuye en la actividad de muchas hormonas, como
la adrenalina y la ACTH.

Las plantas producen ATP utilizando directamente la energía de la luz del sol
(fotosíntesis).

6.- Menciona algunas características ciclo R

Ciclo de Krebs, en honor a su descubridor; o ciclo del ácido cítrico por ser el primer
producto que se forma en el mismo.

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• Función principal: vía final común de oxidación de los hidratos de carbono, de
los lípidos y las proteínas.

• Suministra sustratos para gluconeogénesis, desaminación de aminoácidos y

lipogénesis.

• En mamíferos el tejido más activo es el hígado.

• Se conocen muy pocas anormalidades genéticas de sus enzimas en humanos.

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