U.N.

C
Facultad de Medicina Veterinaria

Detección de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo (ANCA) en

suero de perros con enfermedad intestinal en la ciudad de
Cartagena en 2007

DOCENTE: Biga.Paola Ponce López

ALUMNOS:

Aliaga Tambo José Ángel

Cacho Quiroz Olga Verónica

2019
 INDICE

I. GENERALIDADES
TITULO
AUTORES
TIPO DE INVESTIGACION

II. PLAN DE INVESTIGACION

1. ANTECEDENTES
a. OBJETIVO GENERAL
b. OBJETIVOS ESPECIFICOS

2. PROBLEMA
3. HIPOTESIS
4. DISEÑO DE INVESTIGACION
4.1 . OBJETO DE ESTUDIO:
4.1.1. UNIDAD DE ANALISIS
a. POBLACION MUESTRAL
b. MUESTRA

4.2. INSTRUMENTOS, MATERIALES CONSUMIBLES Y/O FUENTES DE DATOS

4.3. METODOS Y TECNICAS

5. CONCLUSIONES

6. ANEXOS

7.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
I. GENERALIDADES
TIPO DE INVESTIGACION
 FINALIDAD:
a. BASICA
b. APLICADA
 DISEÑO:
a. Descriptivo
b. Experimental
II. PLAN DE INVESTIGACIÓN
1. ANTECEDENTES:

Para lograr conocer un poco más sobre el Citoplasma , debemos salir de la ignorancia cuando nos
referimos a la etimología de la palabra, a continuación, se notará claramente según diversos autores de
donde viene dicha palabra: “La palabra citoplasma es un neologismo biológico del siglo XIX, formado
por dos vocablos griegos, KYTOS significa “pequeña celda, algo hueco o vacío”, ya que las primeras
células que se observaron en el siglo XVII, eran en realidad esqueletos huecos de lo que era células
vivas de un tejido vegetal suberoso o corcho. Plásma, derivado del verbo griego PLÁSSEIN (moldear),
forma parte de numerosos términos de uso común en la ciencia” [ CITATION GAR13 \l 10250 ].

La importancia de conocer al que descubrió el citoplasma es fundamental para poder tener una base
sólida sobre el tema: “Fue el científico Robert Hooke en el año 1665. Él observó el citoplasma a través
del microscopio y le dio la sensación de estar viendo un panal de abejas a través del microscopio.
Significa plasma o sustancia formadora. Anteriormente a este citoplasma se lo conocía como
protoplasma“ [ CITATION Jul19 \l 10250 ].

Algunos autores consideran que el citoplasma estuvo desde sus inicios dentro de la célula pero con el
tiempo se encontró tras varios estudios: La hipótesis del citoplasma fuera.[ CITATION Blo80 \l 10250 ]
La hipótesis del citoplasma fuera es un modelo que describe el origen de la primera célula
considerando que el citoplasma permanece en el exterior mientras coevoluciona con la membrana
citoplasmática. Una invaginación posterior de la membrana haría que el citoplasma se interiorizara
para dar lugar a la primera célula. Esta teoría es la alternativa a la hipótesis del citoplasma dentro, ésta
teoría tiene la ventaja de que no requiere que la membrana citoplasmática primitiva hubiera
adquirido tempranamente la capacidad de operar como barrera selectiva para permitir el paso de los
componentes moleculares del citoplasma al interior de la vesícula [ CITATION Tho01 \l 10250 ].
ANEXO 1
 Encontramos distintas definiciones sobre el citoplasma para tener una idea clara citaremos algunos
autores y su definición y luego daremos una conclusión genérica.
“Se denomina citoplasma al interior de las células (protoplasma), que ocupa el área entre el núcleo
celular y la membrana plasmática. Se trata de una dispersión coloidal de un fluido
llamado citosol o halioplasma, de aspecto granuloso y muy fino en su composición. En él se
encuentran los diversos orgánulos de la célula y ocurren muchas de sus reacciones moleculares “Se
llama citoplasma a la región de una célula que se halla entre el núcleo y la membrana plasmática. En el
citoplasma es posible reconocer diversos orgánulos celulares”[ CITATION Mar18 \l 10250Pág] .1

