Manual Genetica 2015 Protocolos

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CARABINEROS DE CHILE
JEFATURA Z.C.S. INT., DROGAS E INV. CRIMINAL
DEPARTAMENTO CRIMINALÍSTICA
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
LABORATORIO DE GENÉTICA FORENSE DEL

DEPARTAMENTO CRIMINALÍSTICA DE CARABINEROS DE
CHILE
“L A B O C A R”
CARABINEROS DE CHILE DEPARTAMENTO CRIMINALÍSTICA
RESUMEN
El presente Manual de procedimientos y protocolos fue confeccionado en el
Laboratorio de Genética Forense del Departamento de Criminalística de Carabineros de
Chile, de manera conjunta por los profesionales que laboran en dicho Laboratorio
Especializado.
El primer manual se confeccionó como parte de los requisitos a cumplir, conforme

a la Ley Nº 19.970 que crea el Registro Nacional de ADN, para el proceso de Acreditación
del año 2010 por parte de la Unidad de Registro de ADN del Servicio Médico Legal, a todo
laboratorio que efectue análisis de obtención de perfiles genéticos.
Se describe el uso y características de todas las dependencias tanto dentro como

fuera del Laboratorio de Genética Forense, que están involucradas en la recepción de
evidencias, tomas de muestras y selección del material biológico a analizar con el fin de
obtener un perfil genético.
Se detallan específicamente los procesos realizados ya sean pre-analíticos (como

la obtención de muestra testigo) y analíticos como los procesos de extracción del ADN, su
cuantificación, amplificación, separación de los productos amplificados y generación de
electroferogramas.
Se documentan de manera detallada todos los protocolos de análisis de los

procesos involucrados en la obtención de perfil genético, junto con la interpretación de los
resultados que llevan a la determinación del mismo y se entrega una guía general para la
confección de informes de perfil genético para las Fiscalías requirentes.
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS “Laboratorio de Genética Forense”
HOJA DE CONTROL DE CAMBIOS

Rev. Fecha Modificación realizada
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TABLA DE CONTENIDOS
Página
INTRODUCCIÓN 5
T Í T U L O I : I N S TA L A C I O N E S 7
A.- Dependencias independientes al Laboratorio de 8
Genética Forense.
B.- Dependencias al interior del Laboratorio Genética 9
Forense.
TÍTULO II: PROCEDIMIENTOS 12
A.- Pre-analíticos y flujo de trabajo. 13
A.1.-Sobre muestras y evidencias. 13
A.2.-Sobre toma de muestras biológicas. 16
B.- Analíticos. 21
B.1.- Extracción y purificación de ADN a partir de 21
material biológico.
B.2.- Cuantificación de ADN. 34
B.3.- Amplificación de ADN. 39
B.4.- Detección del producto amplificado. 43
T Í T U L O I I I : A N Á L I S I S D E R E S U LTA D O S 53
A.- Interpretación de resultados. 54
B.- Confección del Informe Pericial. 61
ANEXOS 66
A. - D o c u m e n t a c i ó n C o m p l e m e n t a r i a 67
B . - C o m o u t i l i z a r p r o g r a m a PAT C A N V. 1 . 1 . 75
77
C.- Flujograma de trabajo del laboratorio del genética
forense
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INTRODUCCIÓN
El año 2004 y con la intención de afrontar de la mejor manera la instauración

de la Reforma Procesal Penal, se incorporó al Departamento de Criminalística de
Carabineros de Chile, el Laboratorio inicialmente llamado de Biología Molecular, con la
finalidad de realizar análisis comparativos de perfiles genéticos a partir de las evidencias y
muestras orgánicas analizadas en el Laboratorio de Química Forense.
Desde esa fecha el ahora denominado Laboratorio de Genética Forense se ha

ido modernizando, incorporando nueva tecnología y contando actualmente con nuevas
dependencias acondicionadas al manejo de la evidencia con fines criminalísticos. De este
modo, los distintos tipos de evidencias (ej.: prendas de vestir, papeles filtro, hisopos,
muestras vaginales, elementos filamentosos, etc.) son tratados previamente en el
Laboratorio de Química Forense, donde una vez determinada si se trata de una evidencia
de origen humano (como sangre, semen o pelo, entre otras fuentes de ADN nuclear) y
previa instrucción del órgano persecutor, se envía una fracción representativa al
Laboratorio de Genética Forense, donde se determinan los respectivos perfiles genéticos.
El año 2004 se promulga la Ley N° 19.970 del Ministerio de Justicia la cual

crea el Sistema Nacional de Registros de ADN. El año 2008 se publica el Reglamento de
Aplicación de la Ley N° 19.970, poniendo en marcha su implementación a nivel Nacional y
por ende en el Laboratorio de Genética Forense de este Departamento de Criminalística.
A comienzos del año 2010, el Departamento de Criminalística de Carabineros,

incluido este Laboratorio Especializado, se traslada desde la Escuela de Carabineros a las
dependencias que eran las instalaciones de la Imprenta de Carabineros “Imprecar”,
ubicadas en calle Maule Nº 40, comuna de Santiago, motivo por el cual y según lo
señalado en el Reglamento de Aplicación de la Ley N° 19.970, el Laboratorio pierde su
categoría de Acreditado.
Para dar cumplimiento a lo anterior, este Laboratorio Especializado se sometió

al proceso de Acreditación del año 2010 ante el Servicio Médico Legal. Es así que los
profesionales del Área de la Genética Forense de esta Institución, confeccionaron el
presente MANUAL DE PROCEDIMIENTO Y PROTOCOLOS DE LABORATORIO, que
forma parte de los requisitos de dicho organismo para acreditar este Laboratorio. En él se
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documentan los protocolos de análisis para obtención de perfil genético, junto con la
interpretación de los resultados que llevan a la determinación del mismo.
Los protocolos de extracción y posteriores etapas que culminan con la

