tema 4 Genética forense

1. ¿QUÉ ES LA GENÉTICA FORENSE?

Con la denominación de genética forense se define el uso de ciertas técnicas
empleadas en genética para la identificación de los individuos en base al análisis del ADN.
El ácido desoxirribonucleico o ADN, es una sustancia química que se encuentra en el núcleo
de todas las células del cuerpo y permanece invariable; por ello en la actualidad es muy
usado en ciencia forense como una herramienta fundamental para la determinación del
vínculo filial ya que el ADN proviene un 50% del óvulo materno y, el 50% restante, del
espermatozoide paterno.
La función del ADN dentro de la célula es transmitir los caracteres hereditarios y esto
lo realiza ordenándole a la célula (codificando) que fabrique determinadas proteínas. A un
sector de la cadena de ADN que codifica la fabricación de una proteína se la denomina gen.
Por ejemplo, el color de los ojos, color del pelo, grupo sanguíneo, etc., son manifestaciones
de los genes que poseemos. Los genes de todos los seres humanos son poco variables y
constituyen un gran porcentaje de la información contenida en la molécula de ADN; la
información restante, incluye sectores que pueden exhibir un cierto grado de variabilidad
entre los individuos. En consecuencia, todos los seres humanos tenemos sectores del ADN
en común y otros que no lo son.
El llamado análisis de ADN es un conjunto de técnicas utilizadas para detectar
sectores en la cadena de ADN que son variables en la población. Estas regiones son
denominadas regiones polimórficas o polimorfismos. Al analizar un determinado número
de regiones polimórficas la probabilidad de que dos individuos sean genéticamente iguales
es prácticamente nula, excepto en los gemelos univitelinos.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico 47

Tema 4. Genética forense
 TEMA 4 Genética forense

1. ¿QUÉ ES LA GENÉTICA FORENSE?

Con la denominación de genética forense se define el uso de ciertas técnicas
empleadas en genética para la identificación de los individuos en base al análisis del ADN.
El ácido desoxirribonucleico o ADN, es una sustancia química que se encuentra en el núcleo
de todas las células del cuerpo y permanece invariable; por ello en la actualidad es muy
usado en ciencia forense como una herramienta fundamental para la determinación del
vínculo filial ya que el ADN proviene un 50% del óvulo materno y, el 50% restante, del
espermatozoide paterno.
La función del ADN dentro de la célula es transmitir los caracteres hereditarios y esto
lo realiza ordenándole a la célula (codificando) que fabrique determinadas proteínas. A un
sector de la cadena de ADN que codifica la fabricación de una proteína se la denomina gen.
Por ejemplo, el color de los ojos, color del pelo, grupo sanguíneo, etc., son manifestaciones
de los genes que poseemos. Los genes de todos los seres humanos son poco variables y
constituyen un gran porcentaje de la información contenida en la molécula de ADN; la
información restante, incluye sectores que pueden exhibir un cierto grado de variabilidad
entre los individuos. En consecuencia, todos los seres humanos tenemos sectores del ADN
en común y otros que no lo son.
El llamado análisis de ADN es un conjunto de técnicas utilizadas para detectar
sectores en la cadena de ADN que son variables en la población. Estas regiones son
denominadas regiones polimórficas o polimorfismos. Al analizar un determinado número
de regiones polimórficas la probabilidad de que dos individuos sean genéticamente iguales
es prácticamente nula, excepto en los gemelos univitelinos.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO 47

Tema 4. Genética forense
 La hemogenética forense nace a principios del siglo pasado, cuando Karl Landsteiner
describe el sistema ABO de los eritrocitos, y Von Durgen y Hirschfeld descubren su
transmisión hereditaria. Esta ciencia surgió como una rama de la Criminalística cuyo
objetivo era la identificación genética tanto en casos de investigación criminal como en
estudios biológicos de la paternidad. Inicialmente, las investigaciones se centraban en el
estudio de antígenos eritrocitarios (sistema ABO, Rh, MN), enzimas eritrocitarias y sistema
HLA. Con el estudio de dichos marcadores podía incluirse o excluirse a una persona como
posible sospechoso por poseer una combinación genética igual o diferente a la del vestigio
biológico hallado en el lugar de los hechos.
Pero fue a mediados del siglo pasado cuando gracias al descubrimiento del ADN
y de su estructura, y al posterior avance en las técnicas de análisis de dicha molécula,
que la Hemogenética Forense evolucionó considerablemente hasta el punto de que hoy
en día puede hablarse de una nueva subespecialidad dentro de la Medicina Forense: la
Genética Forense.
Esta subespecialidad se centra básicamente en tres áreas:
- Identificación de personas desaparecidas a partir del cadáver.
- Investigación de la filiación, tanto desde el punto de vista de la reclamación
como de la impugnación.
- Criminología, análisis de restos orgánicos como pelos, semen, saliva, sangre,
etc., que han quedado en la escena de un crimen o de un delito sexual.