Antes de mencionar a la estructura del CITOPLASMA mencionaremos a dos regiones en la cual se

divide el citoplasma Comúnmente, puede dividirse en dos regiones:
Ectoplasma. La región más externa del mismo, cercana a la membrana plasmática, y de
contextura más gelatinosa. Suele estar implicada en el movimiento celular.
Endoplasma. La región más interna del citoplasma, organizada alrededor del núcleo, y en
donde están la mayoría de los organelos celulares.
El citoplasma es común tanto a células eucariotas como procariotas, aunque contengan distintos tipos
de organelos[ CITATION Mar18 \l 10250 ].

Las funciones del citoplasma son:

Nutritiva. Al citoplasma se incorporan una serie de sustancias, que van a ser transformadas o
desintegradas para liberar energía.
De almacenamiento. En el citoplasma se almacenan ciertas sustancias de reserva.
Estructural. El citoplasma es el soporte que da forma a la célula y es la base de sus
movimientos. El citoplasma permite que la célula conserve su forma. Ocupa la mayor parte de
la célula. Además le brinda elasticidad a la célula. Sirve como un sostén pero también es un
medio de comunicación de la célula. Debe contener enzimas, ARN y otras sustancias de la
célula[ CITATION Ama14 \l 10250 ].

La enfermedad inflamatoria intestinal (EII) engloba un conjunto de enfermedades caracterizadas por la

presencia de signos gastrointestinales persistentes o recurrentes, con evidencia histológica de inflamación
intestinal. La etiología de este conjunto de enfermedades es desconocida, siendo una de las causas propuestas
un defecto en la inmunorregulación a nivel intestinal. Esta patología se asemeja a la enfermedad inflamatoria
intestinal en el hombre [CITATION MarcadorDePosición1 \l 10250 ].

La sintomatología de este grupo de enfermedades se caracteriza por la aparición de vómito, diarrea y pérdida
de peso de carácter crónico. Debido a esta sintomatología tan inespecífica el diagnóstico es complejo y se
alcanza excluyendo siempre cualquier otra posible causa de enteritis. Por tanto, para diagnosticar enfermedad
inflamatoria intestinal, se ha de someter al perro a un protocolo diagnóstico con el fin de descartar posibles

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causas de inflamación intestinal. Dentro de este protocolo es necesario incluir: hemograma, bioquímica
sanguínea, análisis parasitológico de las heces, pruebas de mal digestión y técnicas de diagnóstico por imagen
(radiología y ecografía). Finalmente se hace necesaria la toma de biopsias de mucosa intestinal, para lo que se
recurre por lo general a la endoscopia [ CITATION Gui96 \l 10250 ]

En medicina humana los Anticuerpos Anti-Citoplasmáticos en Neutrófilos se han empleado como una
herramienta diagnóstica más para el diagnóstico de la Enfermedad Inflamatoria Intestinal y, en especial, como
marcador, para diferenciarlas de otras enfermedades gastrointestinales. Estos anticuerpos también son útiles
para hacer un diagnóstico diferencial entre colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn3, es un proceso inflamatorio
crónico del tracto intestinal principalmente. Aunque puede afectar cualquier parte del tracto digestivo desde la
boca hasta el ano, más comúnmente afecta la porción más baja del intestino delgado (íleon) o el intestino
grueso (colon y recto)[ CITATION nst09 \l 10250 ], aunque para aumentar la utilidad de la detección de ANCA se
recomienda combinarla con la detección de otros marcadores serológicos, principalmente con los anticuerpos
anti-Saccharomyces cerevisiae (ASCA) [ CITATION Hal05 \l 10250 ].

