UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC

DEPARTAMENTO DE CIVIL Y AMBIENTAL

DETERMINACIÓN DE BIOAEROSOLES
Charris-Pabon, L. Gutiérrez-Salcedo, A. Hernández- Henao, J. Jiménez-Negrete, M. Cuello-
Rodelo, J

Laboratorio Control de Emisiones Atmosféricas, Grupo AD, Programa de Ingeniería Ambiental,

Universidad de la Costa

Lcharris13@cuc.edu.co, agutierr18@cuc.edu.co, jhernand64@cuc.edu.co, mjimenez49@cuc.edu.co,

jcuello7@cuc.edu.co

Schneider Ismail Lui

27/Septiembre/2019

RESUMEN

El presente informe redacta el estudio de las partículas atmosféricas en el aire bajo muestras graduadas, con
la finalidad de identificar la concentración de bioaerosoles y los tamaños de las partículas de las sustancias
obtenidas en la cafetería de la Universidad de la Costa CUC, usando como equipo el impactador de cascada
de seis etapas consecutivas, donde se dejó el equipo por un tiempo de monitoreo de cinco minutos, luego del
proceso de incubación por un tiempo de 48 horas, se procedió a realizar el conteo y identifación de las
colonias macroscópica y microscópicamente. en este caso se identificaron seis tipo de colonias repartidas en
las seis etapas de las cajas Petri, teniendo en cuenta que en la etapa tres se tuvo presencia de hongos,
pasando así a la fijación de cada colonia identificada en un porta objetos para tinción de Gram que ayudo a
la identificación de bacterias donde se evidenciaron dos tipos como coco y bacilos, donde se presenta
concentraciones de UFC de 7,069.13 hasta 452,297 UFC/m3 de bacterias del género Bacillus Gram positivas
en todas las etapas del impactador.

Palabras claves: Bioaerosoles, Impactador de cascada, incubación, partículas, colonias, atmosfera.

ABSTRACT

This report draws the study of atmospheric particles in the air under graduated samples, in order to identify
the concentration of bioaerosols and the particle sizes of substances obtained in the cafeteria of the
University of the Costa CUC, using the six-stage waterfall impactor in a row as a team, where the equipment
was left for a monitoring time of five minutes, after the incubation process for a time of 48 hours, the
macroscopic and microscopic colonyes were counted and identified. in this case, six types of colonies were
identified in the six stages of Petri boxes, considering that in stage three there was presence of fungi, thus
passing to the fixation of each colony identified in an object holder for Gram staining that helped the
identification of bacteria where two types of coconut and bacilli were evident.

Keywords: Bioaerosols, cascade impactor, incubation, particles, colonies, atmosphere.

 - INTRODUCCIÓN.
Los microorganismos pueden ser transportados rápidamente,
en forma de bioaerosoles, la atmósfera no tiene una
microbiota autóctona, pero es un medio para la dispersión de
muchos tipos de microorganismos (esporas, bacterias, virus y
hongos), procedentes de otros ambientes. Los
microorganismos dispersos por el aire producen
enfermedades en plantas, animales y humanos, causando
algunas alteraciones respiratorias, perdidas de grandes
cosecha y materiales orgánicos (cuero, textiles, papel)
produciendo alteraciones (M. C. DE LA ROSA, 2002). Los
microorganismos son, y siempre han sido, un factor
importante para la salud humana. La vida fue iniciada en
forma de microorganismos y estos han desarrollado una
extraordinaria capacidad de supervivencia que les ha
permitido colonizar prácticamente cualquier espacio natural
de la tierra y por supuesto, también los entornos artificiales
creados por el ser humano (Niño, 2011).
permite colectar el aerosol de la atmosfera en una muestra
adecuada, también clasifica por tamaño a las partículas
contenidas en el aire (Daniel José Beltrán Villegas, 2004)
El principio del diseño del impactador se basa en que las
partículas con más inercia son menos capaces de seguir con
el flujo e impactan la superficie colectora, si cambia
rápidamente de dirección, las demás partículas permanecen
en el fluido hasta que se consigue aumentar su inercia. Para
el aumento de inercia se obtiene incrementando la velocidad
lineal de fluido, lo cual se dispone de una caja perforadora
con orificios sobre cada etapa, el diámetro de cada orificio se
disminuye a medida que se desciende en las diferentes etapas
del impactador (Morgado-Gamero, Agudelo-Castañeda, &
Barraza-Vargas, 2017).