Para realizar su objetivo la Genética Forense emplea dos técnicas principalmente:

la RFLPs (Fragmentos de Restricción de Longitud Polimórfica) y la PCR. La elección de la
técnica a aplicar estará determinada por la cantidad y calidad del ADN presente, siendo la
PCR la más utilizada, ya que la RFLPs presenta grandes restricciones en estos aspectos.
Estas limitaciones son superadas por la PCR o amplificación en cadena de la
polimerasa, ya que ésta permite amplificar más de un millón de veces una muestra de ADN.
Con el uso de la PCR muestras tan mínimas como pueden ser las halladas en un pelo con
raíz, una minúscula mancha de sangre o semen e incluso caspa, son suficientes en muchos
casos para llevar a cabo un análisis de identificación genética. Las regiones o fragmentos
utilizados son los llamados marcadores genéticos, microsatélites o STRs.
Estos marcadores genéticos son regiones conocidas del ADN, muy variables de un
individuo a otro y que se heredan sin cambios de una generación a la siguiente. A las
distintas formas heredables de estos marcadores genéticos se les denomina alelos, por lo
tanto constituyen una herramienta muy valiosa en los estudios de identificación genética
y filiación ya que cada individuo tendrá unos marcadores genéticos distintos a los del
resto, tendrá sus propios alelos.

48 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico

Tema 4. Genética forense
 La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es una técnica de biología molecular
mediante la cual un pequeño fragmento de ácido desoxirribonucleico se clona o duplica
varias veces para obtener copias múltiples.
La PCR fue ideada por el bioquímico estadounidense Kary B. Mullis en 1983 y
desarrollada posteriormente por Mullis y su colaborador Fred A. Faloona en la Cetus
Corporation de Emeryville, California. Aunque la utilidad de esta técnica no se reconoció
inmediatamente, en 1991 su uso ya se había generalizado. En 1993 Mullis obtuvo el Premio
Nobel de Química por este trabajo.
La PCR opera en forma de ciclos. Cada ciclo duplica la cantidad de ADN, por lo que
permite obtener hasta mil millones de copias de un sólo fragmento en unas pocas horas.
La técnica es sencilla y pueden utilizarla científicos sin demasiada formación en biología
molecular.
La reacción en cadena de la polimerasa imita el fenómeno de replicación o
reproducción del ADN que ocurre de forma natural en las células vivas. La mayor parte
del ADN es de doble cadena, es decir, cada cadena de ADN está apareada con otra
complementaria. Durante la replicación las dos cadenas se separan y una enzima (una
proteína que inicia reacciones químicas) especializada llamada polimerasa hace una copia
de cada una de las cadenas, utilizando la original como plantilla o modelo. Normalmente
este proceso de copia tiene lugar cuando la célula se divide y da lugar a la formación de
un par de cadenas hijas por cada una de las cadenas parentales.
La polimerasa necesita otros dos ingredientes para copiar ADN. El primero es una
reserva de los cuatro bloques básicos que constituyen la molécula de ADN, llamados
nucleótidos o bases (ATP, GTP, CTP, TTP). El segundo es un cebador oligonucleotídico. La
PCR utiliza estos mismos ingredientes para copiar ADN en una ampolla.
La reacción tiene lugar en tres fases:
- Desnaturalización: la plantilla o fragmento original de ADN se calienta
hasta una temperatura de 90º a 95º C durante 30 segundos; ésto provoca la
separación de las dos cadenas.
- Templado: la temperatura de la mezcla se rebaja hasta 55º C durante 20
segundos para que los cebadores oligonucleotídicos se enlacen con el ADN
escindido.
- Polimerización: la temperatura de la mezcla se eleva hasta 75° C para que
la polimerasa copie rápidamente la molécula de ADN.

Estas tres fases tienen lugar en la misma ampolla y constituyen un ciclo completo
de PCR, que se realiza en menos de dos minutos. Teóricamente, el ciclo de PCR se puede
repetir sin límite, pero la polimerasa, los nucleótidos y los cebadores suelen renovarse al
cabo de unos 30 ciclos. Estos 30 ciclos, que duran menos de tres horas, bastan para producir
mil millones de copias de ADN.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico 49