Los antígenos frente a los que se dirigen estos anticuerpos se conocen bien en el caso de las vasculitis
primarias, pero no sucede lo mismo en la Enfermedad Inflamatoria Intestinal. En esta enfermedad se han
propuesto gran variedad de antígenos sin haberse descrito ninguna especificidad principal. Además, se ha
comprobado que en un mismo suero de un paciente humano con EII pueden coexistir anticuerpos anti-
citoplasma de neutrófilo con diferentes especificidades [ CITATION Reu04 \l 10250 ].

La causa por la que aparecen estos anticuerpos se desconoce. Recientemente se han postulado dos teorías: la
infección por un superantígeno microbiano (potentes estimuladores de la respuesta inmunitaria que derivan de
bacterias, virus, parásitos o levaduras) y la existencia de alteraciones en el proceso de la apoptosis o en la
eliminación de células apoptóticas. La relación entre la presencia de ANCA y la actividad de la EII es
controvertida. Algunos estudios no apoyan esta relación[ CITATION Pér17 \l 10250 ], mientras que otros
muestran la existencia de una correlación entre la titulación de estos anticuerpos y la actividad de la colitis
ulcerosa, sin encontrar correlación en la enfermedad de Crohn. Además, la presencia de estos anticuerpos se ha
asociado con un tipo de enfermedad más refractaria al tratamiento y con la temprana necesidad de tratamiento
quirúrgico[ CITATION Reu04 \l 10250 ].

La metodología de trabajo más empleada en la actualidad para la detección de los ANCA es la

inmunofluorescencia indirecta (IFI) sobre neutrófilos fijados con etanol. Se distinguen distintos patrones,
dependiendo de la carga y la distribución citoplásmica de los antígenos reconocidos por los ANCA, siendo los

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principales patrones el citoplasmático y el perinuclear. En la EII, el patrón más frecuentemente hallado es el
perinuclear[ CITATION Aba97 \l 10250 ] , sin conocerse de forma certera los antígenos diana de dichos
anticuerpos. También está descrita la aparición de un patrón de fl uorescencia “atípico” en esta
enfermedad[ CITATION Aba97 \l 10250 \m Tho01].

En medicina veterinaria, únicamente hay publicados dos estudios previos en los que se han detectado
anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo en perros con Enfermedad Inflamatoria Intestinal;

I. En el primer estudio emplearon 39 perros con EII, además de perros sanos, perros sanos de trabajo y
perros con problemas gastrointestinales crónicos y agudos no asociados a EII. En dicho estudio se
empleó como técnica de detección la inmunofluorescencia indirecta (IFI), mediante la que se determinó
que el patrón de fluorescencia primordial en la EII del perro fue, como en medicina humana, el
perinuclear[ CITATION All04 \l 10250 ].
II. En el segundo estudio se evaluó el estado ANCA en 26 perros con EII antes y después de un ciclo de
tratamiento de inmunosupresión, determinando que el estado ANCA no está relacionado con la
actividad de la enfermedad en el perro[ CITATION Luc06 \l 10250 ].

El objetivo del presente estudio es evaluar el uso de la inmunofluorescencia indirecta, para la detección de
anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo, en perros con enfermedad inflamatoria intestinal y comparar la
presencia de estos anticuerpos en perros con enfermedad inflamatoria intestinal con la presencia en otros
grupos de animales, para conocer la capacidad diagnóstica de la detección de anticuerpos anti-citoplasma de
neutrófilo en la Enfermedad Inflamatoria Intestinal canina.

En el trabajo se utilizó distintos ejemplares caninos (349) que estaban divididos en perros con EII (71), perros
con enfermedad digestiva crónica no asociada a la EII (35), perros con patologías digestivas agudas (27), perros
sanos de diferentes razas y edades (54), perros sanos de trabajo, de la policía nacional, (126). Se diagnosticó a
las distintas clasificaciones de perros siguiendo los siguientes pasos hematología y bioquímica sanguínea,
análisis de eses por 3 días, gastroduodenoscopia y toma de biopsia de duodeno. Se utilizó la técnica de
inmunofluorecencia indirecta para detectar la presencia de anticuerpos anti citoplasma en neutrófilos; esta
inmunofluorecencia se preparó en tres disoluciones de trabajo 1:5, 1:10 1:20. La primera incubación se hizo con
los sueros problema y la segunda con un anticuerpo secundario anti-IgG de perro conjugado con fluoresceína.
Se obtuvo distintos resultados en base a cada disolución de trabajo que se utilizó, dando una sensibilidad de
0.36, 0.34, 0.18 respectivamente [ CITATION CMa07 \l 10250 ].
a) OBJETIVO GENERAL Pág 4