El presente informe tiene como objeto determinar la

concentración de bioaerosoles presentes en el aire en la
cafetería de la Universidad de la Costa, CUC usando el
método de impactación de cascada, además se realiza la
identificación de los bioaerosoles, así como su fuente de
emisión.

- MARCO TEÓRICO.

Impactador de cascada. Figura 1 Impactador de cascada de seis etapas como

El aire contiene en suspensión diferentes tipos de
microorganismos, especialmente bacterias y hongos. La
presencia de uno u otro tipo depende del origen, de la
dirección e intensidad de las corrientes de aire y de la
supervivencia del microorganismo, pueden ser transportados
rápidamente, en forma de bioaerosoles. Las enfermedades
transmitidas por el aire, producidas por bacterias, virus y
hongos, son las respiratorias (neumonía, tosferina,
tuberculosis, legionelosis, resfriado, gripe), sistémicas
(meningitis, sarampión, varicela, micosis) y alérgicas (U.,
1969).
Los impactadores son usados para la caracterización de
partículas de los aerosoles en diversos ambientes, pueden ser
utilizados en estudios sobre los efectos de la contaminación o
del ambiente de trabajo sobre la salud. Es un instrumento que
2
simulador del sistema respiratorio del ser humano. Fuente:
(6)
El impactador cuenta con seis etapas las cuales se
describen a continuación: (Guía laboratorio, Universidad de
la Costa)
Etapa 1: cavidad Nasal (partículas entre 7.0 Micras y de
mayor valor)
Etapa 2: faringe (partículas entre 4.7 Micras y 7.0)
Etapa 3: tráquea y bronquios primarios (partículas entre 4.7
Micras y 3.3)
Etapa 4: bronquios secundarios (partículas entre 3.3 Micras
y 2.1)
Etapa 5: bronquios terminales. (Partículas entre 2.1 Micras
y 1.1)
Etapa 6: alveolos. (Partículas entre 1.1 Micras y 0.6)
Bomba de vacío.
Las aplicaciones de vacío tanto en la industria como en los
laboratorios de investigación son numerosas y variadas.
Una bomba de vacío es un dispositivo empleado para extraer
los gases y sustancias no deseados en un proceso, producto o
sistema.
Las bombas de vacío trabajan solamente en un rango de
presiones limitado, por ello la evacuación de los sistemas de
vacío se realiza en varias etapas, usándose para cada una de
ellas una clase de bomba diferente.
El funcionamiento de una bomba de vacío está caracterizado
por su velocidad de bombeo y la cantidad de gas evacuado
por unidad de tiempo. Toda bomba de vacío tiene una
presión mínima de entrada, que es la presión más baja que
puede obtenerse, y también un límite superior a la salida o
presión previa. Si la presión previa aumenta por encima de
este valor, el bombeo cesa. (POMPETRAVAINI, 2007,
págs. 5,6,7)
Siembra.
Sembrar es introducir artificialmente una porción de muestra
(inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un
cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación.
Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento. Para llevar a cabo
este proceso es necesario aplicar una serie de reglas
fundamentales, tales como:
- Efectuar la siembra asépticamente para evitar
contaminar la muestra, para esto es necesario que los
medios de cultivo e instrumentos que se utilicen se
encuentren esterilizados.
- Que se realicen solo los manipuleos indispensables.
- Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser
posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.
(Santambrosio, 2009, pág. 2)
3
Caja Petri o Placa de Petri
Es un instrumento de laboratorio el cual puede ser de cristal
o de plástico, que consta de una base circular, y las paredes
son de una altura baja aproximadamente de 1 cm; y una
cubierta de la misma forma, pero algo más grande de
diámetro para que encaje como una tapa. Los hay de
diferentes diámetros, los más utilizados en el laboratorio son
los de 10 cm de diámetro. Se utiliza en los laboratorios
principalmente para el cultivo de cristales, en los laboratorios
de biología se utilizan para el cultivo de bacterias o
microorganismo (E., 2011).
Bacterias mesofílicas.
Bacteria que descompone la materia orgánica a temperaturas
que oscilan entre 30 y 40 C. El agua es utilizada como medio
de eliminación de excretas y otros desechos; puede también
contener microorganismos patógenos de asiento no
intestinales, por ejemplo, flora de la piel (ECURED, 2019).
Microscopio
Este aparato permite observar lo que es invisible a simple
vista. Existen diversos tipos de microscopios, desde la lupa,
formada por una sola lente, hasta el microscopio electrónico.
- El microscopio simple o también llamado lupa,
consta de una de sólo una lente biconvexa o plano-
convexa, que proporciona una amplitud moderada
del objeto.
- Los microscopios de luz, compuestos u ópticos, usan
lentes, para enfocar y amplificar los rayos de luz que
pasan a través de un espécimen o rebotan en él. La
capacidad de definición de estos microscopios es de
aproximadamente de 1 micra (una millonésima parte
de metro). Este microscopio es el que utilizamos
dentro del laboratorio de Biología, en el que más
adelante identificaremos sus partes y aprenderás
como usarlo.
- El microscopio estereoscópico o de disección, es un
microscopio compuesto doble, en estos aparatos las
imágenes conservan los relieves que pueden
observarse simultáneamente con los dos ojos. El
aumento que se obtiene es relativamente bajo, sin
embargo, pueden realizarse micro disecciones sobre
la platina a la par que la persona se encuentra
observando por los oculares.
 - Los microscopios electrónicos utilizan haces de
electrones en vez de luz. Los electrones se enfocan
con campos magnéticos, no con lentes. Cuando un
haz de electrones incide en el vacío sobre un objeto,
las partículas incidentes pueden ser absorbidas,
transmitidas y modificarse de distintas formas.
Algunos tipos de microscopios electrónicos pueden
distinguir estructuras de unos cuantos nanómetros
(milmillonésimas de metro) (Aguilar, 2013).
cuenta que deben colocarse de forma correcta, es decir, que
queden planos. Seguidamente, se procede tomar las
muestras, este proceso se realiza durante 5 minutos y a una
altura de 1.5 metros del suelo. Se coloca el rotámetro para un
caudal de 28,3 L/s.
Seguidamente, se retiraron las muestras, de forma ordenada,
se rotularon, tal como se observa en la figura 2 y se llevaron
a la incubadora por un tiempo de 72 horas a 37°C.

