UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

DETERMINACIÓN DE ORGANOFOSFORADOS EN
ALIMENTOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

CURSO
TOXICOLOGIA - EPIDEMIOLOGIA

DOCENTES
Mg. Cruzado Razco, Jose Lizardo
Mg. Silva Correa, Carmen Rosa
CICLO
VII
ALUMNO:
Campos Sandoval, Osbel Elver

Trujillo – Perú
06 de junio del 2019

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 CONTENIDO

PRÁCTICA N° 04: DETERMINACIÓN DE ORGANOFOSFORADOS EN ALIMENTOS

POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA ........................................................................... 3
I. INTRODUCCIÓN............................................................................................................... 3
II. MATERIALES Y EQUIPOS ......................................................................................... 6
Materiales De Protección ........................................................................................................ 6
Materiales................................................................................................................................. 6
Equipos ..................................................................................................................................... 6
III. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 6
IV. RESULTADOS ................................................................................................................ 7
V. DISCUSIÓN......................................................................................................................... 7
VI. CONCLUSIONES ........................................................................................................... 8
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................... 9
VIII. ANEXOS .................................................................................................................... 10

CONTENIDO DE TABLAS
Tabla 1: Resultados según la coloración de la muestra patrón y del extracto. ................. 7

CONTENIDO DE ILUSTRACIONES
Ilustración 1: Esquema del proceso fisiológico neuromuscular durante la estimulación. 4
Ilustración 2: Hidrolisis fisiológica de acetilcolina. ......................................................... 4
Ilustración 3: Acción del paraoxón sobre la acetilcolinesterasa. ...................................... 5
Ilustración 4: Procesos que afectan los plaguicidas en el medio ambiente. ..................... 5
Ilustración 5: Diagrama de flujo de la determinación de organofosforados en alimentos
por cromatografía en capa fina. ........................................................................................ 7
Ilustración 6: Papa cortado en pedazos pequeños. ......................................................... 10
Ilustración 7: Extracción del plaguicida con cloroformo. .............................................. 10
Ilustración 8: Uso del capilar para sacar la muestra a sembrar en la placa de silicagel. 11
Ilustración 9: Siembra de las muestras. .......................................................................... 11
Ilustración 10: La placa sembrada se colocó dentro de un recipiente cerrado que
contiene solvente (acetato de etilo hexano 3:1), sin tocar el
punto de siembra............................................................................................................. 11
Ilustración 11: Se coloco spray (cloruro de paladio) para observar la coloración amarillo
si es que hubiese presencia de organofosforado. ............................................................ 12
Ilustración 12: Resultados; P2 (muestra patrón), P1 (Extracto) ..................................... 12

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PRÁCTICA N° 04: DETERMINACIÓN DE ORGANOFOSFORADOS
EN ALIMENTOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