obtención de un perfil genético - que al ser comparado con perfiles genéticos obtenidos de
muestras testigo colectadas de individuos conocidos, posibilitan, en primera instancia,
asociar a víctima o imputado con el sitio del suceso – actualmente y en las nuevas
dependencias son realizados en un área aislada con acceso restringido, donde sólo
pueden ingresar los profesionales que laboran en dicho laboratorio y el Director Técnico
del Laboratorio. Respecto a esta área, se trata de una zona limpia, separada del resto del
laboratorio, con temperatura controlada y dividida en sala de extracción, cuantificación,
pre-PCR y sala de analizadores genéticos.
Este laboratorio cuenta además con una sala de toma de muestras a víctimas
e imputados, sala de lavado de material, preparación de reactivos y una oficina
administrativa. Es necesario precisar que estas áreas se encuentran totalmente separadas
del área limpia, con acceso restringido señalado anteriormente.
Respecto al funcionamiento del laboratorio propiamente tal, todo material de

plástico tales como tubos y puntas desechables se encuentran esterilizados y existen
protocolos de limpieza de mesones, mantención y calibración de equipos e instrumental de
uso frecuente de laboratorio, tales como: micropipetas, balanzas, analizadores genéticos,
baños de temperatura controlada, termocicladores, entre otros.
Cabe señalar la labor administrativa que ejercen nuestros profesionales, los

que llevan un registro de cada requerimiento de ADN comparativo solicitado por alguno de
los organismos prosecutores de la Acción Penal, elaboración de Informes Periciales y todo
lo referente a la documentación implicada en el normal funcionamiento de un laboratorio
de estas características.
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TÍTULO I: INSTALACIONES
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DESCRIPCIÓN DE DEPENDENCIAS
Actualmente el Laboratorio de Genética Forense del Departamento de Criminalística

de Carabineros, cuenta con las siguientes dependencias físicamente separadas y
acondicionadas según el siguiente detalle:
A. Dependencias ubicadas independientes al Laboratorio de Genética

Forense:
Corresponden a salas y áreas que a pesar de estar asentadas en instalaciones

distintas a las de trabajo en el Laboratorio de Genética Forense propiamente tal, forman
parte del flujo operativo pericial, debido a que en ellas se efectúa el trabajo pre-analítico,
que es complementario a los análisis de ADN (que son realizados íntegramente en el
Laboratorio de Genética Forense).
I. Toma de Muestras
Esta sala se encuentra totalmente separada del Laboratorio de Genética Forense y

es de uso exclusivo para la obtención de muestras testigo de víctimas e imputados, según
sean los requerimientos emanados por los organismos competentes (Tribunales
Ordinarios y Especiales, Fiscalías del Ministerio Público y la Propia Institución). Una vez
obtenida la muestra testigo es trasladada a la sala de muestras en tránsito del Laboratorio
a través de un sistema de tubos neumáticos, para el posterior proceso de obtención de
ADN. Cabe señalar que la toma de muestra se lleva teniendo en cuenta el protocolo
establecido y las medidas de bioseguridad propias del caso. ( Ver PROCEDIMIENTO: TOMA DE
MUESTRAS TESTIGO, Pág. 16).
II. Recepción de muestras y evidencias:
Todas las evidencias que son recibidas, para ser sometidas a análisis por
requerimiento de los órganos prosecutores de la acción penal (remitida por una Fiscalía,
Comisaría de Carabineros o levantada por equipos de servicio de este Departamento de
Criminalística en el Sitio del Suceso), son resguardadas de manera transitoria en la Oficina
de Custodia y Despacho de este Departamento Especializado. Esta Oficina se encuentra
fuera de las dependencias del Laboratorio de Genética Forense y mantiene instalaciones
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idóneas que permiten mantener la integridad de las evidencias y personal calificado que
permite asegurar un tratamiento adecuado de las muestras, como de los formularios de
cadena de custodia (Ver ANEXO 1, parte II).
III. Obtención de muestra:
Corresponde a un área debidamente demarcada al interior del Laboratorio de

Química Forense, donde en primera instancia se determina si el material biológico a
analizar (sangre, semen, pelo, etc.) es de origen humano, de no haber sido analizado
previamente por otro estamento pericial o perito, acorde con las técnicas preestablecidas,
se omite esta parte.
Posteriormente, el material biológico es levantado y guardado en tubos de

microcentrífuga de 1,6 ml. debidamente rotulados, para finalmente ser enviados desde el
Laboratorio de Química Forense a la sala de muestras en tránsito del Laboratorio de
Genética Forense mediante el sistema de tubos neumáticos, minimizando el riesgo de
contaminación externa.
IV. Otros:
Cabe señalar que además de las áreas descritas, el Laboratorio de Genética

Forense, cuenta con el sistema de tubos neumáticos, que permiten el transporte del
material biológico ya levantado desde el Laboratorio de Química Forense al Laboratorio de
Genética Forense y desde la sala de toma de muestras al Laboratorio de Genética
Forense, específicamente a la sala de evidencias en tránsito, donde se redireccionan a la
sala de extracción.
B. Salas ubicadas al interior del Laboratorio de Genética Forense:
El Laboratorio de Genética Forense cuenta básicamente con dos grandes áreas de

trabajo, “Área Sucia” y ”Área Limpia”, las cuales se subdividen en salas debidamente
amobladas y acondicionadas según el tipo de trabajo que en ellas se realiza.
B.1. Área Sucia:
Está compuesta por las salas que tienen como fin efectuar las labores
complementarias al Análisis de ADN propiamente tal.
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I. Sala de preparación de reactivos:
Sala aislada en la cual se preparan los reactivos necesarios, principalmente los buffer
utilizados en la extracción y purificación de ADN, para ello cuenta con un pHmetro, una
placa calefactora con agitador magnético y una balanza analítica.
II. Sala de lavado y esterilización:
Sala aislada en la cual se cuenta con un lavadero que permite lavar el material de
vidrio utilizado en la preparación de los reactivos; posee un destilador y un purificador de
agua (para la obtención de agua de 18,2 M) con la finalidad de proveer del agua
necesaria para los análisis, además mantiene instalado un autoclave con la finalidad de
esterilizar todo el material (plástico desechable, buffer, entre otros) utilizado en los
diferentes procesos.
III. Oficina administrativa:
Lugar destinado a la confección de informes, archivo de documentación y labores de

