UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
MICROBIOLOGÍA GENERAL I

TURBIDIMETRÍA NEFELÓMETRO DE MACFARLAND

La turbidimetría es una técnica analítica de medición que determina cuánto se La nefelometría es un método total así como un método de conteo indirecto.
atenúa un haz de luz que se traslada a través de una suspensión. Esta En una suspensión microbiana, la cantidad de microorganismos es
atenuación se produce gracias a los fenómenos de absorción y dispersión que directamente proporcional a la turbidez generada, e inversamente
experimenta la luz debido a las partículas presentes en la muestra. proporcional a la luz transmitida cuando un haz de luz pasa por esta.

o Fundamento: La turbidimetría se fundamenta en la medición de la Fundamento: Los estándares de McFarland son patrones de turbidez
intensidad de la radiación lumínica que se transmite a través de un medio basados en suspensiones de sulfato de bario. La escala de McFarland
consta de 11 patrones (desde 0,5 a 10) cada uno de los cuales tiene una
constituido por partículas que manifiestan cierta dispersión, las cuales
turbidez comparable a la de una suspensión bacteriana con una densidad
poseen un índice de refracción distinto al de la suspensión donde se
determinada. Para estimar la densidad bacteriana de una suspensión se
encuentran. compara visualmente su turbidez con la de los patrones realizados en la
escala de McFarland, utilizando un fondo de contraste.
o Método: Esta técnica consiste en hacer que la luz atraviese un filtro,
mediante lo cual se produce una radiación de la que se conoce su
longitud de onda; después, esta radiación atraviesa una cubeta en la que
se encuentra una solución y es recolectada por una celda de naturaleza
fotoeléctrica. Así se obtiene una cuantificación de la luz que se ha
absorbido.

o Aparato: Se utiliza un turbidímetro, el cual realiza la medición de esta

obstaculización, con el fin de estimar la turbidez o la intensidad de la
radiación lumínica presente en muestra, conociéndose como NTU a las
unidades de turbidez nefelométrica con las cuales se representa. La
estructura de los turbidímetros está constituida por una fuente de
radiación lumínica, una lente que permite enfocar y conducir un haz de
luz a través de un fluido y un dispositivo de naturaleza fotoeléctrica
encargado de detectar y estimar la cantidad de radiación lumínica que
se ha dispersado.
El patrón o la escala de McFarland consiste en una serie de tubos
herméticamente cerrados, previamente calibrados y con una densidad óptica
diferente originada por la aparición de un precipitado de sulfato de bario
(BaSO4) resultante de la reacción entre el cloruro de bario (Cl2Ba) al1,175%
(0,048 M) y el ácido sulfúrico (H2SO4) al 1% (0,36N).
Esta turbidez puede interpretarse ópticamente o por métodos
espectrofotométricos y cada una de ellas se corresponde a una
concentración conocida de bacterias/ml. Para cada cepa bacteriana hay que
establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la
concentración de bacterias (cél/ml) que genera una turbidez similar.
Para asegurar la densidad del estándar de McFarland así preparado puede
ser chequeado usando un espectrofotómetro con una celda de cuarzo de
1cm; para el estándar 0,5 de McFarland, la absorbancia a una longitud de
onda de 625 nm puede estar entre 0,08 a 0,1.