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PREGUNTAS DE ANÁLISIS
1. Realice un esquema del proceso de extracción de DNA plasmídico e incluya
fotografías de cada paso con el fin de visualizar los cambios que sufre la célula
bacteriana hasta la obtención del DNA puro.
R//
2. Investigue en la literatura las siguientes preguntas:
a. ¿Para qué se utiliza la solución de SDS durante el proceso de extracción de
DNA plasmídico?
R// la solución de SDS se utiliza para como la mezcla detergente el SDS (sodio
dedecil sulfato), solubiliza proteínas, tejidos y membranas, evitando que una
cantidad significativa de ADN quede atrapada en los desechos o restos celulares
b. ¿Cuál es la función del acetato de potasio en el proceso de extracción de DNA
plasmídico?
R// la función del acetato de potasio es la de retirar las proteínas
desnaturalizadas y la mayoría de los polisacáridos, Por centrifugación se
separan tejidos, membranas, polisacáridos y proteínas de los ácidos nucleicos,
los cuales quedan en el sobrenadante.
c. ¿Cuál es la función del EDTA en la solución de TE que se utiliza para Re
suspender el DNA?
R// Los agentes quelantes (como el EDTA) se emplean para proteger el ADN de la acción de
enzimas nucleasas; ellos capturan los iones magnesio y no permiten que actúen como
cofactores de las nucleasas. Las altas concentraciones (5 M) de NaCl se emplean para
prevenir la contaminación de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN,
pudiendo inhibir la actividad de algunas enzimas como polimerasas, ligasas y endonucleasas
de restricción; la base para la separación de los polisacáridos de los ácidos nucleicos es su
solubilidad diferencial en presencia de las altas concentraciones de NaCl los polisacáridos
precipitan bajo la acción de fuerzas centrifugas. (7)
Dado que el Mg2+ es un cofactor requerido por la mayoría de las nucleasas, su secuestro
por el EDTA evita la degradación del DNA durante la preparación y la electroforesis.
3. Investigue un kit que pueda utilizarse para la extracción de DNA plasmídico, ¿Cuál
es la diferencia con la metodología utilizada en la práctica?
R// Protocolo del sistema de purificación de ADN Wizard® Plus SV Minipreps.
proporciona un método simple y confiable para el aislamiento rápido del ADN
plasmídico. Todo el procedimiento puede completarse en 30 minutos o menos,
dependiendo del número de muestras procesadas. Este sistema se puede utilizar para
aislar cualquier plásmido de los hospedadores de E. coli , pero funciona de manera más
 eficiente cuando el plásmido tiene un tamaño <20,000 pb. Los plásmidos purificados
pueden usarse sin manipulación adicional y pueden usarse para reacciones de
transcripción in vitro cuando se complementan con un inhibidor de ribonucleasa tal
como el inhibidor de ribonucleasa recombinante RNasin® (Cat. # N2511).
4. ¿Cuál es la diferencia entre la extracción de DNA plasmídico y una extracción de
DNA?

5. Investigue un artículo científico en donde hayan usado un plásmido para clonación,

¿Qué plásmido utilizaron? (Anexe cita del artículo)

Bibliografia

Howell S.H., THE ISOLATION AND ANALYSIS OF DNA FROM EUKARYOTIC

CELLS. In Molecular Techniques and Approaches in Developmental Biology, Chrispeels
M.J., Ed. Wiley-Interscience Publication, NY p 127- 130., 1973

(7) Howell S.H., THE ISOLATION AND ANALYSIS OF DNA FROM EUKARYOTIC
CELLS. In Molecular Techniques and Approaches in Developmental Biology, Chrispeels
M.J., Ed. Wiley-Interscience Publication, NY p 127- 130., 1973

https://worldwide.promega.com/resources/protocols/technical-bulletins/0/wizard-plus-sv-
minipreps-dna-purification-system-protocol/