carácter administrativas, provisto de cuatro escritorios con su respectivo computador, (uno
para cada profesional).
IV. Sala de evidencia transitoria:
Sala que posee conexiones del sistema de tubos neumáticos a la sala de toma de
muestra, Laboratorio de Química Forense y sala de extracción, es en este lugar donde las
muestras se redireccionan según corresponda.
V. Otra:
 Además de las salas señaladas anteriormente, existe otra sala que no presta
utilidad directa en el flujo de trabajo de Análisis de ADN, no obstante es parte de la
dinámica pericial del Laboratorio, destinada al resguardo de vestimentas y pertenencias de
los profesionales que trabajan en el Laboratorio de Genética Forense.
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B.2. Área Limpia:
Es un área de acceso restringido, donde sólo pueden ingresar profesionales que

laboran en este Laboratorio especializado y el Director técnico del Laboratorio. Para este
fin consta con un sistema biométrico de identificación vascular. Este sector incluye cuatro
salas debidamente aisladas, acondicionadas y climatizadas (según la necesidad particular
de cada una), propias del Análisis de ADN.
I. Extracción:
Esta sala se encuentra equipada con equipos de refrigeración, campana de

extracción, vórtex, centrífugas para microtubos, temomezcladores, baños termorregulados,
refrigeradores y todos los insumos, material y reactivos necesarios para que los
profesionales procesen adecuadamente el material biológico, (previamente levantadas en
el Laboratorio de Química Forense) conforme a los protocolos establecidos para la
extracción y purificación de ADN. ( Ver PROCEDIMIENTO: EXTRACCIÓN Y PURIFICACION DE ADN
A PARTIR DE MATERIAL BIOLÓGICO, Pág. 21).
II. Cuantificación:
Sala que cuenta con un equipo de PCR en tiempo real que facilita el proceso de
cuantificación. (Ver PROCEDIMIENTO: CUANTIFICACIÓN DE ADN, Pág. 34).
III. Preparación de la PCR:
Sala en la cual se prepara la mezcla de reacción necesaria para someter las muestras ya
cuantificadas a la reacción en cadena de la polimerasa, más conocida como PCR, por su
sigla en inglés “Polimerase chain reaction”, para ello cuenta con cabina para pre-pcr y
refrigerador. (Ver PROCEDIMIENTO: AMPLIFICACIÓN DE ADN Pág. 39).
IV. Trabajo post PCR (Análisis de fragmentos de ADN):
Esta sala cuenta con dos sectores de trabajo, uno donde se localizan los
termocicladores y se efectúa la amplificación; el otro donde se encuentran los analizadores
genéticos asociados a sus respectivas UPS y unidades computacionales, mediante los
cuales se detecta y analiza el producto amplificado. ( Ver PROCEDIMIENTO: DETECCION DEL
PRODUCTO AMPLIFICADO, Pág 43).
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TÍTULO II: PROCEDIMIENTOS
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A.- P R O C E D I M I E N T O S P R E - A N A L Í T I C O S Y
FLUJO DE TRABAJO
Corresponden a todas las labores previas - administrativas y de laboratorio - a la

realización de los análisis para obtención de perfiles genéticos.
A.1.- Sobre muestras y evidencias.
A.1.1.- Recepción de documentación:
El documento requirente - emanado por Fiscalías del Ministerio Público, Tribunales

Ordinarios, Especiales o la Propia Institución - debe estar acompañado del Formulario
Único de Solicitud Pericial de ADN (con el detalle de las muestras y evidencias remitidas).
La totalidad de la documentación requirente es ingresada en la Oficina de órdenes

judiciales de este Departamento, donde se le asigna un número de Informe Pericial (único
e irrepetible) que permite la tramitación. Una vez realizados los trámites administrativos, el
documento es remitido al Laboratorio de Genética Forense, donde el Director Técnico lo
asigna a un profesional del Laboratorio para obtención de perfil genético. ( Para mayor
información ver ANEXO C FLUJOGRAMA DE TRABAJO DEL LABORATORIO DEL GENÉTICA FORENSE)
A.1.2.- Recepción de las muestras y evidencias:
Por otra parte las evidencias y/o muestras biológicas son recibidas en la oficina de
Custodia y Despacho de evidencias del Departamento de Criminalística de Carabineros de
Chile “LABOCAR”, en caso de tratarse de material biológico delicado (sangre líquida,
restos orgánicos, entre otros) éste es revisado por un profesional, con objeto de verificar
su estado y dar instrucciones atingentes a su correcta conservación, según lo estipulado
en el art. 19º del Reglamento de la Ley N° 19.970 que crea el “Sistema Nacional de
Registros de ADN”.
Las evidencias son resguardadas en la Oficina de Custodia y Despacho de manera
transitoria, a la espera de ser retiradas por el profesional encargado de los análisis y
confección de informe pericial respectivo.
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A.1.3.- Revisión de las muestras y evidencias:
Las muestras y/o evidencias biológicas son retiradas desde la Oficina de Custodia y
Despacho de evidencias y trasladadas al Laboratorio de Química Forense, por el
profesional del Laboratorio de Genética Forense designado para efectuar los análisis
solicitados.
Una vez en el Laboratorio, el profesional a cargo debe verificar lo siguiente:
a. Estado de conservación: Es necesario verificar si se encuentran conservadas

adecuadamente y si su estado es compatible con la realización de los análisis
solicitados.
b. Formulario de cadena de custodia: verificar que se encuentre llenado correctamente