Tema 4. Genética forense
 La polimerasa utilizada en los primeros experimentos de PCR resultaba fácilmente
destruida por el calor, lo que obligaba a añadir más enzimas en cada ciclo para sustituir a la
inactivada por las elevadas temperaturas de la primera fase. Pero en las versiones modernas
de la PCR se utiliza una polimerasa termoestable llamada Taq polimerasa, extraida de una
bacteria termófila como esta proteína no resulta destruida por las elevadas temperaturas
a las que transcurre la PCR, basta con añadirla una vez, al principio de la reacción. La Taq
polimerasa hoy en día se fabrica con bacterias modificadas genéticamente.
El uso de la PCR exige mucho cuidado. Lo más importante es evitar la contaminación
de la mezcla reactiva. Es tan sensible, que permite multiplicar accidentalmente cantidades
mínimas de ADN contaminante. Se utilizan procedimientos especiales para evitar la
contaminación.
Una vez amplificado el ADN, los fragmentos resultantes son separados por medio de
un proceso de electroforesis, proceso en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada
con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de
una matriz gelatinosa. La electroforesis consta de las siguientes etapas:
- El ADN extraído de la muestra se trata con una endonucleasa de restricción,
que es una enzima que corta el ADN en donde tenga una secuencia
característica. La enzima que se usa más frecuentemente para el análisis
legal es HaeIII, que corta el ADN en la secuencia 5’-GGCC-3’.
- Tras la digestión del ADN, los fragmentos resultantes se separan según su
tamaño mediante electroforesis en geles de agarosa, que es un carbohidrato
extraído de un alga. Durante la electroforesis, las moléculas de ADN que
poseen carga negativa, migran hacia el electrodo positivo. Al avanzar las
moléculas de ADN, su velocidad de migración se ve reducida por la matriz
del gel de agarosa. Las moléculas menores se mueven más deprisa a través de
los poros del gel que las de mayor tamaño. Como resultado, se produce una
separación continua de los fragmentos de ADN de acuerdo con su tamaño,
de modo que los fragmentos más pequeños avanzan la mayor distancia con
referencia al origen o punto de aplicación de la muestra.

Debido a que se analizan regiones polimórficas que varían de un individuo a otro

según la distribución de nucleótidos, éstas describen distintas distribuciones de las bandas
originadas por la electroforesis de acuerdo al peso de los fragmentos, llamada huella
genética.
La ciencia ha entrado en los ámbitos judicial y policial por la puerta de las
investigaciones de crímenes violentos y de desaparecidos, pero su uso no ha hecho más
que empezar.
El procedimiento de investigación para la identificación forense comienza cuando
se comparan patrones genéticos del sospechoso o la víctima, con aquellos derivados de

50 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico

Tema 4. Genética forense
una muestra o evidencia; con sólo uno de los dos alelos que sean distintos, ya es suficiente
para excluir en forma categórica al sospechoso.
El examen de estos polimorfismos o de patrones característicos presentes en las
secuencias de nucleótidos es hoy la herramienta más poderosa para confirmar o descartar
la existencia de parentesco entre individuos.
El análisis del ADN nuclear por métodos como la técnica PCR, permite detectar
determinados fragmentos de ADN que difieren en su longitud, según los individuos, porque
se trata de secuencias cuyo número varía de una a otra persona.
Estos polimorfismos, se heredan siguiendo las leyes de Mendel y dan lugar, en el
análisis por electroforesis que separa los segmentos de ADN por su masa o longitud, a
un patrón de bandas que constituye lo que se ha llamado huella genética. Este patrón,
resulta de la combinación de patrones de bandas de los padres, por lo tanto, de acuerdo
a las coincidencias con ellos se puede excluir o incluir a un presunto padre.
El uso adecuado de esta metodología permite establecer la inclusión de la paternidad
con una certeza mayor del 99,99%.
Existe un ADN, el de las mitocondrias (ADN mt), que se hereda sólo a través de
la madre. El ADN mitocondrial está constituido por dos hebras circulares: H (heavy) y L

(light). Cada molécula se aloja en los recovecos externos de la membrana interna de la

mitocondria. El may or peso de la hebra exterior se debe a su adjunción a esta membrana.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico 51

