DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO, TALLER O CAMPO

DE LA VIDA

CÓDIGO: DCVI-GS-v3-2018-001

Ciencias de la Vida y de la
DEPARTAMENTO: CARRERA: Ingeniería en Biotecnología
Agricultura
PERíODO
ASIGNATURA: Immunologia LECTIVO:
Sep 19 – Feb 20 NIVEL: 7mo
DOCENTE: Marbel Torres, PhD NRC: 3539,3542,3540 PRÁCTICA N°: 1
LABORATORIO DONDE SE DESARROLLARÁ LA PRÁCTICA Laboratorio de docencia de Biotecnología

TEMA DE LA
PRÁCTICA:
PROCEDIMIENTOS PARA RECOLECTAR Y PROCESAR MUESTRAS SANGUÍNEAS Y
PRUEBAS DE AGLUTINACION
INTRODUCCIÓN:
Los constituyentes celulares de la sangre incluyen eritrocitos, leucocitos y fragmentos celulares llamados plaquetas. Los
leucocitos o glóbulos blancos incluyen neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos en este orden de
prevalencia en un frotis de sangre normal. La identificación de los leucocitos se basa en: (1) la forma del núcleo (por
ejemplo, redondo, segmentado, lobulado, etc.), (2) la presencia, tamaño y tinción de gránulos citoplásmicos, (3) la
relación de volumen de núcleo Al volumen citoplasmático, y (4) tamaño de la célula. La siguiente tabla le ayudará en su
identificación de las células sanguíneas.
La mejor región para estudiar es en el área donde (1) las células tienen sólo una capa de espesor y (2) los glóbulos
rojos están uniformemente dispersos y no se tocan entre sí; Examine su placa con una ampliación baja e identifique tal
área antes de cambiar a un objetivo más alto. A baja amplificación, se observará un mar de glóbulos rojos enucleados
con células nucleadas intercaladas entre ellos. Estas células nucleadas son los leucocitos. A mayor aumento, se puede
comenzar a distinguir la morfología nuclear y la tinción citoplasmática que se utilizan para identificar los diferentes
leucocitos. Utilice el objetivo objetivo x40 para la observación [el aceite (x100) no es necesario]
La observación cuidadosa de la morfología nuclear (o falta de ella), volumen celular y volumen citoplasmático Permite
clasificar los diversos componentes celulares de la sangre. Utilice la tabla a continuación para ayudar en su clasificación.

CÓDIGO DE DOCUMENTO: DCVI-v3-2018-001 REV. UPDI: F.MORENO

CODIGO: FRM.7.3.001 FECHA: 21-12-2018
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Existen dos grupos los Granulocitos dentro de ellos los neutrófilos, basófilos y eosinófilos. Y los No Granulocitos así
como los monocitos y linfocitos.
Los neutrófilos defienden el organismo contra bacterias y otro microorganismo. Se les puede denominar neutrófilos en
banda o segmentados, dependiendo de si presentan o no divisiones de su núcleos en 3 a 5 lóbulos. Si el núcleo es
mayor, se habla de neutrófilos hipersegmentados.
Los basófilos poseen gránulos de heparina e histamina, mediadores de la inflamación. Actúan en estados de
hipersensibilidad retardada. La liberación masiva del contenido de unos gránulos puede causar choque anafiláctico,
mortal si no es controlado.
Los eosinófilos poseen una actividad fagocítica: se “comen” los agente extraños. Sus gránulos tienen sustancias que
degradan lo fagocitado sobre todo las larvas de parásitos. Además, inician y regulan las reacciones alérgicas.
Los basófilos tienen gránulos grandes y oscuros que normalmente ocluyen la vista del núcleo. Los eosinófilos tienen un
color rosa oscuro distinto al marrón rojizo gránulos de tinción que son más pequeños y más numerosos.
Los monocitos poseen actividad fagocítica bactericida. Ante estímulos químicos pueden seguir a los neutrófilos.
Pueden fijarse a tejido de bazo, Hígado y pulmón, dando lugar a macrófagos tisulares que forman el sistema retículo-
endotelial encargado de remover material extraño circulante en sangre
Los linfocitos B constituyen la minoría del pool linfocitario circulante 10- 20%. Maduros, pasan de la medula ósea a la
sangre y se dirigen hacia los órganos linfáticos periféricos para ubicarse en los folículos linfoides. Bajo estimulo
antigénico, se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folículo linfoide. Pude seguir un proceso
de estimulación hasta transformarse en immunoblastos. Y estos en células plasmáticas secretoras de inmunoglobulinas.
Pueden también regresar al estado quiescente de pequeño linfocito B con memoria inmunológica, para pasar a formar
parte del manto o corona.
Los Linfocitos T forman una población mayoritaria. En el adulto normal oscila entre 65% y 75% con variaciones según
la edad. Ejercen sus efectos mediante la liberación de proteínas solubles, citocinas, encargadas de la trasmisión de
señales a otras células, o bien mediante interacciones directas con otras células.