y que la descripción de las evidencias concuerde con las que mantiene en su poder, en
caso de alguna inconcordancia, debe señalarlo en el rubro observaciones.
c. Debe verificar que las evidencias remitidas sean las necesarias para la realización
de las pericias solicitadas en el oficio requirente. En caso de que el documento haga
referencia a evidencias o muestras no remitidas, el profesional a cargo del peritaje
debe coordinar directamente con el Fiscal a cargo la remisión de dichas evidencias o
toma de muestras testigo, si procediere.
A.1.4.- Determinaciones previas:
Si las muestras remitidas no han sido sometidas a ningún tipo de determinación

previa (realizada por otro profesional, ya sea en el Laboratorio de Biología Forense o en
alguna de las distintas Secciones Regionales de Criminalística de Carabineros), éstas son
procesadas, de acuerdo a lo siguiente:
a. Registro fotográfico: Todas las evidencias no analizadas con anterioridad o que no

posean un set fotográfico previo son fijadas fotográficamente, en el caso de
aquéllas que presenten alguna señal característica (mancha u orificio), se realiza
además una fotografía en detalle.
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b. Descripción: Se efectúa una descripción detallada de la evidencia, desde lo general

con observación macroscópica, a lo particular mediante observación bajo lupa
estereoscópica, caracterizando las manchas y señales de interés criminalístico.
c. Determinaciones orientativas: En el caso que la evidencia presente manchas

posiblemente biológicas, se realizan exámenes de carácter orientativo, con la
finalidad de objetarlo o confirmarlo (Para mayor información ver MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO DE BIOLOGÍA FORENSE ).
d. Determinaciones de certeza: En el caso que la determinación orientativa confirme

que la mancha es de naturaleza biológica, se realizan las determinaciones de
certeza, que permiten establecer si dichas manchas corresponden a indicios
biológicos humanos, (sangre o fluido seminal) ( Para mayor información ver MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO DE BIOLOGÍA FORENSE )
A.1.5.- Levantamiento del material biológico:
Después de determinar que la evidencia presenta indicios biológicos de origen

humano, se procede al levantamiento de las muestras que serán sometidas al proceso de
determinación de perfil genético, utilizando para ello material esterilizado (pinzas, tijeras,
hisopos, tubos de microcentrífuga, etc.), en un área libre de contaminación y
especialmente destinada a tal efecto en el Laboratorio de Biología Forense.
La Selección del material biológico analizado frecuentemente, se detalla a

continuación:
a. Pelos: Si el largo es mayor a 2 cm., se corta la zona cercana al bulbo (raíz), los
pelos de menor tamaño se introducen completos en el tubo para posterior análisis.
b. Colillas de cigarrillo: Se fragmenta aproximadamente 1 cm. de la zona de la
boquilla.
c. Hisopos: Se disecciona una parte del material de algodón, cuidando dejar suficiente
muestra para una eventual repetición (en los casos en que haya remanente de
muestra).
d. Telas, papeles: Si la mancha se encuentra concentrada, se recorta un trozo de la
mancha de 1 x 1 cm. (para colocarla en el tubo de microcentrífuga se fragmenta en
trocitos más pequeños de aproximadamente 0,3 x 0,3 cm. La cantidad dependerá del
tipo y calidad de la muestra).
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e. Otros soportes: En aquellos soportes en los cuales no se pueda recortar (cuchillos,

armas de fuego, vidrio, etc.), se procede a levantar la muestra mediante hisopado con
suero fisiológico utilizando la técnica de doble tórula, que consiste básicamente en
aplicar sobre la misma superficie primero una tórula húmeda y una segunda tórula seca
(Legal Medicine 9 (2007)181-184).
Una vez efectuada la selección de la muestra, es colocada al interior de un tubo de

microcentrífuga de 1,6 ml. previamente esterilizado y debidamente rotulado.
A.1.6.- Traslado del material biológico:
Los tubos de microcentrífuga con el material biológico, son trasladados al Laboratorio

de Genética Forense (sala de extracción) a través del sistema de tubos neumáticos.
Una vez que los tubos llegan al Laboratorio de Genética Forense, son registrados en
el libro de “Ingreso de muestras para obtención de perfil genético”, siendo rotuladas e
identificadas con el número de ADN respectivo, el cual forma parte del “Specimen ID”,
según lo establecido por Servicio de Registro Civil e Identificación, para efectos de la
aplicación de la Ley Nº 19.970 que crea el Sistema Nacional de Registros de ADN ( Ver
PROCEDIMIENTOS: Detección del Producto Amplificado, Pág 43).
A.2.- Sobre toma de muestras testigo.
A.2.1.- Requerimiento para una toma de muestras testigo:
Para efectuar una toma de muestra, primeramente debe existir una solicitud
emanada de un organismo competente (Tribunales de Justicia Ordinarios, Especiales;
Fiscalías del Ministerio Público) enmarcada en la investigación de un hecho delictual, el
documento requirente debe consignar el rol único de causa (R.U.C.), delito investigado y
los datos de la persona (nombre completo y número de cédula nacional de identidad).
Además de lo anterior, en caso de las Fiscalías del Ministerio Público, éstas deben
solicitar telefónicamente una hora de atención al número 02-29220983, con la finalidad de
optimizar el trabajo en el Laboratorio.
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A.2.2.- Aspectos técnicos y prácticos:
a. Elementos necesarios: Antes de comenzar con el procedimiento para toma de

muestras se debe verificar que la sala de toma de muestras cuenta con los materiales
y documentos necesarios, correspondientes a:
a.1) Materiales:
 Insumos desechables de bioseguridad (guantes, mascarilla y gorro).