I. INTRODUCCIÓN
Los plaguicidas son sustancias químicas naturales y sintéticas que se utilizan con el fin de
controlar, repeler y combatir plagas que atacan los cultivos o a los vectores de enfermedades
transmisibles al hombre o a los animales (Podlesky, E., Coy, G.).
No obstante, su reconocido beneficio, los plaguicidas producen también efectos adversos como
la contaminación ambiental, ya que muchos persisten; además, la toxicidad para los humanos,
pues se a demostrado que algunos tienen efectos a largo plazo (carcinogénesis, metanogénesis y
teratogénesis) (Podlesky, E., Coy, G.).
Los organofosforados son comúnmente ésteres derivados del ácido fosfórico, su toxicidad varia
ampliamente; en general, los de mas alta toxicidad se utilizan en la agricultura, otros, menos
tóxicos, en la ganadería y los muy pocos tóxicos se usan para el control de insectos en ambientes
domésticos.
La toxicocinética de los organofosforados: Estos compuestos son liposolubles y volátiles,
características que facilitan su absorción (Digestiva, respiratoria, cutánea). La
biotransformación ocurre en el hígado, se efectúa a través de mecanismos de oxidación y
conjugación, a través de oxidasas, hidrolasas y glutatión-S-transferasas. Pueden producirse
metabolitos más tóxicos. Las vías de eliminación pueden ser por la orina, heces y aire expirado;
generalmente se excreta por vía renal (González, D).
Mecanismo de acción de los organofosforados: normalmente para la transmisión de impulsos
nerviosos, el organismo emplea un mediador químico, la acetilcolina, la cual se encuentra en las
vesículas sinápticas de los botones terminales de las neuronas colinérgicas.
Cuando llega un impulso al botón, hace que se libere acetilcolina a la hendidura sináptica, la cual
estimula la membrana postsináptica haciendo que se transmita el impulso nervioso. La
acetilcolina debe ser removida de la hendidura sináptica para evitar la transmisión nerviosa
continua. La destrucción del mediador químico se realiza mediante la acción de una enzima
llamada acetilcolinesterasa la cual reacciona con sustrato (acetilcolina) produciendo una enzima
acetilada y colina; posteriormente, la enzima acetilada se disocia en un ion acetato y la enzima
libre se regenera.
En este mecanismo normalmente intervienen los esteres fosforados bloqueando la acción de la
enzima por medio de una fosforilación en sus puntos activos, impidiéndole así destruir la
acetilcolina.
El resultado es una acumulación progresiva de la acetilcolina, que se traduce en estimulación
permanente de las estructuras efectoras (glándulas, músculos, nervios, etc.).
Debido a que la acetilcolinesterasa es inhibida en forma irreversible por un es éster
organofosforado, la restauración de la actividad enzimática depende exclusivamente de las
síntesis de nuevas moléculas de la enzima (Podlesky, E., Coy, G.).
En la cromatografía en capa fina usualmente se emplea placas de vidrio cubiertas de un material
apropiado como sílica, alúmina, etc. La muestra analizarse se disuelve en un solvente apropiado
y se coloca en pequeñas cantidades cerca a uno de los extremos de la placa. Esta placa se coloca
dentro de un recipiente cerrado que contiene solvente, de tal forma que el extremo donde está la
muestra quede sumergido en el mismo, pero sin tocar el punto de siembra.

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El liquido sube lentamente por la placa arrastrando los componentes de las muestras a diferentes
velocidades (de acuerdo con su interacción con el material de la placa) produciéndose así su
separación. Cuando las manchas correspondientes a cada sustancia no son visibles, se les puede
visualizar con luz ultravioleta o un reactivo adecuado para colorearlas. En forma similar se trabaja
la cromatografía en papel. La intensidad de las manchas refleja la concentración.

Ilustración 1: Esquema del proceso fisiológico neuromuscular durante la estimulación.

Fuente: Henao, H. S., Corey, O. G., plaguicidas inhibidores de las colinesterasas. Serie
Vigilancia 11, México; ECO OPS; 1991:22

Ilustración 2: Hidrolisis fisiológica de a acetilcolina.

Fuente: Jeyaratnam J., Maroni M. Toxicology, 91(1994):17

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 Ilustración 3: Acción del paraoxón sobre la acetilcolinesterasa.

Fuente: Jeyaratnam J., Maroni M. Toxicology, 91(1994):17

Ilustración 4: Procesos que afectan los plaguicidas en el medio ambiente.

El objetivo general de esta práctica de laboratorio es determinación de organofosforados en

alimentos por cromatografía en capa fina.

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 II. MATERIALES Y EQUIPOS
Materiales De Protección
• Guantes de nitrilo.
• Gorro.
• Respirador descartable.
• Mandil de laboratorio.
Materiales
• Alimento (papa).
• Balanza de triple brazo.
• Frasco ambar tapa rosca (10 ml).
• Capilar.
• Matraz.
• Vaso de precipitación.
• Cloroformo.
• Cromatoplaca de silicagel.
• Acetato de etilo hexano
• Liquido patrón (organofosforado).
• Matraz.
• Vaso de precipitación.
• Agua destilada.
• Spray (cloruro de paladio en acido clorhídrico diluido).
Equipos
• Campana extractora de gases.

