IMPACTO CLÍNICO DE LA VERIFICACIÓN DE

MÉTODOS ANALÍTICOS: De la Teoría a la

Práctica.
Desde los Protocolos de la CLSI Hasta la Validez
Diagnóstica del Resultado
 Evaluación de la Linealidad y Verificación
de la Calibración en los Procedimientos de
Medición Cuantitativos Guía CLSI EP6 A
CALIDAD CON EL DEBER SER… NO
POR HACER
Planificar la
Estrategia de
Aseguramiento
 NO SOLO ES CUESTIÓN DE ASEGURAR…
SINO DE GESTIONAR LA CALIDAD ANALÍTICA

1. Planeación: Responder a
objetivos.
2. Control: Identificación de puntos
críticos y se evita la
recurrencia...
3. Aseguramiento: Erradico la
causa raíz.
4. Mejora Continua:
SERÁ SUFICIENTE?...
SERÁ SUFICIENTE?...

VMA como nueva

incorporación???
 Estamos verificando el
método?
MINIMIZAR EL EVENTO
ADVERSO

Hemos verificado los SI FUERA

atributos intrínsecos del SUFICIENTE, NO
método EXISTIRÍA QUEJA

Conducta clínica que toma el

médico con nuestros
resultados
Tengo la certeza que el rango de
medición y linealidad que
declara el fabricante es el que
dice ser?
 CUANDO HAY
PROBLEMAS DE
DESEMPEÑO

EVALUACIÓN DE LA
Acción sobre el
reactivo LINEALIDAD

Acción sobre el
calibrador

Acción sobre el
instrumento
EVALUACIÓN DE LA
LINEALIDAD
EN UN CONTEXTO INTERNACIONAL
Para Validar la Linealidad: El Para Verificar el Límite de
protocolo es adecuado para Linealidad: Apropiado para el
identificar o validar el intervalo laboratorio clínico si se trata
lineal y es apropiado para de procedimientos de medida
fabricantes de productos para comerciales.
diagnóstico in vitro o para el
laboratorio clínico si se trata
de un procedimiento de
medida propio.
DEFINICIONES
DEFINICIONES
DEFINICIONES
DEFINICIONES
DEFINICIONES
DEFINICIONES
DEFINICIONES
Evaluar la Linealidad desde
dos perspectivas

Linealidad Linealidad
Estadística Clínica
 ¿Qué necesito para hacer este protocolo?
1. Necesitamos una muestra de concentración alta. (Materiales
estandarizados)
2. El inserto del fabricante porque necesitamos saber hasta cuánto mide el
procedimiento de medida, es decir, necesito en el inserto buscar cuál es
la linealidad declarada por el fabricante y buscar una muestra cercana
al límite superior de linealidad declarado por el fabricante.
3. Un diluyente o muestra de concentración baja. Esa muestra puede ser
el diluyente recomendado por el fabricante para diluir muestras o una
muestra de un paciente que sea una muestra con una concentración
baja.
4. Software, para ejecutar los cálculos de este experimento.
5. Disponer del requisito de la calidad.
6. Necesitamos material volumétrico adecuado, es decir, pipetas
calibradas para poder hacer diluciones.
 ¿En qué Consiste el Protocolo?

Ensayos de una serie Las muestras

de muestras de deberán cubrir la
Medición en el
concentración mayor parte del
equipo
conocida o serie de intervalo de medición
muestras diluidas del fabricante.
 Muestra
cercana a
2mg/dL

Glucosa
2mg/dL - 500mg/dL

Muestra
cercana a
500mg/dL
¿Qué muestras altas pueden emplearse?

Estándares (Droga Soluciones

Terapéutica) Comerciales

Muestras de Muestra
Pacientes Suplementada
¿Qué muestras bajas pueden emplearse?
Solución Suero
Agua
Fisiológica Bovino

Una muestra sin o

con bajas
Albúmina
concentraciones de
analito

Diluyente recomendado
por el fabricante
Generalidades del Protocolo
• El Laboratorio debe garantizar que el personal responsable de la ejecución de este
protocolo está familiarizado con el funcionamiento del sistema y entiende el
procedimiento analítico.

• Las muestras deben estar libres de interferencias que puedan alterar los resultados
del procedimiento (ictericia, lipemia, hemólisis, etc.).

• Si hay varios tipos de matriz (orina, suero, LCR, Sangre Total, etc.), debe llevarse a
cabo un análisis diferente para cada tipo de muestra.

• Para la evaluación de las condiciones experimentales se deben manejar dos pool.

Uno de concentración cercana del límite inferior (Concentración Baja) y otro con
concentración cerca al Límite Superior (Concentración Alta)
Generalidades del Protocolo

• El diluyente elegido para diluir la muestra de alta concentración puede

tener un efecto sobre los resultados de la prueba.

• Las muestras deben ser analizadas en una sola corrida pero en las
condiciones de operación propias y normales del laboratorio.