 Delantal.
 Algodón.
 Papel absorbente.
 Alcohol.
 Lanceta desechable de seguridad o lanceta universal con lápiz porta lanceta.
 Tarjeta tipo “Gene Card” con su respectivo sobre de aluminio y desecante.
 Tampón para impresión dactilar.
 Lápiz pasta (azul o negro).
 Bolsa plástica para embalaje.
 Caja para eliminación de material cortopunzante.
a.2) Documentos:
 Acta de autorización voluntaria para toma de muestra biológica. ( Ver ANEXO A.I).
 Formulario de cadena de custodia. (Ver ANEXO A.II).
b. Verificación de Identidad: Previo al procedimiento, personal de dotación del

Laboratorio de Huellas verifica la identidad de la persona mediante sistema biométrico
o ficha decadactilar.
c. Consentimiento: Al individuo involucrado se le da a conocer en forma personal el

procedimiento al cual será sometido, explicándole que la muestra tiene como finalidad
determinar su perfil genético. Se completan los ítems “I” y “II” del Acta de Autorización
Voluntaria para toma de muestras biológicas, (según Art. Número 198 del C.P.P.; ( Ver
ANEXO A.I) con el consentimiento de la persona. En caso de tratarse de un menor de
edad, se requiere el consentimiento de su representante legal (padre, madre, tutor,
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cuidador etc.). El acta debe ser efectuada en duplicado (Una es anexada a Formulario
de Cadena de Custodia y la otra se archiva en el Laboratorio).
d. Toma de muestra biológica: Cumpliendo con las normas de bioseguridad, las

muestras son efectuadas en la sala de “toma de muestras”, efectuándose dos tipos de
toma: sangre y contenido bucal.
d.1) Normas de Bioseguridad: La persona que toma la muestra testigo, deberá

cumplir a cabalidad con las medidas de bioseguridad, conforme al siguiente protocolo:
1. Lavarse las manos con agua y jabón desinfectante previa y posteriormente al

proceso de toma de muestra.
2. Usar delantal, guantes, mascarilla y gorro desechables (para evitar cualquier tipo de
contaminación).
3. Maximizar las medidas de seguridad en la manipulación del material punzante, para
evitar accidentes.
4. Resguardar la integridad de la muestra biológica, debiendo ser ésta debidamente
embalada en sobres de aluminio recubiertos con papel.
5. Desechar la totalidad del material punzante en la caja para eliminación de material
cortopunzante.
d.2) Procedimiento Toma muestra de sangre: El procedimiento de toma de

muestra de sangre es por punción capilar en uno de los dedos de la mano, mediante el
uso de una lanceta estéril de seguridad con una profundidad de punción de 2,0 mm. (no
necesita de lápiz porta lanceta) o lanceta universal con uso de lápiz porta lanceta
colectándose la sangre en una tarjeta tipo “Gene Card”, acorde al siguiente protocolo:
Protocolo:
1. Limpiar con un algodón con alcohol la yema del dedo a puncionar.

2. a.- En el caso de usar lanceta de seguridad: girar la tapa pequeña de la lanceta, en
1/4 de vuelta y jalar la tapa hacia fuera.
b.- En el caso de usar lanceta universal: instalar la lanceta en el lápiz porta lanceta
3. En ambos casos presionar firmemente el botón de la lanceta contra la yema a
puncionar.
4. Esperar que se forme una gota de sangre (se puede aplicar cuidadosamente
presión junto a la zona de punción para acelerar el proceso).
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5. Colectar la sangre en una tarjeta tipo “Gene Card” (evitando frotar el dedo contra la
tarjeta), procurando que la mancha sea de al menos 0.8 mm.
6. Limpiar nuevamente la zona de punción con la finalidad de eliminar restos de
sangre.
7. Dejar secar la muestra a temperatura ambiente.
8. Guardar la tarjeta en el sobre metálico, debidamente rotulado con el nombre y C.I.
de la persona, agregar el desecante y sellar, colocando para ello uno de los cuatro
números únicos de evidencia N.U.E. del formulario de cadena de custodia respectivo.
(Continuar en e Embalaje y Sellado).
d.3) Toma muestra de contenido bucal: El procedimiento de toma de muestra de

contenido bucal es mediante el uso de hisopos estériles y/o colector bucal (se efectúa en
duplicado), acorde al siguiente protocolo:
1. Indicar a la persona que debe enjuagarse la boca con agua (en caso de bebés no
hacerlo).
2. Abrir la boca del individuo e introducir hisopo o colector bucal.
3. Frotar la zona de colección contra las paredes internas de las mejillas con la
finalidad de colectar la mayor cantidad de células epiteliales. Evitar tocar el paladar y
zona de los dientes.
4. Realizar este procedimiento en duplicado (repetir pasos 2 y 3).
5. Dejar secar la muestra a temperatura ambiente.
6. Guardar muestras en el contenedor correspondiente y sellarla colocando uno de
los cuatro N.U.E. del formulario de cadena de custodia respectivo. (Continuar en e.
Embalaje y Sellado).
e. Embalaje y Sellado: Seguir el siguiente protocolo:
e.1) Llenado de cadena de Custodia: Completar el formulario de cadena de

custodia del cual ha retirado los N.U.E. (Ver ANEXO A. II), consignando:
 Rol único de causa (R.U.C.).
 Dirección del S.S. “Calle Maule Nº 40, Santiago”.
 Lugar Exacto del Levantamiento: “Sala de Toma de Muestras Labocar”.
 Descripción de la especie: Muestra Testigo de sangre (o contenido bucal)
correspondiente a Nombre completo y C.I. de la persona,
 Indicar en el rubro Observaciones: “Se adjunta Acta de Autorización Voluntaria”.
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 Datos de quién tomó la muestra.
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e.2) Embalaje: Depositar en una bolsa (embalaje secundario) la muestra testigo

(tarjeta tipo “Gene Card” en el sobre metálico, colector bucal, etc.).
e.3) Sellado: Adherir la bolsa en la que embaló la muestra testigo al formulario de

cadena de custodia respectivo (con el adhesivo que trae cada formulario).
e.4) Finalización de Acta de Autorización de Toma de muestra biológica:

Completar los ítem “III y IV” del Acta de Autorización Voluntaria para toma de muestras
biológicas (Ver ANEXO A.I), embalar una de las dos copias en una bolsa, para adjuntarla al
formulario de cadena de custodia de la muestra.
f. Custodia transitoria: La muestra se conserva a temperatura ambiente, en

dependencias de este Laboratorio, a la espera de ser sometida a análisis para obtención
de perfil genético.
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B.- P R O C E D I M I E N T O S A N A L Í T I C O S
En el Laboratorio de Genética Forense, se efectúan los procesos propios para la

obtención y determinación de perfiles genéticos. Lo anterior implica aislar las moléculas de
ADN del resto de material biológico presente en una determinada muestra, para
posteriormente analizar sólo ciertas regiones del ADN, concretamente zonas polimórficas.
La obtención de ADN para obtención de perfil genético se realiza en cuatro etapas:

Extracción y Purificación de ADN a partir de material biológico; Cuantificación de ADN;
Amplificación de ADN y Detección del producto amplificado, las cuales se detallan más
adelante.
B.1.- PRIMERA ETAPA: “EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ADN A

PARTIR DE MATERIAL BIOLÓGICO”.
La Extracción de ADN consiste en separar las moléculas de ADN del resto del
material celular, es un paso fundamental en la determinación de perfiles genéticos de
muestras forenses, pues el éxito del análisis puede verse afectado en gran medida si no
se realiza un buen aislamiento de las moléculas de ADN.
El Laboratorio cuenta con una sala aislada y acondicionada con el mobiliario,

equipamiento y elementos necesarios para esta etapa.
TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN:
B.1.1.- Kit Comercial para extracción de ADN Forense mediante

partículas magnéticas.
I. Fundamento de la técnica
El kit para extracción de ADN forense utilizado, se fundamenta en una combinación de
partículas magnéticas con estructura única y una química de superficie optimizada para
proporcionar una eficiente capacidad de unión del ADN y una máxima recuperación
posterior.
El complejo de ADN magnetizado se mantiene estable durante los pasos de lavado, que
permiten la eliminación de los inhibidores, y posteriormente se logra una liberación
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eficiente de ADN durante la elusión, obteniendo un alto rendimiento, con ADN de alta
calidad.
II. Sobre el material biológico
Esta técnica se utiliza como el método principal para extracción de ADN.
Las evidencias desde las cuales se desea obtener el ADN pueden ser de diversa
naturaleza (pelo, sangre, semen, etc), encontrándose generalmente adheridas a un
soporte (tela, madera, metal, etc.).
Las evidencias requieren diferentes tiempos de incubación de acuerdo a su naturaleza,

durante 20 minutos fluido corporal, 40 minutos manchas secas y 90 minutos para muestra
que contengan semen. Esta técnica es también aplicable a las fracciones obtenidas
mediante lisis diferencial.
III. Aspectos administrativos
Cada evidencia debe ser registrada en el libro de “Ingreso de muestras para obtención de
perfil genético”, asignándole un número de ADN, aun cuando se trate de la repetición de
una muestra ya analizada. Cada tubo de microcentrífuga utilizado en el proceso de
análisis debe rotularse con el respectivo número, mediante el uso de un marcador
indeleble en la tapa y el costado.
IV. Procedimiento
a. Materiales:
a. Tubos de 1,5 o 2,0 ml spin tube

b. Columnas de filtración
c. Base magnética
d. Termo block para tubos de 1,5 o 2,0 ml con agitación
e. Micro centrifuga
f. Micropipetas con sus respectivas puntas desechables, capacidad de 100-1000 µl,
20-200 µl y 2-20 µl.
g. Lápiz marcador indeleble
23
b. Reactivos:
1. Buffer de Lisis (kit comercial)

2. DTT 1,0 M (1,54 gr de Dithiothreitol en 10 ml de agua libre de ADN)
3. Partículas Magnéticas (kit comercial)
4. Buffer de lavado (kit comercial)
5. Buffer de elusión (kit comercial)
6. Isopropanol.
Nota: Para mayor información sobre reactivos y soluciones: Ver MANUAL DE
ESTERILIZACIÓN Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y SOLUCIONES DEL LABORATORIO DE
GENÉTICA FORENSE.
c. Protocolo:
c.1.- LISIS.-
1. Encender el Block de temperatura para que alcance 70º C.
2. Colocar el material biológico en un tubo de 1,5 o 2,0 ml.
3. Agregar 300 ul de Lysis buffer (o 500 ul para cubrir toda la muestra).
4. Agregar 3 ul de DTT ( 5 ul para semen).
5. Vortex 5 seg, centrifugar brevemente.
6. Incubar a 70 ºC a 900 rpm el tiempo requerido de acuerdo al tipo de muestra:
durante 20 minutos fluido corporal, 40 minutos manchas secas y 90 para semen.
7. Terminada la incubación llevar block a Tª ambiente para uso posterior.
c.2.- REMOCIÓN DEL SOPORTE QUE CONTIENE LA MANCHA.-

8. Se procede con la columna y el “spin tube” en forma similar a los “basket
insert” vaciando el contenido de la lisis dentro del canastillo que se ha insertado en un
tubo de 1,5 ml. Centrifuga a máxima velocidad a (13,2 rpm) 5 minutos.
c.3.- UNIÓN DEL ADN A LAS PARTÍCULAS MAGNÉTICAS

9. Verificar que el líquido colectado se superior a 180 ul y se encuentre a
Tª ambiente.
10. Al tubo que almacena las partículas magnéticas dar vortex 5 segundos, centrifugar
brevemente, verificar la ausencia de pellet en éste.
11. Agregar al tubo de muestra 15 ul de partículas magnéticas, vortex y centrifugar
brevemente.
Nota: En caso de muestra abundante, puede agregar 10ul de partículas magnéticas.
24
12. Agregar 180 ul de isopropanol, vortex y centrifugar brevemente.

