EJERCICIOS DE ENZIMOLOGÍA II UNIDAD

1. Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reacción

catalizada enzimáticamente sobre un solo sustrato, obteniéndose los siguientes
resultados:

Concentración Concentración del inhibidor (mmoñ/L)

de sustrato [S]0
(mmol/L)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción v0 (µmol/L min)
0.05 0.33 0.20 0.14
0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De qué manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores para Vmax,
Km, y la constante (s) de inhibición para la reacción.

2. Se mide la cinética de una enzima como función de la concentración de

sustrato en presencia y ausencia del inhibidor, concentración 2mM.

Velocidad (umol/minuto)
[S] (uM) Sin Con
inhibidor inhibidor
3 10,4 4,1
5 14,5 6,4
10 22,5 11,3
30 33,8 22,6
90 40,5 33,8

a. ¿Cuáles son los valores de Vmax y Km en ausencia de inhibidor? ¿y en

presencia?

b. ¿De qué tipo de inhibidor se trata?

c. ¿Cuál es la constante del inhibidor?

d. La cinética del enzima del problema anterior se mide en presencia de un
inhibidor diferente, la concentración de este inhibidor es 100uM

Velocidad (umol/minuto)
[S] (uM) Sin Con
inhibidor inhibidor
3 10,1 2,1
5 14,5 2,9
10 22,5 4,5
30 33,8 6,8
90 40,5 8,1

¿Cuáles son los valores de Vmax y Km en presencia de inhibidor? Comparar

con los valores obtenidos en el problema anterior.

¿Qué tipo de inhibidor es este?

¿Cuál es la constante del inhibidor?

3. La hidrólisis del hipurato de metilo por la quimotripsina resulta inhibida de

modo reversible por el ácido 2-fenil-etano-borónico. Para determinar la
naturaleza de la inhibición se han medido las velocidades iniciales de hidrólisis
del hipurato de metilo a diferentes concentraciones, en presencia y en ausencia
del inhibidor.

Experiencia A: en ausencia de inhibidor

Experiencia B: (I) 0,019mM

Experiencia C: (I) 0,033mM

Experiencia D: (I) 0,10mM

S mM A B C D

1 0,312 0,25 0,215 0,13

1,25 0,36 0,29 0,255 0,16

1,66 0,43 0,35 0,312 0,20

3 0,58 0,5 0,45 0,312

8 0,78 0,72 0,69 0,55

 Determinar el tipo de inhibición y la KI del ácido 2-fenil-etanoborónico

4. ¿Cuál es el grado de inhibición producido por un inhibidor competitivo cuando

la [S] = Km y la [I] = Ki.

5. Un enzima tiene un KM de 4,7x10-5M, y muestra una Vmáx de 22x10-3

moles/lxmin. Para una [S] de 2x10-4M y [I] de 5x10-4M, ¿qué velocidad y qué
grado de inhibición (%) se observará en el caso de que el inhibidor sea un:

a) inhibidor competitivo (KI= 3x10-4M).

b) inhibidor no competitivo (KI= 3x10-4M).

6. a) ¿Qué concentración de inhibidor competitivo se requiere para dar un 75% de

inhibición, cuando la concentración de sustrato es de 1,5 x 10-3 M, sabiendo
que la Km de la enzima por dicho sustrato vale 2,9 x 10-4 M, y que la Ki para el
inhibidor es de 2 x 10-5 M?. b) ¿Hasta que concentración debe elevarse el
sustrato para restablecer el valor de velocidad obtenido en ausencia del
inhibidor?
7. Si se supone que una enzima presenta una histidina en el centro activo que participa
en forma directa en la catálisis, ¿qué tipo de inhibición produciría una disminución
brusca del pH en este entorno? Justifique la respuesta.
8. La hidrólisis de la p-nitroacetanilida de la acetil- fenilalaninglicina por la papaína ha
sido estudiada en condiciones tales qué se ha podido determinar la relación K cat/Km. Se
ha trabajado a diferentes valores de pH para poder determinar los grupos que
modifican la actividad del enzima:

pH Kcat/Km (M-1 seg-1)

3,7 300

3,9 430

4,2 660

4,6 1020

5,1 1330

5,5 1400

6,0 1450

7,2 1300

7,7 1100

8,05 900

8,2 770

8,4 590
 8,76 350

9 220

9,3 170

Determinar el pK de los grupos que modifican la actividad del enzima cuando cambian
de estado de protonización.

9. a. ¿Que representa la temperatura, pH y fuerza iónica óptimos para una

enzima?
b. ¿Qué papel juegan los iones metálicos en la activación enzimática?
10. ¿Qué es el poder catalítico? Definir KT y como relacionaría en una reacción
enzimática?
11. En la siguiente expresión:

K 2e H
Km=Ks 1+( H
+
K 1e )
Determinar:
a. Para cualquier valor de pH que pasa con Km

b. Cuando el pH es bajo a que es igual la V0 ; Km, pKm.