Tinción de Wright: esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una
solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un
fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH
del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares.

OBJETIVOS:

1) Diferenciar e identificar las células del sistema de defensa en sangre humana

2) Realizar e identificar la pruebas de hemolisis
MATERIALES:
INSUMOS: 10 Agujas para toma de sangre, 10 Tubos
con anticoagulante tapa morada , 10 Jeringas, 5 mL,
REACTIVOS: 100ml Alcohol, 100ml Colorante de Wright,
paquete Torundas, 5 Torniquetes, 15 Tubos de 15mL
100 ml Colorante de Giemsa, 100ml Colorante de eosina, Kit
para centrifuga, 5 Capsulas vacutainer, 1 Caja de
de tipo sanguíneo, aceite de inmersión, Kit de tipos de
portaobjeto nuevos , placas con orificios, 5 caja Puntas
sangre, hematoxilina,
de 1000µL, rollo Papel para microscopio, 15 Pipetas
Pasteur de vidrio y plásticas, 5 Gradillas de tubos de 15
mL, guantes 5 cajas de puntas de 200ul y 5 cajas de
puntas de 10ul, 10 palillos de dientes.
EQUIPOS: 14 Microscopios ópticos, 5 Juegos Micro-pipetas, centrifuga.

MUESTRA: Sangre venosa con anticoagulante EDTA (tubo morado).

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INSTRUCCIONES:

Conocer las normas de bioseguridad del estudiante y para el manejo de sangre y sus derivados
Conocer el instructivo del manejo de desechos biologicos y Anatomo-patológicos
Medidas de seguridad en el caso de accidente y evacuación
Carnet de vacunación imperativo.

ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

1. Toma de sangre, homogenizar la sangre durante 1 minutos y

realizar un frotis sanguíneo
2. Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de
tinción con la sangre hacia arriba.
3. Cubrir completamente el portaobjetos con el colorante de
Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis
aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos
sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el
portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá
agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a
evaporar.
4. Agregar directamente al colorante un volumen igual de
amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar
la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera
agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
5. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la
extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple
vista.
6. Limpiar el dorso del portaobjetos con un papel humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de
colorante.
7. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de 100x.
8. Identificar las células y anotar los resultados

Grupo sanguíneo y Rh

1. En caso de no contar con un placa marcada, trazar 3 círculos en una placa de vidrio
2. Colocar una gota de sangre en cada circulo
3. Agregar a cada círculo una gota de reactivo distinto de anticuerpo Anti A, B, D
4. Mezclar el contenido de cada círculo con aplicadores de madera distintos
5. Observar la presencia o ausencia de aglutinación

La aglutinación indica la presencia de antígeno para el anticuerpo agregado:

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RESULTADOS OBTENIDOS:
- Elaboración del reporte del laboratorio en forma de poster cientifico, el cual contiene
Introducción, metodología, resultados, conclusiones, recomendaciones y bibliografía (Sitio virtual ver modelo)
- Dentro del artículo debe responder a estas inquietudes:
Tinciones diferenciales para observacion de celulas del sistema inmune
Como se produce la ontogenia de las células inmunes sus precursores y que factores de diferenciación en
cultivo in vitro tomando de un modelo animal y obtener células dendríticas
Las pruebas de hemolisis nos sirven para determinan los antígenos de superficie y que alternativas existen
CONCLUSIONES:
Las observaciones deben estar de acuerdo a esta coloraciones
- Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado.
- El citoplasma de los monocitos presentarán una tonalidad azul grisácea con gránulo rojizos bastante finos y sus
vacuolas características.
- El citoplasma de los linfocitos presentará varias tonalidades azules.
- Los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color púrpura oscuro. Los núcleos de los monocitos de
color púrpura algo más claros (lila).
- Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso. Los gránulos de los basófilos púrpura
azulado muy oscuro.
- Los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos.
Las plaquetas toman coloración violeta o púrpura
RECOMENDACIONES:
En estos frotes los eritrocitos aparecen de un color rojo brillante o anaranjados, la cromatina nuclear es rosa pálida y los
gránulos de los eosinófilos son rojo brillante intensos.
Evitar lo siguiente: Láminas mal lavadas, Secamiento insuficiente  Acción excesiva de la solución fijadora  Lavados
inadecuados al concluir la tinción  Filtración inadecuada del colorante que se está utilizando
FIRMAS

F: …………………………………………….
Nombre: MARBEL TORRES,PHD
DOCENTE
F: ……………………………………………….
F: ………………………………………………
Nombre: CLAUDIA SEGOVIA, PhD Nombre: Patricia Jiménez, PhD
COORDINADOR DE ÁREA DE JEFE DE LABORATORIOS
CONOCIMIENTO MULTIDISCIPLINARIOS

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