13. Colocar los tubos en block incubar 10 min a temperatura ambiente 1000 rpm.
14. Una vez terminado este paso llevar el block a 70 ºC para uso posterior.
c.4.- LAVADO DE ADN UNIDO A LAS PARTÍCULAS MAGNÉTICAS

15. A los tubos incubados (muestra y partículas) dar vortex y centrifugar
brevemente.
15. Colocar los tubos en la base magnética (6 y 16) aproximadamente 2
minutos verificando que todos los tubos tengan igual posición para visualizar la zona de
adherencia de partículas.
16. Sin sacar los tubos de la base magnética pipetear y eliminar todo el líquido visible.
17. Agregar 600 ul del buffer de lavado A.
18. Vortex y centrifugar brevemente, se puede ayudar a la resuspensión pipeteando,
no es inconveniente que se observen agregados de partículas.
19. Agregar 600 ul del buffer de lavado A.
20. Colocar los tubos en la base magnética al menos 1 minuto, repetir hasta un total de
3 lavados.
21. En el último lavado después de sacar el líquido visible manteniendo los tubos en la
base magnética con la tapa abierta, permitir secado 10 a 15 minutos a temperatura
ambiente.
c.5.- ELUCIÓN DE ADN UNIDO A LAS PARTÍCULAS MAGNÉTICAS

22. Agregar 50 ul del buffer de elusión al tubo con muestra seca.
Nota: En caso de muestra escasa resuspender en 35 ul de buffer de elusión.
23. Vortex 5 segundos hasta que no sean visibles partículas
magnéticas, centrifugar brevemente.
24. Colocar los tubos en block agitador a 70 ºC a 900 rpm durante 5
minutos.
25. Vortex y centrifugar brevemente.
26. Colocar en la base magnética, al menos un minuto.
27. Sin sacar de la base magnética retirar con pipeta el líquido y pasarlo
a un nuevo tubo debidamente rotulado para almacenamiento.
B.1.2.- Extracción diferencial de ADN en evidencias de contenido vaginal
y otras, relacionadas con delitos sexuales.
25
I. Fundamento de la técnica:
En las evidencias relacionadas con delitos sexuales, el problema fundamental que

surge para la determinación de perfiles genéticos es que las evidencias proporcionadas
presentan material biológico proveniente de la víctima que corresponde principalmente a
epitelio vaginal y del agresor correspondiente a espermatozoides. Por lo tanto, si estas
evidencias no son tratadas de manera especial, se obtendría como resultado una mezcla
de perfiles genéticos, que no posibilitaría discriminar respecto de la fracción femenina
como de la masculina.
Por lo anterior, se ha hecho indispensable contar con un procedimiento de extracción

alternativo, en donde la extracción diferencial es una versión modificada de la extracción
orgánica que permite separar las células del epitelio vaginal (víctima) y los
espermatozoides (agresor).
Esta extracción que incluye lisis diferenciada de los componentes celulares, se basa en
que la membrana nuclear de los espermatozoides es inalterable en una digestión sin el
agente DTT (Ditiotreitol; que rompe los puentes disulfatos de las proteínas presentes en la
membrana nuclear de los espermatozoides). El procedimiento rompe inicialmente sólo las
células del epitelio vaginal mediante incubación en una solución de SDS (detergente
aniónico) con proteinasa K, permitiendo así su separación de los espermatozoides, que
posteriormente son tratados con una solución de SDS con proteinasa K y DTT.
II. Sobre el material biológico:
Las evidencias generalmente corresponden a contenido vaginal en hisopos y junto con

ellos es frecuente que se remitan también hisopos con contenido anal o bucal. Además, se
procesan mediante este método las evidencias relacionadas con delitos sexuales en los
cuales se ha determinado la presencia de mezcla de sangre y semen (trozos de calzón,
otras prendas de vestir, papel higiénico, entre otros).
III. Aspectos administrativos:
Cada evidencias debe ser registrada en el libro de “Ingreso de muestras para obtención de
perfil genético”, asignándole un número de ADN a la fracción total, el número siguiente a la
fracción masculina y el siguiente a la fracción femenina. Cada tubo de microcentrífuga
26
utilizado en el proceso de análisis debe rotularse con el respectivo número, mediante el

uso de un marcador indeleble en la tapa y el costado.
IV. Procedimiento:
a. Materiales:
1. Material biológico a analizar.

2. Tubos para microcentrífuga de 1,6 ml.
3. Tubos para microcentrífuga con cesto filtrador.
4. Tubos con unidad concentradora para retención de ADN.
5. Micropipetas con sus respectivas puntas desechables, capacidad de 100-1000 µl,
20-200 µl y 2-20 µl.
6. Lápiz marcador indeleble.
b. Reactivos:
1. Tris/EDTA/NaCl (Tris HCl 10 mM -NaCl 100mM - EDTA 1 mM pH 8,0).

2. SDS 10%.
3. H2O 18,2 M.
4. Proteinasa K (20 mg /ml).
5. Buffer para lavado de esperma (Tris-HCl 10mM pH 8,0 - EDTA 10 mM - NaCl 50mM
- SDS 2%, pH8,0).
6. DTT 1M.

GENÉTICA FORENSE.
c. Protocolo para la obtención de la muestra:
1. Tomar la evidencia desde la cual se desea obtener el ADN (hisopo con contenido
vaginal, trozo de calzón, entre otros), en caso de un hisopo cortar la zona con el material
biológico (diseccionando el algodón), en caso de que la muestra se encuentre en tela o
papel, cortar un trozo con la mancha, de un tamaño apropiado, según las características
de ésta. (Para mayor información ver “PROCEDIMIENTOS PRE-ANALÍTICOS, Sobre muestras y
evidencias, Pág. 13).
2. Agregar el trozo de material biológico (tela, hisopado o bulbo, etc.; según

corresponda) a un tubo de microcentrífuga de 1,6 ml., previamente rotulado con el
27
número respectivo, correspondiente a la fracción masculina (FM).

