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Algunos conceptos básicos...
Bactericida: agente que mata bacterias
Viables
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Totales
Viables
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Cinética de muerte de un microorganismo
La muerte de microorganismos como consecuencia de un
tratamiento a altas temperaturas sigue una cinética
exponencial.
Log ufc/ml
tiempo
dN
=-KN
dt
A temperatura constante 7
VALOR D : Tiempo de reducción decimal
Se define el valor D como el tiempo necesario para que el número de supervivientes
caiga al 10% del valor inicial (o, lo que es lo mismo, para que el logaritmo del número de
supervivientes se reduzca en una unidad)
El tiempo (D) varía para cada temperatura (de ahí el subíndice t) de forma que a
mayores temperaturas el valor de D es menor, es diferente para distintos
microorganismos, distintos entornos y diferentes condiciones fisiológicas 8
Por ejemplo:
Geobacillus stearothermophilus
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Efecto de la temperatura
log ufc/ml
Igual carga microbiana inicial y
microorganismo
100
10
70°C 50°C
1
60°C
tiempo
10
Efecto de la carga microbiana inicial (N°)
log ufc/ml
El mismo microorganismo y
distinta carga microbiana
inicial
100
10
tiempo
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¿Cuál es el microorganismo más
resistente al calor?
log ufc/ml
100
10
B A
1
C
tiempo
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Ej.: Acondicionamiento previo del material
de vidrio. Higiene en la confección de
medios de cultivo e inmediata
esterilización.
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MÉTODOS EMPLEADOS PARA
ESTERILIZACIÓN
• Físicos
• Químicos
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Agentes físicos
Método Fuente Tipos
Acción directa Flameado (directo e indirecto)
Calor seco de la llama Incineración
Acción directa por Estufa de calor seco
generadores de calor
Baño de María hirviente
Calor húmedo Acción de agua caliente Calentamiento repetido
(Tyndalización)
Ebullición directa
Acción de vapor de Autoclave
agua
Ionizantes Rayos X
Rayos Gamma
Radiación
Ultravioleta UV 260 nm (ADN/ARN)
UV 280 nm – 230 nm (proteínas)
Filtración Filtros Filtros de diferente composición,
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Agentes químicos:
deben ser tóxicos y volátiles
• Óxido de etileno
• Glutaraldehído
• Cloroformo
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Antes de entrar en esterilización en
Microbiología hablaremos de:
• Pasteurización
• Esterilización
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Pasteurización
de deterioro
microorganismos termodúricos
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Esterilización en la industria alimentaria
• Conservas: En autoclave
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Calor seco: Flameado
1. Directo 2. Indirecto
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Estufa de Calor Seco
Usos: Material de vidrio, sustancias no miscibles en agua (inyectables
oleosos, siliconas, vaselina líquida) y polvos
Controles de esterilización:
• Físicos: Temperatura
• Químicos:
• Biológicos: esporas de Bacillus subtilis var. niger
D160= 0.3 a 1.8
Tamaño del inóculo: 105 esporas
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Estufa de Calor Seco
Ventajas:
Desventajas:
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Incineración
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Calor húmedo: Tyndalización
intercalados
uso
Condiciones :
• 121ºC durante 15-20 minutos, con cargas iniciales bajas
• 121ºC durante 30 minutos, con cargas iniciales altas
Controles de esterilización:
• Físicos: Temperatura y/o presión
• Químicos: Ácido benzoico
• Biológicos: esporas de Geobacillus stearotermophilus
D121= 5
Tamaño del inóculo: >106 esporas
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Autoclave Chamberland
• La esterilización comienza cuando se ha alcanzado la temperatura óptima
en el interior del aparato (autoclave o estufa)
• Según el contenido, un autoclave puede requerir tiempos más largos para
alcanzar la temperatura de esterilización.
