Instituto Tecnológico de Salina Cruz

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE SALINA CRUZ

CUADRO COMPARATIVO

“MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS”

INGENIERÍA QUÍMICA

ASIGNATURA:
ANÁLISIS INSTRUMENTAL

TEMA Nº3:
MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

PRESENTA:
LIZETH URBINA PINEDA
ALDRIN ALEXANDER
MELENDEZ FLORES
GRUPO IV F

PROFESOR:
M.E. MARGARITA JIMÉNEZ GUZMÁN

SALINA CRUZ, OAXACA MAYO DEL 2019

 CUADRO COMPARATIVO
MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

MÉTODO FUNDAMENTO FASE MÓVIL FASE

ESTACIONARIA
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en
los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que
pese a no ser una técnica potente no requiere de ningún
tipo de equipamiento. La fase estacionaria está
Cromatografía constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La
en papel muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas
gotas de la disolución y evaporando el disolvente. Luego
el disolvente empleado como fase móvil se hace
ascender por capilaridad. La separación se realiza en Líquido agua, un Papel de celulosa, papel
función de la afinidad de los solutos con las dos fases, las solvente orgánico o filtro.
más solubles en agua se quedarán cerca del punto donde una mezcla de
se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más ambos.
solubles en el disolvente llegarán más lejos.

La cromatografía de intercambio iónico se lleva a cabo con

empaques de columna que tiene grupos funcionales
cargados unidos a una matriz polimérica. Los grupos
Cromatografía funcionales enlazados permanentemente y asociados con
de intercambio contra iones de carga opuesta. El mecanismo de retención Líquido(polar) Resinas de intercambio
iónico más común es el intercambio simple de los iones de la
iónico.
muestra y de la fase móvil con el grupo cargado de la fase
estacionaria. En el caso de empaques cargados
negativamente sirven para intercambiar especies catiónicas.
*Intercambio aniónico: F.E. con carga positiva, une aniones,
bien los del disolvente (F.M.) o bien los de la muestra (de
ahí la palabra intercambio). *Intercambio catiónico: F.E. con
carga negativa, une cationes, bien los del disolvente (F.M.)
o bien los de la muestra.

La cromatografía en capa fina se basa en la preparación

de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido
sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los requisitos
esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un
dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, Líquido. Ácido Gel de sílice o alúmina,
otro para aplicar la capa de adsorbente, y una cámara en acético, agua, papel de celulosa.
Cromatografía
la que se desarrollen las placas cubiertas. Es preciso metanol, benceno etc.
en capa fina
también poder guardar con facilidad las placas
preparadas y una estufa para activarlas
Relleno de pequeñas
partículas de sílice o
La cromatografía de filtración en gel es una técnica que polímeros con red de
permite separar moléculas en función de su tamaño poros uniforme. Entre
molecular. La capacidad separadora reside ellos están los
Cromatografía fundamentalmente en el gel cuya matriz consta de un gran
de gel-filtración número de esferas porosas microscópicas. Cada gel se Líquido polímeros
macromoleculares
caracteriza por un rango de fraccionamiento que depende semirrígidos, los
del tamaño de sus poros. entrecruzados, las
sílices rígidas o las de
“poro controlado”.
 Es una técnica cromatográfica en la que la muestra se Generalmente está
Cromatografía volatiliza y se inyecta en la cabeza de un mechero de una constituida por una
de gas columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo Gas inerte columna de metil
de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de los otros (Nitrógeno o helio). polisiloxano o
tipos de cromatografía, la fase móvil no interactúa con las derivados de este.
moléculas del analito; su única función es la de transportar
el analito a través de la columna.

La cromatografía de afinidad separa las proteínas

(analitos) en función de su especificidad de fijación de
Cromatografía ligandos. Los ligandos de afinidad son moléculas
poliméricas que sirven de soporte porque están unidas
de afinidad
covalentemente sobre la columna cromatográfica o matriz
inerte que debe de tener una estructura de poro abierta y Líquido Partículas finamente
estabilidad en condiciones de cambio de pH, detergentes divididas de sílice o de
y agentes disociantes, para así, retener y adsorber alúmina.
específicamente a las proteínas, la fase estacionaria es
sólida. Estos ligandos se clasifican según su naturaleza
química o su selectividad para la retención de analitos,
esta última se clasifica en ligandos específicos
(anticuerpos) y generales (como las lecitinas).
 PARÁMETROS VENTAJAS Y APLICACIONES IMAGEN
CROMATOGRÁ DESVENTAJAS.
FICOS

Como medida en cromatografía Ventajas: Utilizada para análisis

sobre papel se emplea el Rf Presenta la ventaja de poder
cualitativo, medición
(Retención factor), el cual se utilizar miligramos y
de purezas,
define como el cociente de dividir microgramos. separación de
el recorrido de la sustancia por el colorantes , sustancia
Desventajas:
disolvente, esto es, la distancia La cromatografía en papel orgánica de naturaleza
media desde el origen hasta el requiere algún tiempo, no proteica,, clorofila,
centro de la mancha (X) dividida habitualmente se necesitan carotenos etc
por la distancia que media desde varias horas para
el origen hasta el frente del completarse.
disolvente (S).