3. DESARROLLO EXPERIMENTAL

3.1 Materiales, insumos y equipos.

Durante esta experiencia de laboratorio se utilizaron los

siguientes insumos:

 Equipo impactador de cascada

 Bomba de vacío
Figura 2. Muestras rotuladas. Fuente: Propia.
 Microscopio
Materiales: Pasado el tiempo, se procede a la segunda parte de la
experiencia, que es la caracterización de las muestras de
 Cajas Petri forma macroscópica.
 Medio de cultivo En la etapa de observación macroscópica; se pudo observar
 Portaobjetos las características físicas de cada una de las muestras, tales
 Guantes como, el color, el relieve y la forma como se aprecia en la
 Tapabocas figura 3, determinando en cuál de las muestras se repetían
 ASA bacteriológica dichas características, y de esta forma agruparlas y asignarles
un código y de esta forma realizar la clasificación de
 Mecheros cultivos, y la determinación del número de colonias
Reactivos: existentes en cada muestra.

 Lugol violeta
 Cristal violeta
 Aceite de inmersión
 Alcohol acetona

3.2 Procedimiento.

Se escoge un punto estratégico para la toma de muestras,

según las indicaciones del profesor. Antes de dar inicio a la
toma de la primera muestra, es necesario encender el equipo
durante unos minutos para eliminar la presencia de agua que
se encuentre dentro, ya que esto podría alterar los resultados.
Figura 3. Observación macroscópica de la etapa #1.
Luego, se procedió a fijar las cajas petri llenas del medio de Fuente. Propia.
cultivo en el equipo, con la precaución necesaria, teniendo en
4