Tema 4. Genética forense
Una burbuja de iniciación en la cadena pesada, llamada D-loop, parece ser un mecanismo
de control. Es una región polimórfica con dos regiones hipervariables, muy útiles para
seguir linajes maternos, siendo por lo tanto apropiada para determinar la individualidad
genética. Cabe señalar que si bien esta región evoluciona con la suficiente rapidez como
para que pueda tener una función caracterizadora, lo hace en una medida tal que permite
el reconocimiento de patrones comunes con parientes maternos próximos.
La amplificación del loop D mediante la técnica PCR y su posterior secuenciación,
permiten evaluar si dos individuos son hijos de la misma madre.
La probabilidad de que dos personas no emparentadas tengan la misma secuencia de
nucleótidos en el loop D del ADNmt es muy baja, sólo del 0,27%. Sin embargo, a pesar de
la importancia implícita en este hecho, es otro el rasgo que concede un valor inestimable
a este método. Cuando hay sólo un pariente sobreviviente y éste se encuentra a más de
una generación de distancia del individuo en cuestión, la identidad sólo puede ser resuelta
mediante este procedimiento, en cuyo caso el parentesco debe ocurrir por vía materna.
Este método ha sido de mucha utilidad para identificar cadáveres NN hallados en fosas
comunes.
Por medio de la utilización de las pruebas de ADN se han podido resolver casos
emblemáticos en muchos países, como por ejemplo casos de asesinato, y se han logrado
identificar los restos de detenidos desaparecidos. En ambos casos existía la posibilidad de
comparar la huella genética con las muestras aportadas por sus familiares, lo que en el
caso de los segundos se ha estructurado en un banco de ADN para evitar que los decesos
de las parientes de más edad impidan seguir este arduo proceso.
Hay crímenes que quedan en la memoria colectiva como la idea de que la justicia
no llegó a la verdad, que se castigó a inocentes o que no pagaron todos los culpables. Ésta
es otra aplicación de la Genética Forense, demostrar que ciertas personas condenadas no
son las responsables de los crímenes.
La incorporación de las pruebas de ADN ha revolucionado la investigación policial y
los sistemas de identificación, gracias a el descubrimiento del ADN y la creación de técnicas
de identificación de individuos, hoy en día se pueden resolver casos que hace algunos años
atrás hubieran quedado en el misterio dando un consuelo a los familiares de las victimas
pagando los verdaderos responsables del crimen, o en el caso de identificación de cuerpos,
los familiares tienen la seguridad de que realmente son sus familiares.
Los hijos pueden tener las claves para saber a través de una sencilla prueba quien es
su padre o si no lo es. También se benefician tanto a las mujeres que buscan reconocimiento
de filiación para sus hijos como los hombres que desean demostrar que están siendo
acusados falsamente de ser padres biológicos de un niño que es imputado como suyo.
Se cree que los estudios realizados pueden ser de gran utilidad no sólo en el campo
forense para el esclarecimiento de hechos delictivos, identificación de cadáveres y pruebas

52 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico

Tema 4. Genética forense
de paternidad, sino también en el entorno de la zoología, la antropología, la paleontología y
la arqueología, a pesar de que el estudio de ADN antiguo ha generado siempre controversia
debido a la elevada probabilidad de contaminación.
Éste es un campo en el cual queda mucho por descubrir.

2. GLOSARIO
- ADN (ácido desoxirribonucleico): un ácido nucleico compuesto de dos
cadenas polinucleotídicas que se disponen alrededor de un eje central
formando una doble hélice, capaz de autorreplicarse y codificar la síntesis de
ARN. Lugar donde está “depositada” la información genética. Ácido nucleico
que funciona como soporte físico de la herencia en el 99% de las especies.
La molécula, bicatenaria, esta formada por dos cadenas antiparalelas y
complementarias entre sí. Su unidad básica, el nucleótido, consiste en una
molécula del azúcar desoxirribosa, un grupo fosfato, y una de estas cuatro
bases nitrogenadas: adenina, timina, citosina y guanina.
- Alelo (del griego allelon = “el uno al otro”, recíprocamente): formas
alternativas de un gen, se hereda separadamente de cada padre (p. ej. en el
locus para el color de ojos puede haber un alelo para ojos azules o uno para
ojos negros). Uno o más estados alternativos de un gen.
- Amplificación: un aumento del número de copias de un fragmento específico
de ADN. Puede producirse in vivo o in vitro. Ver clonación, reacción en cadena
de la polimerasa.
- Cebador (en inglés primer): cadena polinucleotídica corta a la cual se
agregan nuevos desoxirribonucleótidos por acción de la ADN polimerasa.
- Doble hélice: la forma que toman las dos hebras de ADN cuando se
encuentran unidas.
- Endonucleasa (del griego endon = dentro; asa = sufijo que indica actividad
enzimática): enzima que corta una molécula de ADN en un sitio interno de
la secuencia de nucleotídica.
- Endonucleasa de restricción: enzima que reconoce específicamente
determinadas secuencias y corta a la molécula de ADN en ese sitio. De las
bacterias se obtuvieron más de 400 enzimas que reconocen mas de 150
diferentes secuencias de ADN (sitios de corte por enzimas de restricción).
- Genes (del griego genos = nacimiento, raza; del latín genus = raza, origen):
segmentos específicos de ADN que controlan las estructuras y funciones
celulares; la unidad funcional de la herencia. Secuencia de bases de ADN
que usualmente codifican para una secuencia polipetídica de aminoácidos.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico 53