El uso de las columnas de
exclusión aniónica, en su
modalidad con iones de calcio, se
extiende a la separación de
oligosacáridos
usando agua como eluyente a una Las muestras deben estar
temperatura de 90ºC, aplicando
también la separación por
exclusión
estérica.
Ventajas:
Alta capacidad
Alta resoluci0n Como aplicaciones de la
cromatografía iónica está el
análisis de drogas y sus
metabolitos, sueros,
Desventajas: conservantes de alimentos,
mezclas para vitaminas,
desalinizadas antes de ser azúcares, y preparaciones
aplicada a este tipo de farmacéuticas.
cromatografía.

Ventajas:
Cada compuesto tiene un Identificación en cantidades -Cromatografía de
Rf característico que depende del del orden en microgramos. soluciones con
disolvente empleado y del tipo de No se requieren cantidades aminoácidos.
grandes de muestra.
placa de CCF utilizada, pero es Sencillon, barato y con una -Determinar el grado de
independiente del recorrido del pureza alta. pureza de un compuesto.
disolvente. De esta manera se Desventajas:
puede ayudar a identificar unLas propiedades de la fase
compuesto en una mezcla al estacionaria pueden
comparar su Rf con el de un alterarse mediante la
compuesto conocido adición disoluciones
(preferiblemente cuando se hacentamponadoras para
eluir en la misma placa de CCF). mantener el pH deseado.

Ventajas: Se emplea para

El cromatograma es la curva de determinar masas
elución que se obtiene en una Tiempos de separación moleculares. Para
cromatografía y representa la cortos y muy bien definidos eliminar sustancias de
señal recogida por el detector en pequeño tamaño
respuesta a la concentración de Bandas estrechas que molecular de una
analito en función del tiempo o del permiten una buena muestra proteica. Como
volumen de fase móvil añadido. sensibilidad aplicación referida a
productos alimenticios en
cromatografía por
exclusión de tamaños.
 Ventajas:
Siempre es en columna, ya que es Alta resolución
la única manera de que la fase Velocidad Medioambientales:
móvil gaseosa se mantenga Fácilmente mide nano Análisis de pesticidas y
fluyendo, confinada dentro del gramos. herbicidas.
sistema. La columna puede estar Biociencia: drogas,
Desventajas:
rellena con la fase estacionaria, en fármacos, alcoholes y
Solo pueden contaminantes en sangre
forma semejante a la manipularse muestras
cromatografía líquida, o bien la volátiles.
fase estacionaria puede
depositarse sobre las paredes de
un tubo muy delgado (0.25mm de
diámetro) y largo (hasta 100m).

Cuando una mezcla cruda que Ventajas:

contiene miles de proteínas se
pasa a través de una columna,
sólo
una proteína reacciona con el
anticuerpo que está unido a la
columna. Después de lavar todos
los
otros solutos de la columna, la
proteína deseada es desplazada
del anticuerpo cambiando el pH ,
la fuerza iónica o la polaridad.
. catecolaminas,
Alta selectividad en el Separación de mezclas
mecanismo de retención proteicas por su afinidad
Campo de aplicación
o capacidad de unión a
restringido un determinado ligando.
Separación de un solo
soluto analito
Purificación de proteínas
Empleo de sistema de séricas, colagenasa,
baja presión. lactoferrina, proteínas
Desventajas: glanulares, interferón.
Mayor costo. Separación de
glicoproteínas,
nucleasas, nucleótidos,
carbohidratos, RNA de
transferencia.
 BIBLIOGRAFÍA

CAMPOS, C. M. (2003). INGENIERIA QUIMICA En C. M. CAMPOS, ANALISIS

INSTRUMENTAL (pág. 125). MEXICO: SANTILLANA.
MARIA C.J, J. R. (2005). MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS” . En J. R. MARIA
C.J, ANALISIS INSTRUMENTAL (pág. 85). ARGENTINA: VERNA.
GONZALEZ, I. M. (1998).INSTRUMENTACION. En I. M. GONZALEZ, INGENIERIA
QUIMICA (pág. 95). MEXICO: RENO.
LOPEZ, M. F. (1998). ANÁLISIS INSTRUMENTAL. En M. F. LOPEZ, L (pág. 47).
MARRUECOS: FORMUS.
MARIA C.J, J. R. (2005). MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS” . En J. R. MARIA
C.J, ANALISIS INSTRUMENTAL (pág. 85). ARGENTINA: VERNA.