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Calor húmedo (vapor a presión)
Ventajas:
• Rápido calentamiento y penetración
• Destrucción de formas vegetativas y esporas en corto
tiempo
• No deja residuos tóxicos
• Hay un bajo deterioro del material expuesto
• Es posible por este método esterilizar materiales que no
resisten el calor seco (material plástico)
Desventajas:
• No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con
el agua
• Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos
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Resistencia a calor
RESISTENCIA
Priones +
Endosporas bacterianas
Mycobacteria
Virus sin envoltura lipídica
Hongos
_
Bacterias
Virus con envoltura lipídica
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Esterilización por radiaciones
Baja energía
Actividad
microbicida
Alta energía
Radiación con longitudes de onda entre 100 y 400 nm. Las de mayor
actividad microbicida son las comprendidas entre 260-270 nm. Son
absorbidas por lo ácidos nucleicos y aminoácidos aromáticos
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Dos tipos:
Radiaciones ionizantes
Radiaciones no ionizantes
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Radiaciones Ionizantes
• Tienen mayor energía que las ultravioleta y por tanto mayor
poder de penetración. Producen iones y radicales libres que
alteran las bases de los ácidos nucléicos, proteínas y otros
componentes celulares
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Radiaciones no Ionizantes
Características:
• Baja energía, sin poder ionizante
• Sin poder penetrante
• Máxima eficiencia biocida a 260nm
Mecanismos de acción:
• Sitio blanco ADN NO SE UTILIZAN
• Formación de dímeros de timina PARA
ESTERILIZAR
Usos: SINO PARA:
• Desinfección de superficies
• Desinfección de aire y agua
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ESTERILIZACIÓN POR RADIACIÓN UV
Luz ultravioleta
Afectan a los ácidos nucleicos provocando errores en la duplicación y
pérdida de viabilidad. Tienen bajo poder de penetración: solo se utilizan
para la esterilización de superficies, (quirófanos, salas de envasado de
medicamentos). Producen daños en ojos y piel.
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Dímeros de timina
Esterilización por filtración
La esterilización por filtración se logra por el paso de un
líquido o un gas a través de un material capaz de retener
los microorganismos presentes (tanto vivos como muertos
es decir no mata sino los elimina).
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Esterilización
por filtración
Embudo
Base
Tapón de goma
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Esterilización Medio no estéril
por filtración
Grampa de sujeción
Vacío
Medio
Libre de microorganismos vivos y estéril
muertos
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FILTRACIÓN DE AIRE
CONTROL
•Retención Mínima de un 99.97% de partículas generadas mediante ensayo
DOP(di-octil-nftalato) en caliente con un diámetro de 0.3 micrones.
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Cabinas de Flujo Laminar Vertical
Protege la
muestra, el
operador y el
medio ambiente
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Esterilización mediante agentes químicos:
Método Usos
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Oxido de Etileno
• Es un agente alquilante que se une a compuestos con
hidrógenos lábiles como los que tienen grupos carboxilos,
amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
• Es utilizado en la esterilización gaseosa, generalmente en la
industria farmacéutica. Sirve para esterilizar material
termosensible como el descartable y plástico, equipos
electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, etc.
• Es cancerígeno y explosivo.
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Glutaraldehído:
• Es un agente alquilante que actúa sobre proteínas, lo que provoca
modificación irreversible de enzimas e inhibición de la actividad enzimática
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Cloroformo
• Disuelve los lípidos de las paredes celulares
• Es utilizado para esterilizar soluciones acuosas de sustancias
termolábiles inmiscibles en cloroformo
• Es un esterilizante efectivo en frío
• Destruye sólo células vegetativas no esporas
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Condiciones que debe cumplir la
desinfección:
1. eliminar el mayor número de microorganismos
(al menos todos los patógenos)
2. ser económico
3. no debe ser corrosivo, tóxico o irritante para
los tejidos
4. al menos ser soluble en agua
Desinfección
• Alcoholes:
– Etanol (50-70%) Desnaturaliza proteínas y solubiliza fosfolípidos de la
membrana. No destruye esporas y tiene una acción germicida lenta
Mediante Indicadores:
Físicos
Químicos
Biológicos
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Control de Esterilidad
• Post-proceso:
– De material de vidrio
– De medios de cultivo
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Controles del proceso
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