GUIA PARA EL EXAMEN DEL LABORATORIO DE INMUNOLOGIA CLINICA

DETERMINANCION DE GRUPO SANGUINEO

La determinación de grupo sanguíneo tiene su importancia en el área medica

principalmente; en los laboratorios de los banco de sangre es útil para tipificar los
grupos sanguíneos y estudiar la compatibilidad sanguínea para las transfusiones, así
como también es muy importante en las donaciones de órganos.

Los eritrocitos humanos contienen una variedad de antígeno (aglutinógeno) contra los
cuales pueden encontrarse anticuerpos aglutinantes (aglutininas) en forma natural o
después de inmunización. Los antígenos se dividen en sistemas de grupos sanguíneos,
entre estos se encuentran el ABO.

La producción de los antígenos presentes en el grupo sanguíneo ABO esta controlada

genéticamente por un locus con tres alelos A, B, AB, O. EL Ag O esta caracterizado por
una sustancia llamada H, que es un polisacárido con una molécula de fucosa , sirve de
base para que sobre esta molécula se formen los Ags Ay B. El gen responsable de la
producción del Ag A produce una enzima, la etil-galactosamina transferasa, que agrega
una molécula de acetil-galactosamina al extremo terminal de la galactosa de la
sustancia H, creando así el Ag A. El gen que controla la producción del Ag B lo hace a
través de otra enzima, la galactosil transferasa, que agrega una molécula de galactosa
a la sustancia H.

Mientras el Rh clasifica la sangre con base a la presencia o ausencia del antígeno Rh

(D) en la superficie de los eritrocitos. Este factor se encuentra presente en 85% de la
población y se denomina Rh (+). Es una proteína integral de la membrana
aglutinógena presente en todas las células.

Fundamento

La determinación de glóbulos rojos sanguíneos se basan principalmente en una

reacción de aglutinación en donde los glóbulos rojos sanguíneos humanos normales
que posean antígenos se aglutinaran en presencia de anticuerpos específicos dirigidos
contra sus antígenos, mientras que los glóbulos rojos que carezcan de antígenos no
aglutinaran.

Para la determinación de grupo ABO, los reactivos Anti-A, y Anti-B aglutinaran los
glóbulos que posean antígenos del grupo sanguíneo A y/o B, mientras las células del
grupo O no reaccionaran.

En el sistema Rh los procedimientos utilizados con el anticuerpo Monoclonal Humano

Anti-D se basa en el principio de la aglutinación. Los glóbulos rojos que poseen el
antígeno D se aglutinaran en presencia del anti-D y se denominara Rh (+), mientras
que los glóbulos rojos que carezcan de antígeno D serán denominados Rh (-).
 PRUEBAS CRUZADAS

INTRODUCCION.

El propósito de las pruebas cruzadas es determinar la incompatibilidad serológica entre

el receptor y donador previo a la transfusión, y así prevenir una reacción hemolítica
transfusional.

Desde el punto de vista clínico, se considera en los anticuerpos antieritrocitarios dos

características serológicas importantes: la especificidad y su habilidad de reaccionar a
37°, ya que es a esta temperatura donde ocurre la mayoría de las reacciones
transfusionales.

Una persona de grupo A tiene anticuerpos contra el grupo B, una persona de grupo B
tiene anticuerpos contra el grupo A, una persona del grupo O tiene anticuerpos contra
el grupo A y B, y una persona dell grupo AB no tiene anticuerpos contra el grupo A o el
grupo B.

FUNDAMENTO
Las pruebas cruzadas consisten en enfrentar suero y hematíes del donante con suero y
hematíes del receptor, para comprobar la existencia o no de aglutinación.
Si aparece aglutinación es indicativa de la existencia de anticuerpos en el suero contra
los hematíes. La no aglutinación indica compatibilidad entre ambas sangres.

1. Prueba mayor (D) o del DONADOR:

a) Sirve para confirmar si existe compatibilidad ABO entre el receptor y el donador.
b) Detecta anticuerpos en el suero del paciente que no se hayan demostrado en la
prueba de tamizaje (porque el antígeno correspondiente no estaba presente en las
células detectoras o eritrocitos de fenotipo conocido).
2. Prueba menor (R) o del RECEPTOR:
a) Detecta anticuerpos irregulares en el suero del donador y ratifica algún error de
clasificación ABO/Rh.
 PRUEBA DE COOMS DIRECTO

Introducción

La prueba de la antiglobulina humana permite detectar e identificar inmunoglobulinas

y/o componentes del complemento unidos a hematíes, ya que, añadido a hematíes
sensibilizados producirá su aglutinación a condición de que dichos hematíes hayan sido
lavados a fondo con suero salino fisiológico para eliminar las proteínas plasmáticas que
no estén unidas específicamente a los mismos