Tema 4. Genética forense
 - Genética: el estudio de la herencia de los caracteres.
- Locus (del latín: lugar, plural loci): posición que ocupa un determinado gen
en un cromosoma.
- Marcador (del inglés marker; pob. del italiano marcare = “señalar una
cosa para que se distinga de otra”): una posición física identificable en
un cromosoma cuya herencia puede seguirse (p.ej. un gen o un sitio que
corta una enzima de restricción). Los marcadores pueden ser una región del
ADN que se expresa (gen) o un segmento de de ADN que no se conoce que
codifica pero que se puede seguir su manera de heredarse( ver RFLP iniciales
del inglés Restriction Fragment Lenght Polymorphism).
- Polimerasa (ADN o ARN): enzimas que catalizan la síntesis de ácidos nucléicos
en base a templados preexistentes, utilizando ribonucleótidos para el ARN y
desoxirribonucleótidos para el ARN.
- Polimorfismo: diferencia entre las secuencia de ADN entre individuos.
- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR, de las iniciales en inglés
Polimerase Chain Reaction): método de amplificación de una secuencia de
bases del ADN usando una polimerasa termoestable y dos cebadores (“primers”)
de 20 bases de largo de la secuencia a ser amplificada, uno complementario
de las secuencias final de la hebra (+) y otro de la otra secuencia final de
la hebra (-). En razón que las nuevas cadenas de ADN sintetizadas pueden
subsecuentemente servir de moldes adicionales para la misma secuencia de
cebadores, sucesivos “ciclos” de anillado de cebadores, alargamiento de la
cadena y disociación del ADN bicatenario formado producen rápidamente
grandes cantidades de la secuencia original (amplificación). La PCR puede
utilizarse para detectar una secuencia definida en una muestra de ADN.
- RFLP: (del inglés restriction-fragment-length polymorphisms: polimorfismo
de longitud de los fragmentos de restricción): bajo esta sigla se reconocen
las variaciones entre individuos de la longitud de los fragmentos de ADN
cortados por enzimas de restricción. Este hecho generalmente es causado
por mutaciones en el sitio de corte.
- Secuencia de bases: el orden de las bases de los nucleótidos en una molécula
de ADN.

54 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN genética para téc. esp. en laboratorio clínico

Tema 4. Genética forense
 La hemogenética forense nace a principios del siglo pasado, cuando Karl Landsteiner
describe el sistema ABO de los eritrocitos, y Von Durgen y Hirschfeld descubren su
transmisión hereditaria. Esta ciencia surgió como una rama de la Criminalística cuyo
objetivo era la identificación genética tanto en casos de investigación criminal como en
estudios biológicos de la paternidad. Inicialmente, las investigaciones se centraban en el
estudio de antígenos eritrocitarios (sistema ABO, Rh, MN), enzimas eritrocitarias y sistema
HLA. Con el estudio de dichos marcadores podía incluirse o excluirse a una persona como
posible sospechoso por poseer una combinación genética igual o diferente a la del vestigio
biológico hallado en el lugar de los hechos.
Pero fue a mediados del siglo pasado cuando gracias al descubrimiento del ADN
y de su estructura, y al posterior avance en las técnicas de análisis de dicha molécula,
que la Hemogenética Forense evolucionó considerablemente hasta el punto de que hoy
en día puede hablarse de una nueva subespecialidad dentro de la Medicina Forense: la
Genética Forense.
Esta subespecialidad se centra básicamente en tres áreas:
- Identificación de personas desaparecidas a partir del cadáver.
- Investigación de la filiación, tanto desde el punto de vista de la reclamación
como de la impugnación.
- Criminología, análisis de restos orgánicos como pelos, semen, saliva, sangre,
etc., que han quedado en la escena de un crimen o de un delito sexual.

Para realizar su objetivo la Genética Forense emplea dos técnicas principalmente:

la RFLPs (Fragmentos de Restricción de Longitud Polimórfica) y la PCR. La elección de la
técnica a aplicar estará determinada por la cantidad y calidad del ADN presente, siendo la
PCR la más utilizada, ya que la RFLPs presenta grandes restricciones en estos aspectos.
Estas limitaciones son superadas por la PCR o amplificación en cadena de la
polimerasa, ya que ésta permite amplificar más de un millón de veces una muestra de ADN.
Con el uso de la PCR muestras tan mínimas como pueden ser las halladas en un pelo con
raíz, una minúscula mancha de sangre o semen e incluso caspa, son suficientes en muchos
casos para llevar a cabo un análisis de identificación genética. Las regiones o fragmentos
utilizados son los llamados marcadores genéticos, microsatélites o STRs.
Estos marcadores genéticos son regiones conocidas del ADN, muy variables de un
individuo a otro y que se heredan sin cambios de una generación a la siguiente. A las
distintas formas heredables de estos marcadores genéticos se les denomina alelos, por lo
tanto constituyen una herramienta muy valiosa en los estudios de identificación genética
y filiación ya que cada individuo tendrá unos marcadores genéticos distintos a los del
resto, tendrá sus propios alelos.