o Informar sobre el Citoplasma a todos los receptores del siguiente trabajo a presentar.
o Dar a conocer la importancia del citoplasma en la detención de anticuerpos anti-citoplasma de
neutrófilo en sueros de perros con enfermedad inflamatoria intestinal.
o Conocer la influencia del citoplasma en la Detección de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo
(ANCA) en suero de perros con enfermedad intestinal en la ciudad de Cartagena en 2007

b) OBJETIVO ESPECÍFICO

o Dar a conocer los resultados positivos que ha logrado la inmunoflurenecia en el diagnóstico de

la enfermedad inflamatoria intestinal en perros.
o Conocer el origen, fundamentar la importancia y reconocer con precisión las partes del
citoplasma para poder demostrar la importante influencia que tiene en la detención de
anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo (ANCA) en suero de perros con enfermedad
intestinal.

1. PROBLEMA

¿Cúal es el papel que cumple el citoplasma en la detención de anticuerpos anti-citoplasma de

neutrófilo (ANCA) en suero de perros con enfermedad intestinal?

El Citoplasma es un sistema coloidal del cual no se habla mucho, ya que algunos no conocen su
verdadera importancia en el campo de la biología, hablando específicamente no reconocen que el
citoplasma comprende todo el volumen de la célula excepto el núcleo de la misma.
Por esta razón en el siguiente trabajo a presentar nos basaremos en ilustrar toda la información
relevante sobre el Citoplasma para así tomarle la importancia suficiente en la detención de anticuerpos
de neutrófilos.

2. HIPÓTESIS

 Logramos investigar sobre la “Detección de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo (ANCA) en suero

de perros con enfermedad intestinal en la ciudad de Cartagena en 2007 “y pudimos reconocer la
importancia del citoplasma en este diagnóstico.

3. DISEÑO DE INVESTIGACIÓN
a. OBJETO DE ESTUDIO:
UNIDAD DE ANALISIS
a. POBLACION MUESTRAL:
CANINOS (392)
b. MUESTRA:
Perros clasificados en distintos grupos:
 Perros con enfermedad inflamatoria intestinal (107 perros)
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 Perros con enfermedad digestiva crónica no asociada a enfermedad
inflamatoria crónica intestinal (35)
 Perros con patologías digestivas agudas (27)
 Perros sanos de diferentes razas y edades (54)
 Perros sanos de trabajo, en concreto de la Policía Nacional (126).

INSTRUMENTOS, MATERIALES CONSUMIBLES Y/O FUENTES DE DATOS

Hemos usado información de distintos libros de la biblioteca de nuestra universidad, al
igual que la biblioteca general de Cajamarca, hemos logrado bajar información de internet,
separando la más relevante y logrando comprender a profundidad el tema. Entre las
fuentes de información las más resaltantes fueron:
I. Revista Científica de Veterinaria: RedVet
II. Artículos Científicos de Veterinaria: Royal Canin
III. Libros de Veterinaria bajados de la red: Grupo Asis Store

MÉTODOS Y TECNICAS
Hemos hecho un trabajo de investigación monográfico, bajando información de distintos
libros de las bibliotecas que están a nuestro alcance, y del internet.
I. Hemos leído a profundidad toda la información sobre el citoplasma y sobre el
diagnostico de los anticuerpos anti-citoplasmáticos en el diagnóstico de la
enfermedad inflamatoria intestinal en perros.
II. Separamos la más relevante de la información considerando los métodos de
trabajo y resultados de la investigación.
III. Formulamos un mapa mental para organizar la información sobre la detención de
anticuerpos anti-citoplasmáticos en el diagnóstico de la enfermedad inflamatoria
intestinal en perros.
IV. Plasmamos la información, colocando formato VANCUBER en todo nuestro trabajo
de investigación para poder dar a conocer de qué referencias bibliográficas fue
bajada la información presentada.