• El laboratorio antes de realizar el protocolo debe definir el requisito de la

calidad, para la repetibilidad que busca garantizar y validar la
estandarización del protocolo de dilución y para la linealidad para
establecer el criterio de aceptabilidad del protocolo
¿Cómo vamos a hacer para verificar la linealidad de los
procedimientos de medida?
 ¿Cómo vamos a hacer para verificar la linealidad de los
procedimientos de medida?

MUESTRAS DE
PACIENTES: Protocolo
de Concentraciones
equidistantes
Esquemas de Dilución para las muestras
La concentración de cada pool se define con la siguiente fórmula:
Preparación de las diluciones

Nº Pool Volumen Concentración

Pool 1 0.8ml 40
Pool 2 0.8ml(0.6ml de pool 1 + 0.2ml pool 5) 60
Pool 3 0.8ml(0.4ml de pool 1 + 0.4ml pool 5) 80
Pool 4 0.8ml(0.2ml de pool 1 + 0.6ml pool 5) 100
Pool 5 0.8ml 120
Procesar Por Triplicado

Valor
Solución Dilución Valor 1 Valor 2 Valor 3
Asignado

C1 0 0 0 0 0

C2 25% C5*0.25 15 15 14

C3 50% C5*0.50 27 28 28

C4 75% C5*0.75 42 42 42

C5 100% 52 53 52 52
 Valor
Solución Dilución Valor 1 Valor 2 Valor 3
Asignado

C1 0 0 0 0 0

C2 25% 13 15 15 14

C3 50% 26 27 28 28

C4 75% 39 42 42 42

C5 100% 52 53 52 52
Graficar
Polinomio Orden 1
Polinomio Orden 2 o 3
 Ecuación Estadísticamente Error de No Clínicamente
Lineal Linealidad Lineal

Orden 1 SI 0 (cero) SI

Orden 2 o 3 NO Mayor al 50% del NO

ETa

Orden 2 o 3 NO Menor del 50% del SI

ETa
¿Qué hago cuándo el Método no es Estadísticamente
Lineal?

Error de no Linealidad

Deberá
ser Menor
al 50% RQ
Error de No Linealidad < 50% de ET

Quiere decir que la

Clínicamente
Pérdida de Linealidad que
Lineal genera un error
sistemático no está
siendo significativo
Error de No Linealidad > 50% de ET

Quiere decir que la

Pérdida de Linealidad que
genera un error
sistemático está siendo
Clínicamente significativo y no puedo
reportar resultados de
no Lineal
pacientes pues serían
afectados clínicamente
Entonces…

El error de no linealidad
es siempre error
sistemático (positivo o
negativo). Este error
sistemático será
aceptable si es menor al
50% del requisito de
calidad.
Asignado Corrida 1 Corrida 2 Corrida 3 Promedio Sesgo

0 0 5 10 5 5

100 95 100 105 100 0

200 200 195 205 200 0

300 310 300 290 300 0

400 380 390 400 390 10

500 470 460 480 470 30

[ ] 500mg/dl DS = 15 mg/dl
Bias = 30 mg/dl

ET = 60 mg/dl
< TEa = 50mg/dl

TE < TEa
Error Total (c) = BIAS + 2*SD
[ ] 400mg/dl DS = 12 mg/dl
Bias = 10 mg/dl

ET = 34 mg/dl < TEa = 40mg/dl

TE < TEa
Error Total (c) = BIAS + 2*SD
 Curva
Obtenida
Ensayo no
lineal desde el
punto de vista
estadístico
Linealidad Clínica vs. Linealidad estadística

Curva
Grado 3
Linealidad Clínica vs. Linealidad estadística

Error de no Unidades
Promedio
linealidad

Máximo error de no linealidad

X = 680 mg/dl
En concentración = 10.11mg/dl
En porcentaje = 1.49%
Linealidad Clínica vs. Linealidad estadística
Linealidad Clínica vs. Linealidad estadística

El procedimiento de medida es
clínicamente lineal en el rango
de concentraciones evaluado,
es decir, entre 0 y 500 mg/dL,
el método es clínicamente
lineal aunque no fue
estadísticamente lineal
 Ejemplo 1
Rango declarado hasta 150
Ejemplo 2
 Para Recordar…

• Un método estadísticamente lineal siempre es clínicamente lineal porque el

error de linealidad es 0

• Si el método no es estadísticamente lineal, tengo que evaluar el máximo

error de no linealidad, el cual deberá ser menor 50% ET para que sea
clínicamente lineal.

• Puedo separarme en mis muestras del límite superior del fabricante hasta en
un 20%.

• Siempre debo cubrir el 80% del rango declarado por el fabricante.

 No Olvide Que…..
• La linealidad es la habilidad dentro de un
rango dado, de obtener resultados que son
directamente proporcionales a la
concentración del analito en la muestra
testeada.

• Referida también como la respuesta final

analítica del sistema.

• Si al realizar la medición de diferentes

concentraciones graduales, al graficar se
observa una línea recta se dice que el
sistema es lineal