III. PROCEDIMIENTO
1. Se cortó en trozos muy pequeños al alimento(papa) a analizar.
2. Se calibró la balanza de triple brazo con el matraz y se pesó 10g. del alimento.
3. Se mezclo 10g del alimento con 20 ml de cloroformo y se agitó hasta alcanzar una
turbidez para lograr la extracción del plaguicida (extracto).
4. La parte líquida (extracto), se introdujo en un frasco ámbar.
5. En una cromatoplaca de silicagel, se trazó dos líneas con lápiz en un extremo 1cm
línea de siembra (LS) y en el otro ½ centímetro (LB).
6. En el extremo a un centímetro del cromatoplaca de silicagel, se marcó dos puntos de
siembra.
7. En el primer punto (P1) con ayuda de un capilar se sembró 25 veces con el líquido
de la botellita ámbar (extracto). Entre cada puntada se esperó que la placa de silicagel
se seque.
8. En el segundo punto (P2) con ayuda de un capilar se sembró 10 veces de la muestra
patrón (organofosforado). Entre cada puntada se esperó que la placa de silicagel se
seque.
9. Esta placa se colocó dentro de un recipiente cerrado que contiene solvente (acetato
de etilo hexano 3:1), de tal forma que el extremo donde está la muestra quede
sumergido en el mismo, pero sin tocar el punto de siembra, así el solvente arrastra
los componentes de las muestras hasta la segunda línea (LB). Esta placa se coloca
dentro de un recipiente cerrado que contiene solvente (acetato de etilo hexano 3:1),
de tal forma que el extremo donde está la muestra quede sumergido en el mismo, pero
sin tocar el punto de siembra.
10. Luego se esperó que la placa de silicagel se seque a temperatura ambiente y en la
campana extractora de gases se colocó encima de la cromatoplaca de silicagel un
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 spray (cloruro de paladio en ácido clorhídrico diluido). Luego se observó una
coloración inicial amarillo para la muestra patrón, pero no se observó en la muestra
problema (no se encontró plaguicida en el alimento papa)

Ilustración 5: Diagrama de flujo de la determinación de organofosforados en alimentos por cromatografía en capa

fina.

IV. RESULTADOS
Los resultados obtenidos para la muestra de extracto del plaguicida
(organofosforado) del alimento (papa) y de la muestra patrón se muestran en la tabla
1.
Tabla 1: Resultados según la coloración de la muestra patrón y del extracto.

MUESTRA COLORACIÓN PRESENCIA DE

ORGANOFOSFORADO
EXTRACTO - NO

PATRÓN AMARILLO SI

V. DISCUSIÓN
La residualidad de los plaguicidas es una propiedad inherente a estos, por ello es
importante evaluar esta característica para determinar su uso en la superficie o la
parte interna de productos alimenticios para consumo humano. El alimento (papa)
evaluado en esta práctica resultó limpio de productos organofosforados, puede
afirmarse entonces que el uso de plaguicidas (organofosforados) en el cultivo del
alimento esta correctamente utilizado (producto organofosforado permitido, y en
concentraciones adecuadas).

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 Deben evaluarse las concentraciones de compuestos organofosforados en los
alimentos de encontrase con resultados que indiquen presencia de estos plaguicidas.

VI. CONCLUSIONES
El alimento (papa) analizado resultó limpio, es decir que no existe compuestos
organofosforados o residuos de plaguicidas organofosforados (derivado del
plaguicida, como productos de conversión, metabolitos y productos de reacción, y
las impurezas consideradas de importancia toxicológica) como consecuencia del uso
de plaguicidas en la producción del alimento (papa).

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 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Podlesky, E., Coy, G.; Determinación de Plaguicidas en Muestras ambientales,
Biológicas y de Alimentos. Santa fe de Bogotá. D.C. 1994.
• Aquino, M. S. Análisis de residuo de plaguicida organofosforado
(Methamidophos) en muestras de papa de mercados de Lima Metropolitana.
Lima. 2008.
• Gonzáles, D.; Plaguicidas organofosforados y carbamatos. Brasil. 2012.

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 VIII. ANEXOS

Ilustración 6: Papa cortado en pedazos pequeños.

Ilustración 7: Extracción del plaguicida con cloroformo.

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 Ilustración 8: Uso del capilar para sacar la muestra a sembrar en la placa de silicagel.

Ilustración 9: Siembra de las muestras.

Ilustración 10: La placa sembrada se colocó dentro de un recipiente cerrado que contiene
solvente (acetato de etilo hexano 3:1), sin tocar el punto de siembra

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 Ilustración 11: Se coloco spray (cloruro de paladio) para observar la coloración amarillo si es que hubiese
presencia de organofosforado.

Ilustración 12: Resultados; P2 (muestra patrón), P1 (Extracto)

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