El suero antiglobulina humana se obtiene inyectando animales mamíferos,

generalmente conejos, con globulinas humanas purificadas siguiendo un protocolo
estándar de inmunización. De acuerdo con este protocolo se prueba el suero de los
conejos y se escogen los que han respondido mejor a la inmunización. Se obtiene
sangre total de los mismos (no es imprescindible sacrificarlos) y se hace una mezcla de
plasmas que se procesa para obtener un reactivo especifico que será capaz de
detectar globulinas humanas, especialmente gamma globulinas y componentes del
complemento. La mezcla indicada se diluye con una solución tampón (pH aprox. de 7)
que contiene una pequeña cantidad de albúmina bovina; se le añade un 0,1 % de azida
sódica (N3Na) como conservante. Para evitar errores en la utilización del reactivo
obtenido, que es incoloro, puede adicionarse un colorante verde (suero de coombs).

Importancia de realizar la prueba en el laboratorio

Esta prueba detecta loa anticuerpos o componentes del complemento fijados in vivo en
los hematíes de un paciente. Por ello, podemos aplicar dicha prueba al estudio de la
enfermedad hemolítica del recién nacido y de las anemias hemolíticas, ya sean
autoinmunes o inducidas por fármacos y de las reacciones transfusionales.

PRUEBA DIRECTA
· Enfermedad hemolítica del recién nacido
· Anemia hemolítica por autoanticuerpos
· Anemia hemolítica debido a fármacos

· Investigación de reacciones transfusionales

Fundamento
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra los
propios glóbulos rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve para demostrar el
revestimiento de los eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitos están circulando en el
individuo). La prueba se realiza agregando directamente el reactivo de Coombs a los
eritrocitos, previamente lavados para eliminar otras proteínas no fijadas a el; una
prueba directa positiva significa que la relación antígeno-anticuerpo ocurrió in vivo, es
decir que la fijación del anticuerpo sobre el antígeno se realizo en el organismo del
individuo en estudio.

PRUEBA DE COOMBS INDIRECTO

Introducción

Durante el embarazo la prueba de Coombs indirecta se utiliza para detectar

anticuerpos que podrían atravesar la placenta y atacar las células del feto, causando la
enfermedad hemolítica del recién nacido. Revisten especial importancia unos
anticuerpos de un sistema de grupos sanguíneos conocido como sistema Rh. A una
madre Rh negativa se le realizará durante el embarazo (a las 28 semanas) y en el
momento del parto una prueba de Coombs indirecta. Si no se detecta anticuerpos Rh a
las 28 semanas, se administra a la embarazada una inyección de inmunoglobulina de
tipo Rh (Ig-Rh) con la finalidad de eliminar de su circulación cualquier rastro de
hematíes fetales Rh positivos, así se previene el desarrollo de anticuerpos de tipo Rh
por parte de la madre.

En el momento del nacimiento se determina el sistema Rh del recién nacido. Si el bebé

es Rh negativo, la madre no requerirá ninguna otra inyección de Ig-Rh; si el bebé es Rh
positivo, se realizará nuevamente la prueba de Coombs indirecta a la madre.

La anemia hemolítica autoinmune puede también aparecer en personas que

desarrollan anticuerpos frente a sus propios antígenos. Esto puede suceder en el curso
de ciertos trastornos autoinmunes (como el lupus eritematoso sistémico), en
enfermedades malignas como la leucemia linfocítica crónica y en ciertas infecciones
como por ejemplo la neumonía por micoplasma y la mononucleosis. También hay quién
puede desarrollarla como consecuencia de la toma de ciertos medicamentos, como
penicilina, y más raramente puede desencadenarse por el frío. Si después de haber
recibido una transfusión de sangre se presenta fiebre u otros síntomas sugestivos de
una reacción hemolítica transfusional, es posible que el médico solicite las pruebas de
Coombs directa e indirecta para saber si existe anticuerpos contra los hematíes.
 CONTROL DE CÉLULAS

Para la técnica de pruebas cruzadas, Coombs directo e indirecto se utiliza

una suspensión de eritrocitos.

Lavado de eritrocitos

Siempre que se utilicen eritrocitos para cualquier estudio en un banco de sangre

deben ser lavados tres veces para enfrentarlos a los anticuerpos, la relación de
células/solución salina isotónica óptima será de 1/60 volúmenes repartidos en 3
lavados consecutivos.

Algo de vital importancia para el resultado final es que en cada lavado los eritrocitos
deben ser removidos totalmente de la del tubo por agitaciones suaves para evitar su
deterioro y posteriormente agregarles la solución salina, formando un remolino
suficiente para que todas las células queden resuspendidas homogéneamente en toda
la barra salina, de no ser posible esto por falta de práctica es recomendable tapar la
boca del tubo con parafilm y agitar por inversión.