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CONCLUSIONES:
I. La conclusión hacia el concepto del citoplasma es: en una sustancia acuosa en la que se encuentran
diversas moléculas y complejos de macromoléculas, así como diferentes tipos organelas.
II. La conclusión alcanzada en este trabajo es que la sensibilidad de la inmunoflurecencia para la
Detección de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo y la determinación de en perros con EII es
baja, pero la especificidad para el diagnóstico de la Enfermedad Inflamatoria Intestinal es elevada,
especialmente en perros con sintomatología digestiva.
III. El desarrollo de otras técnicas diagnósticas no invasivas, como los marcadores séricos, supondría un
paso importante como ayuda al diagnóstico de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo de este grupo
de enfermedades.
IV. La detección de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilo podría incluirse en los protocolos
diagnósticos de la Enfermedad Inflamatoria Intestinal, como una prueba más para la distinción de esta
enfermedad de otras patologías digestivas de sintomatología similar.
V. En los resultados de nuestro estudio destaca que, tanto a diluciones altas como bajas, los mayores
valores de especificidad y valor predictivo positivo se encuentran al comparar a los perros con
Enfermedad Inflamatoria Intestinal con los dos grupos de animales con cuadro digestivo no asociado
con esta enfermedad. Estos datos podrían indicar la utilidad de los anticuerpos anti-citoplasma de
neutrófilo para diferenciar la Enfermedad Inflamatoria Intestinal de otras enfermedades
gastrointestinales no asociadas a esta entidad, como ya se ha descrito en humana.

Pág 7
 ANEXOS

Figura 1: Citoplasma

Figura 2: Partes del Citoplasma

 Figura 3: Perro identificado con enfermedad inflamatoria intestinal.

Pág 8

Figura 4: Inmunofluorescencia indirecta de un suero negativo a anca.

Figura 5: Imagen de inmunofluorescencia indirecta de un suero positivo a anca.

 Referencias Bibliográficas
Pág 9
[1] G. S. EDUARDO, EXAMEN CRITICO DE LAS TEORIAS HISTOGENICAS DOMINATES, MADRID, 2013.

[2] J. Uriate, 2019. [En línea]. Available: http//www.caracteristicas.com/citoplasma. [Último acceso: 29 6

2019].

[3] T. Cavalier-smith, «Journal of molecular evolution,» de Journal of molecular evolution, Londres, 2001, pp.
555-556.

[4] M. E. Raffino, 2018. [En línea]. Available: http://www.concepto.de/citoplasma-partes-definicion/. [Último

acceso: 28 junio 2019].

[5] P. M. Julio, 2017. [En línea]. Available: http://www.redmed.com/citoplasma//bacuolas-funcion. [Último

acceso: 28 junio 2019].

[6] C. R. Amaranto Cortez, Biología, Y. H. C. Laurencio, Ed., Lima: Yeremy Hugo Caceres Laurencio, 2014.

[7] H. E. a. German, Diseases of the small intestine., 2005.

[8] G. WG, Idiopathic Infl ammatory Bowel Diseases., 451-486, 1996.

[9] H. E. a. German, Diseases of the small intestine, 2005.

[10] D. P. R. Reumaux D, Pathogenesis of diseases associated withs, 65, 2004.

[11] A. E, Relationship between ANCA, 10, 1997.

[12] A. K., Evaluation of assays for perinuclear antineutrophilic cytoplasmic antibodies and antibodies to
Saccharomyces cerevisiae in dogs with infl ammatory bowel, 2004.

[13] L. N, Perinuclear antineutrophilic cytoplasmic antibody and, 10, 2006.

[14] C. M. F. Rodriguez, «detección de anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilos (ANCA) en suero de perros
con EII,» REDVET, vol. IV, nº 27, octubre 2007.