Seguidamente, se le dio inicio a la etapa de observación
microscópica, donde con mucha precaución, los
implementos necesarios y con ayuda de un asa, se fijó muy
ligeramente la muestra de cada uno de los cultivos
clasificados en un portaobjetos, para realizar este proceso fue
necesario mantener encendidos todos los mecheros bunsen
que se encuentran en el laboratorio.
Posteriormente, se realiza el método de tinción de gram, el
cual consiste en tomar las muestras en los portaobjetos y
agregar 1 gota de Cistral violeta, una gota de Lugol violeta,
alcohol acetona y una gota de Safranina como se puede
observar en la figura 4, teniendo en cuenta que antes de
agregar cada gota se enjuagan suavemente con un poco de
agua, esperando un tiempo determinado, a: 1, 1 minuto, 30
segundos y 1 minuto respectivamente.
Figura 4. Tinción de Gram. Fuente. Propia.
Finalmente, se dejan secar las muestras por unos minutos,
luego, se le agrega a cada muestra una pequeña gota de
aceite de inmersión y se trasladan al microscopio para
analizarlas y observarlas más detalladamente, y de este modo
realizar su clasificación (Gram + y Gram -) de una manera
más exacta.
5
ANÁLISIS Y DISCUSIONES
Para calcular la concentración de UFC se hace uso de la
siguiente ecuación.
𝑈𝐹𝐶 𝑋 1000
𝐶𝑈𝐹𝐶 = 𝑬𝒄. 𝟏.
28,3 𝑋 𝑡
Dónde:
t: Tiempo de monitoreo
Caudal 28.3 l/s
UFC: Unidades Formadoras de Colonia.
En la Tabla 1, se encuentran los datos obtenidos de la
concentración de las unidades formadoras de colonias
(UFC).
La 1ra etapa (Y1) nos proporcionó una cantidad de 24
colonias con una concentración de 169,61 UFC/m3, en la 2da
etapa (Y2) tiene 64 unidades formadoras de colonias y una
concentración de 452,29UFC/m3, en la 3ra etapa (Y3) las
unidades formadoras de colonia fueron 9 con una
concentración de 63,604 UFC/m3, Con relación a la 4ta y 5ta
etapa se evidencio 1 sola unidad formadora de colonia con
una concentración de 7,06 UFC/m3 y en la 6ta etapa (Y6) se
encontró 3 unidades formadoras de colonias con
concentración de 21,201 UFC/m3.
Las características macroscópicas y microscópicas se
encuentran en la Tabla 2. (ver Anexos).
A nivel macroscópico se pudo observar que las colonias eran
de tamaño entre pequeñas y medianas, de forma redonda,
asimétricas, de color blancuzco, y amarillo, de textura lisa y
sin relieve. A nivel microscópico, se realiza una breve
descripción de lo observado.
En la Figura 2 se observa una flora mixta, constituida por
basilos Gram positivos y bacilos Gram negativos, los
primeros retienen el complejo CV-1(cristal violeta), y al ser
tratados con alcohol acetona siguen teñidos de color violeta
oscuro, las bacterias Gram negativas sometidas al mismo
tratamiento, pierden el CV-1 se tiñen de rosado, porque
toman el segundo colorante de contraste, qué es la safranina.
Actualmente se considera que la diferencia entre bacterias
Gram positivas y Gram negativas radica en la constitución
física-química que tiene la pared celular, la pared de las
bacterias Gram negativas contienen más lípidos y al ser
tratadas con alcohol se le extraen, quedando los poros
grandes y permitiendo la salida del complejo CV-1.En
cambio en las bacterias Gram positivas por tener bajo
contenidos de lípidos los poros resultantes son más
pequeños alcanzando a impedir la salida del complejo CV-1.
Otra explicación similar, está relacionado con el
peptidoglucano, compuesto que forma como especie de
rejilla y está presente en mayor cantidad en la pared de las
bacterias Gram positivas. El tratamiento con alcohol acetona
causa una disminución en el diámetro de los poros, pero en
las Gram negativas por tener menos cantidad de
peptidoglucano los poros quedaran lo suficientemente
grandes para permitir la salida del CV-1.
En la Figura 3 se observan cocos y bacilos, los cuales no se
pudieron identificar si eran Gram positivos o Gram
negativos, debido a que existió error en el procedimiento de
la tinción de Gram, 1º) Una posible causa pudo ser a la
cantidad de colorante que se aplicó en la prueba, esto no