48 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO

Tema 4. Genética forense
 La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es una técnica de biología molecular
mediante la cual un pequeño fragmento de ácido desoxirribonucleico se clona o duplica
varias veces para obtener copias múltiples.
La PCR fue ideada por el bioquímico estadounidense Kary B. Mullis en 1983 y
desarrollada posteriormente por Mullis y su colaborador Fred A. Faloona en la Cetus
Corporation de Emeryville, California. Aunque la utilidad de esta técnica no se reconoció
inmediatamente, en 1991 su uso ya se había generalizado. En 1993 Mullis obtuvo el Premio
Nobel de Química por este trabajo.
La PCR opera en forma de ciclos. Cada ciclo duplica la cantidad de ADN, por lo que
permite obtener hasta mil millones de copias de un sólo fragmento en unas pocas horas.
La técnica es sencilla y pueden utilizarla científicos sin demasiada formación en biología
molecular.
La reacción en cadena de la polimerasa imita el fenómeno de replicación o
reproducción del ADN que ocurre de forma natural en las células vivas. La mayor parte
del ADN es de doble cadena, es decir, cada cadena de ADN está apareada con otra
complementaria. Durante la replicación las dos cadenas se separan y una enzima (una
proteína que inicia reacciones químicas) especializada llamada polimerasa hace una copia
de cada una de las cadenas, utilizando la original como plantilla o modelo. Normalmente
este proceso de copia tiene lugar cuando la célula se divide y da lugar a la formación de
un par de cadenas hijas por cada una de las cadenas parentales.
La polimerasa necesita otros dos ingredientes para copiar ADN. El primero es una
reserva de los cuatro bloques básicos que constituyen la molécula de ADN, llamados
nucleótidos o bases (ATP, GTP, CTP, TTP). El segundo es un cebador oligonucleotídico. La
PCR utiliza estos mismos ingredientes para copiar ADN en una ampolla.
La reacción tiene lugar en tres fases:
- Desnaturalización: la plantilla o fragmento original de ADN se calienta
hasta una temperatura de 90º a 95º C durante 30 segundos; ésto provoca la
separación de las dos cadenas.
- Templado: la temperatura de la mezcla se rebaja hasta 55º C durante 20
segundos para que los cebadores oligonucleotídicos se enlacen con el ADN
escindido.
- Polimerización: la temperatura de la mezcla se eleva hasta 75° C para que
la polimerasa copie rápidamente la molécula de ADN.

Estas tres fases tienen lugar en la misma ampolla y constituyen un ciclo completo
de PCR, que se realiza en menos de dos minutos. Teóricamente, el ciclo de PCR se puede
repetir sin límite, pero la polimerasa, los nucleótidos y los cebadores suelen renovarse al
cabo de unos 30 ciclos. Estos 30 ciclos, que duran menos de tres horas, bastan para producir
mil millones de copias de ADN.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO 49

Tema 4. Genética forense
 La polimerasa utilizada en los primeros experimentos de PCR resultaba fácilmente
destruida por el calor, lo que obligaba a añadir más enzimas en cada ciclo para sustituir a la
inactivada por las elevadas temperaturas de la primera fase. Pero en las versiones modernas
de la PCR se utiliza una polimerasa termoestable llamada Taq polimerasa, extraida de una
bacteria termófila como esta proteína no resulta destruida por las elevadas temperaturas
a las que transcurre la PCR, basta con añadirla una vez, al principio de la reacción. La Taq
polimerasa hoy en día se fabrica con bacterias modificadas genéticamente.
El uso de la PCR exige mucho cuidado. Lo más importante es evitar la contaminación
de la mezcla reactiva. Es tan sensible, que permite multiplicar accidentalmente cantidades
mínimas de ADN contaminante. Se utilizan procedimientos especiales para evitar la
contaminación.
Una vez amplificado el ADN, los fragmentos resultantes son separados por medio de
un proceso de electroforesis, proceso en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada
con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de
una matriz gelatinosa. La electroforesis consta de las siguientes etapas:
- El ADN extraído de la muestra se trata con una endonucleasa de restricción,
que es una enzima que corta el ADN en donde tenga una secuencia
característica. La enzima que se usa más frecuentemente para el análisis
legal es HaeIII, que corta el ADN en la secuencia 5’-GGCC-3’.
- Tras la digestión del ADN, los fragmentos resultantes se separan según su
tamaño mediante electroforesis en geles de agarosa, que es un carbohidrato
extraído de un alga. Durante la electroforesis, las moléculas de ADN que
poseen carga negativa, migran hacia el electrodo positivo. Al avanzar las
moléculas de ADN, su velocidad de migración se ve reducida por la matriz
del gel de agarosa. Las moléculas menores se mueven más deprisa a través de
los poros del gel que las de mayor tamaño. Como resultado, se produce una
separación continua de los fragmentos de ADN de acuerdo con su tamaño,
de modo que los fragmentos más pequeños avanzan la mayor distancia con
referencia al origen o punto de aplicación de la muestra.

Debido a que se analizan regiones polimórficas que varían de un individuo a otro

según la distribución de nucleótidos, éstas describen distintas distribuciones de las bandas
originadas por la electroforesis de acuerdo al peso de los fragmentos, llamada huella
genética.
La ciencia ha entrado en los ámbitos judicial y policial por la puerta de las
investigaciones de crímenes violentos y de desaparecidos, pero su uso no ha hecho más
que empezar.
El procedimiento de investigación para la identificación forense comienza cuando
se comparan patrones genéticos del sospechoso o la víctima, con aquellos derivados de

50 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO

Tema 4. Genética forense
una muestra o evidencia; con sólo uno de los dos alelos que sean distintos, ya es suficiente
para excluir en forma categórica al sospechoso.
El examen de estos polimorfismos o de patrones característicos presentes en las
secuencias de nucleótidos es hoy la herramienta más poderosa para confirmar o descartar
la existencia de parentesco entre individuos.
El análisis del ADN nuclear por métodos como la técnica PCR, permite detectar
determinados fragmentos de ADN que difieren en su longitud, según los individuos, porque
se trata de secuencias cuyo número varía de una a otra persona.
Estos polimorfismos, se heredan siguiendo las leyes de Mendel y dan lugar, en el
análisis por electroforesis que separa los segmentos de ADN por su masa o longitud, a
un patrón de bandas que constituye lo que se ha llamado huella genética. Este patrón,
resulta de la combinación de patrones de bandas de los padres, por lo tanto, de acuerdo
a las coincidencias con ellos se puede excluir o incluir a un presunto padre.
El uso adecuado de esta metodología permite establecer la inclusión de la paternidad
con una certeza mayor del 99,99%.
Existe un ADN, el de las mitocondrias (ADN mt), que se hereda sólo a través de
la madre. El ADN mitocondrial está constituido por dos hebras circulares: H (heavy) y L

(light). Cada molécula se aloja en los recovecos externos de la membrana interna de la

mitocondria. El may or peso de la hebra exterior se debe a su adjunción a esta membrana.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO 51

Tema 4. Genética forense
Una burbuja de iniciación en la cadena pesada, llamada D-loop, parece ser un mecanismo
de control. Es una región polimórfica con dos regiones hipervariables, muy útiles para
seguir linajes maternos, siendo por lo tanto apropiada para determinar la individualidad
genética. Cabe señalar que si bien esta región evoluciona con la suficiente rapidez como
para que pueda tener una función caracterizadora, lo hace en una medida tal que permite
el reconocimiento de patrones comunes con parientes maternos próximos.
La amplificación del loop D mediante la técnica PCR y su posterior secuenciación,
permiten evaluar si dos individuos son hijos de la misma madre.
La probabilidad de que dos personas no emparentadas tengan la misma secuencia de
nucleótidos en el loop D del ADNmt es muy baja, sólo del 0,27%. Sin embargo, a pesar de
la importancia implícita en este hecho, es otro el rasgo que concede un valor inestimable
a este método. Cuando hay sólo un pariente sobreviviente y éste se encuentra a más de
una generación de distancia del individuo en cuestión, la identidad sólo puede ser resuelta
mediante este procedimiento, en cuyo caso el parentesco debe ocurrir por vía materna.
Este método ha sido de mucha utilidad para identificar cadáveres NN hallados en fosas
comunes.
Por medio de la utilización de las pruebas de ADN se han podido resolver casos
emblemáticos en muchos países, como por ejemplo casos de asesinato, y se han logrado
identificar los restos de detenidos desaparecidos. En ambos casos existía la posibilidad de
comparar la huella genética con las muestras aportadas por sus familiares, lo que en el
caso de los segundos se ha estructurado en un banco de ADN para evitar que los decesos
de las parientes de más edad impidan seguir este arduo proceso.
Hay crímenes que quedan en la memoria colectiva como la idea de que la justicia
no llegó a la verdad, que se castigó a inocentes o que no pagaron todos los culpables. Ésta
es otra aplicación de la Genética Forense, demostrar que ciertas personas condenadas no
son las responsables de los crímenes.
La incorporación de las pruebas de ADN ha revolucionado la investigación policial y
los sistemas de identificación, gracias a el descubrimiento del ADN y la creación de técnicas
de identificación de individuos, hoy en día se pueden resolver casos que hace algunos años
atrás hubieran quedado en el misterio dando un consuelo a los familiares de las victimas
pagando los verdaderos responsables del crimen, o en el caso de identificación de cuerpos,
los familiares tienen la seguridad de que realmente son sus familiares.
Los hijos pueden tener las claves para saber a través de una sencilla prueba quien es
su padre o si no lo es. También se benefician tanto a las mujeres que buscan reconocimiento
de filiación para sus hijos como los hombres que desean demostrar que están siendo
acusados falsamente de ser padres biológicos de un niño que es imputado como suyo.
Se cree que los estudios realizados pueden ser de gran utilidad no sólo en el campo
forense para el esclarecimiento de hechos delictivos, identificación de cadáveres y pruebas

52 CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO

Tema 4. Genética forense
de paternidad, sino también en el entorno de la zoología, la antropología, la paleontología y
la arqueología, a pesar de que el estudio de ADN antiguo ha generado siempre controversia
debido a la elevada probabilidad de contaminación.
Éste es un campo en el cual queda mucho por descubrir.