permitió la verdadera identificación de la flora encontrada en
el muestreo. 2º) Prolongación en el tiempo de coloración. 3º)
Posible contaminación con los reactivos por en el uso de las
pipetas.
En la Figura 4 se observan escasos Cocos Gram positivos y
estructuras de hongos como son l como son las hifas entre
los cuales está la (Candida albicans) que es el único hongo
que se puede teñir con la tinción de Gram, por lo tanto, se
consideran Gram positivas, porque retienen el CV-1
tomando un color violeta oscuro,
Finalmente, gracias a las concentraciones obtenidas de UFC
de bacterias del género Bacillus, se puede decir que la
calidad del aire es un poco inestable, por lo cual se pueden
llegar a presentar impactos en la salud de las personas
expuestas, ya que estas bacterias presentan un tamaño entre
4-10 μm, pudiendo estar localizadas en la cavidad nasal y
faringe del sistema respiratorio.
6
CUESTIONARIO
¿A qué tipo de riesgos están expuestos los seres humanos
que están en contacto con los microorganismos
encontrados?
Las enfermedades víricas transmitidas por el aire por las
bacterias identificas son: Amigdalitis, faringitis, bronquitis,
escarlatina producida por la especie Cocos y el Carbunco
pulmonar producida por la especie de Bacillus. Muchas de
las especies de Bacillus no tienen a causar variedad de
enfermedades; Los cocos que pueden causar infecciones en
los humanos son los estafilococos, los estreptococos, los
neumococos y los meningococos, pero muchos agentes
externos tienden a generar o transportar estas enfermedades
infecciosas y contagiosas que padecen los animales y pueden
trasmitirse al ser humano; se identifica que cerca al área de
estudio, la presencia de aves y felinos (Gatos), muy posibles
portadoras de bacterias (U., 1969)
¿Cuáles son las posibles fuentes de estos contaminantes
en el lugar de estudio?
En el sitio de muestreo existían diferentes fuentes como el
polvo procedente de las continuas brisas en el área, los
desechos generados diariamente, debido a que inciden en
descomposición orgánica; otra posible fuente puede
considerarse los seres humanos, debido a que gran parte de
estas bacterias las transportamos en nuestro cuerpo. Por otro
lado, cerca del sitio de muestreo se encuentra árboles que
pueden ser fuentes de emisión de bacterias y animales.
Proponga una forma de mitigación para este tipo de
contaminantes.
Una mitigación directamente no se podría como tal por la
zona en que fue extraída la muestra (cafetería principal cuc)
ya que es una lugar de espacio abierto, pero se puede crear
un plan para disminuir la contaminación en ese punto donde
fue obtenida la muestra, esto se puede llevar a cabo
motivando e incentivando a toda la comunidad estudiantil y
no estudiantil que se encuentre en el lugar o en cualquier
punto de la universidad con el fin de que hagan una buena
disposición de los residuos y desechos en los lugares que le
corresponde, no obstante darle un aseo continuo a cada área
esto con la finalidad de una menor exposición a los
biaerosoles.
CONCLUSIONES https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-1-4684-
6438-2_8
Una vez realizada la experiencia de laboratorio de
determinación de bioaerosoles es posible afirmar que las U., M. e. (16 de agosto de 1969). INCREMENTO DE
bacteria encontrada y analizada corresponde al género INFRAESTRUCTURA:"ESTABLECIMIENTO DE UN
LABORATORIO PARA ESTUDIOS.DE
bacilos y cocos Gram positivas ,Gram negativas, estas
CONTAMINANTES EN AIRE, AGUA Y SUELO
pueden causar graves daños a la salud humana como MEDIANTE TÉCNICAS ATÓMICAS Y NUCLEARES".
enfermedades de piel e infecciones internas, por tal motivo Obtenido de
podemos concluir que cuando esta bacteria está en altas https://www.osti.gov/etdeweb/servlets/purl/20935679
concentraciones en el aire provocara un gran impacto en la
salud de las personas expuestas, ya que por su tamaño son de
fácil inhalación, causando enfermedades respiratorias y
cutáneas. Aguilar, M. I. (2013). Obtenido de
https://www.uaeh.edu.mx/scige/boletin/prepa3/n1/m
9.html