2. GLOSARIO
- ADN (ácido desoxirribonucleico): un ácido nucleico compuesto de dos
cadenas polinucleotídicas que se disponen alrededor de un eje central
formando una doble hélice, capaz de autorreplicarse y codificar la síntesis de
ARN. Lugar donde está “depositada” la información genética. Ácido nucleico
que funciona como soporte físico de la herencia en el 99% de las especies.
La molécula, bicatenaria, esta formada por dos cadenas antiparalelas y
complementarias entre sí. Su unidad básica, el nucleótido, consiste en una
molécula del azúcar desoxirribosa, un grupo fosfato, y una de estas cuatro
bases nitrogenadas: adenina, timina, citosina y guanina.
- Alelo (del griego allelon = “el uno al otro”, recíprocamente): formas
alternativas de un gen, se hereda separadamente de cada padre (p. ej. en el
locus para el color de ojos puede haber un alelo para ojos azules o uno para
ojos negros). Uno o más estados alternativos de un gen.
- Amplificación: un aumento del número de copias de un fragmento específico
de ADN. Puede producirse in vivo o in vitro. Ver clonación, reacción en cadena
de la polimerasa.
- Cebador (en inglés primer): cadena polinucleotídica corta a la cual se
agregan nuevos desoxirribonucleótidos por acción de la ADN polimerasa.
- Doble hélice: la forma que toman las dos hebras de ADN cuando se
encuentran unidas.
- Endonucleasa (del griego endon = dentro; asa = sufijo que indica actividad
enzimática): enzima que corta una molécula de ADN en un sitio interno de
la secuencia de nucleotídica.
- Endonucleasa de restricción: enzima que reconoce específicamente
determinadas secuencias y corta a la molécula de ADN en ese sitio. De las
bacterias se obtuvieron más de 400 enzimas que reconocen mas de 150
diferentes secuencias de ADN (sitios de corte por enzimas de restricción).
- Genes (del griego genos = nacimiento, raza; del latín genus = raza, origen):
segmentos específicos de ADN que controlan las estructuras y funciones
celulares; la unidad funcional de la herencia. Secuencia de bases de ADN
que usualmente codifican para una secuencia polipetídica de aminoácidos.

CONOCIMIENTOS APLICADOS EN GENÉTICA PARA TÉC. ESP. EN LABORATORIO CLÍNICO 53

Tema 4. Genética forense
 - Genética: el estudio de la herencia de los caracteres.
- Locus (del latín: lugar, plural loci): posición que ocupa un determinado gen
en un cromosoma.
- Marcador (del inglés marker; pob. del italiano marcare = “señalar una
cosa para que se distinga de otra”): una posición física identificable en
un cromosoma cuya herencia puede seguirse (p.ej. un gen o un sitio que
corta una enzima de restricción). Los marcadores pueden ser una región del
ADN que se expresa (gen) o un segmento de de ADN que no se conoce que
codifica pero que se puede seguir su manera de heredarse( ver RFLP iniciales
del inglés Restriction Fragment Lenght Polymorphism).
- Polimerasa (ADN o ARN): enzimas que catalizan la síntesis de ácidos nucléicos
en base a templados preexistentes, utilizando ribonucleótidos para el ARN y
desoxirribonucleótidos para el ARN.
- Polimorfismo: diferencia entre las secuencia de ADN entre individuos.
- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR, de las iniciales en inglés
Polimerase Chain Reaction): método de amplificación de una secuencia de
bases del ADN usando una polimerasa termoestable y dos cebadores (“primers”)
de 20 bases de largo de la secuencia a ser amplificada, uno complementario
de las secuencias final de la hebra (+) y otro de la otra secuencia final de
la hebra (-). En razón que las nuevas cadenas de ADN sintetizadas pueden
subsecuentemente servir de moldes adicionales para la misma secuencia de
cebadores, sucesivos “ciclos” de anillado de cebadores, alargamiento de la
cadena y disociación del ADN bicatenario formado producen rápidamente
grandes cantidades de la secuencia original (amplificación). La PCR puede
utilizarse para detectar una secuencia definida en una muestra de ADN.
- RFLP: (del inglés restriction-fragment-length polymorphisms: polimorfismo
de longitud de los fragmentos de restricción): bajo esta sigla se reconocen
las variaciones entre individuos de la longitud de los fragmentos de ADN
cortados por enzimas de restricción. Este hecho generalmente es causado
por mutaciones en el sitio de corte.
- Secuencia de bases: el orden de las bases de los nucleótidos en una molécula
de ADN.

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