1. BIBLIOGRAFÍA E., D. (2011). CAJA PETRI. Obtenido de http://laboratorio-

quimico.blogspot.com/2009/04/caja-petri.html

ECURED. (2019). Bacterias mesófilas. Obtenido de

Daniel José Beltrán Villegas, N. R. (2004). Diseño y construcción
de un impactador de cascada Para la determinación de la
https://www.ecured.cu/Bacterias_mes%C3%B3filas
distribución de tamaño de Material particulado
suspendido en el aire. Obtenido de
file:///C:/Users/RAMIRO%20%20CASTILLO%20P/Dow
nloads/435-1335-1-SM.pdf

M. C. DE LA ROSA, M. A. (2002). El aire: hábitat y medio de

transmisión. Obtenido de
http://www.divulgameteo.es/uploads/Aire-
microorganismos.pdf

Morgado-Gamero, W., Agudelo-Castañeda, D., & Barraza-Vargas,

Y. (septiembre de 2017). EVALUATION OF THE FUNGI
BIOAEROSOLS IN A LANDFILL AND ITS AREA OF
INFLUENCE, LOCATED IN DEPARTAMETO DEL
ATLANTICO. Obtenido de
https://www.researchgate.net/publication/325478349_EV
ALUATION_OF_THE_FUNGI_BIOAEROSOLS_IN_A
_LANDFILL_AND_ITS_AREA_OF_INFLUENCE_LO
CATED_IN_DEPARTAMETO_DEL_ATLANTICO

Niño, O. (19 de 1 de 2011). Microbiología del Aire. Obtenido de

http://omarleo168-
microbiologia.blogspot.com/2011/01/microbiologia-del-
aire.html

Ortíz, J., Préndez Bolívar, M. M., & Solezzi, S. (2016). Utilización

y manejo de un impactador de cascada Andersen en el
estudio de los aerosoles Atmosféricos. Obtenido de
http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/121473

Shaffer, P. A. (2019). Instrumentation Used with Microbial

Bioaerosols. Obtenido de

7
 UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC
DEPARTAMENTO DE CIVIL Y AMBIENTAL

ANEXOS

CAFETERIA
CODIGO FORMA RELIEVE TEXTURA COLOR ETAPAS # colonias
Y1 Redondas sin relieve lisa amarilla 1-2-3-5-6 24
Y2 Redondas sin relieve lisa blanca 1-2-3-5 64
Y3 Asimetrica sin relieve lisa blanca 1-3-4-6 9
Y4 Asimetrica con relieve lisa amarilla 1 1
Y5 asimetrica larga sin relieve lisa blanca 2 1
Y6 Redondas sin relieve lisa naranja 3 3
Tabla 3 Caracterización macroscópicas de las bacterias identificadas

Tabla 4 Concentración de las Unidades formadoras de bacterias

UFC
Y1 169,611
Y2 452,297
Y3 63,604
Y4 7,067
Y5 7,067
Y6 21,201

Figura 5 Flora mixta, constituida por basilos Gram positivos y bacilos Gram negativos.
Figura 6 cocos y bacilos, los cuales no se pudieron identificar si eran Gram positivos o Gram
negativos

Figura 7 escasos Cocos Gram positivos y estructuras de hongos