3. Añadir 400 µl de Tris/EDTA/NaCl + 50 µl SDS 10% + 50 µl de H2O 18,2 M, 5 µl
Proteinasa K.
4. Incubar en baño termorregulado a 2 horas, a 37º C.
5. Centrifugar el tubo con la muestra en una microcentrífuga por 2 seg.
6. Transferir toda la muestra (hisopo con contenido vaginal, trozo de calzón, etc.)
incluido extracto, a un tubo de microcentrifuga con cesto filtrador rotulado con número
respectivo correspondiente a la fracción masculina (FM).
7. Centrifugar por 5 minutos a 13200 rpm. Conservar los restos del soporte que
quedan en el cesto filtrador en un tubo para microcentrífuga de 1,6 ml. rotulado con
número de ADN respectivo, correspondiente a la fracción total (FT), reservar para
continuar con procedimiento descrito en paso número 11.
8. Desde el tubo con número correspondiente a FM, remover el sobrenadante
(correspondiente a la Fracción Femenina FF) y conservarlo en un tubo limpio rotulado con
número de ADN respectivo correspondiente a la FF, reservar y continuar con
procedimiento descrito en paso número 14, “Debiendo mantener cuidado de no remover el
pellet (fracción masculina FM)”.
9. Lavar el pellet (FM) con 500 µl de Buffer de lavado de esperma, agitando en vórtex
brevemente, centrifugando por 5 minutos a 13200 rpm y descartar posteriormente el
sobrenadante.
10. Repetir paso número 9 hasta un total de 3 lavados.
11. A los tubos correspondientes a FM y FT agregar 150 µl de Tris/EDTA/NaCl, 100 µl
de SDS 10 %, 15,6 µl de DTT, 124 µl de H2O 18.2 M y 10 µl de Proteinasa K.
12. Incubar por 2 horas a 37° C.
13. Transferir la muestra del tubo FT, incluido el eluido, a un tubo con cesto filtrador y
centrifugar por 5 minutos a 13200 rpm, descartando la cesta con los restos del soporte;
ahora el líquido es la fracción total (FT).
14.- A los tubos con extracto de las muestras correspondientes a FT, FM y FF continuar
con extracción mediante partículas magnéticas a partir del punto c.3.- UNIÓN DEL ADN A
LAS PARTÍCULAS MAGNÉTICAS
B.1.3.- Purificación de sangre en papel tipo “Gene Card”.
28
El uso de papel tipo “Gene Card” involucra que las células presentes en la muestra
colectada, sufran lisis al contacto con el papel, siendo el ADN inmovilizado por la matriz
que él contiene.
El papel tipo “Gene Card” es un material absorbente basado en celulosa que contiene
cuatro sustancias químicas que tienen como objetivo proteger el ADN de degradación por
nucleasas y preservar la muestra de crecimiento bacterial.
EL ADN es purificado por lavados con un solvente que remueve los grupos heme y
diversos inhibidores de la amplificación.
Otra ventaja de este papel, es que permite amplificar el ADN sin necesidad de
cuantificación.
II. Sobre las muestras biológicas:
Se colectan en tarjetas tipo “Gene Card”, las muestras testigo de sangre tomadas por
personal de este Laboratorio, (mayor información en PROCEDIMIENTOS PRE-ANALITICOS: Sobre
toma de muestras biológicas, Pág. 13).
III. Aspectos administrativos:
Cada muestra debe ser anotada en el libro de “Ingreso de muestras para obtención de
perfil genético”, asignándole el número de ADN correspondiente. Cada tubo de
microcentrífuga 0,2 ml. utilizado en el proceso de análisis, debe rotularse con el respectivo
número de ADN, mediante el uso de un marcador indeleble en la tapa y el costado.
IV. Procedimiento:
a. Materiales:
1. Muestra de sangre a analizar en papel tipo “Gene Card”.

2. Tubos para microcentrífuga de tapa plana de 0,2 ml.
3. Micropipeta con sus respectivas puntas desechables, capacidad de 20-200 µl.
4. Dispositivo de corte para discos de 1,0 o 1,2 mm. “micropunch”.
b. Reactivos:
29
1. Buffer comercial para purificación de papel tipo “gene card”.

2. Buffer TE-4 (Tris-HCl 10mM pH 8,0 - EDTA 0,1 mM).
GENÉTICA FORENSE.
c. Protocolo:
1. Cortar la muestra desde la tarjeta tipo “Gene Card” usando un dispositivo de

corte circular “tipo sacabocado” (“micropunch”) y transferir a un tubo de microcentrífuga
de 0,2 ml. (rotulado con el número de ADN), se recomienda analizar al menos dos
discos con muestras de 1,0 o 1,2 mm.
Nota: Para evitar exceso de ADN, dividir en al menos dos partes los discos).
2. Al tubo con la muestra (discos) añadir 200 µl del reactivo para purificación de
papel tipo “Gene Card”.
3. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
4. Cuidadosamente remueva y descarte con una micropipeta de 200 l el

reactivo para purificación de tarjetas tipo “Gene Card” presente en el tubo.
5. Repetir los pasos 2 a 4 un total de 3 veces.
6. Agregar 200 µl de Buffer TE-4 al tubo de 0,2 ml. con las muestras (discos).
7. Incubar por 5 minutos a temperatura ambiente.
8. Descartar el buffer del tubo de 0,2 ml.
9. Repetir los pasos 6 a 8 por un total de 3 veces.
10. Dejar secar los discos con muestras (en el mismo tubo) a temperatura
ambiente por 1 hora o en calefactor a 56 °C por 10 minutos.
Una vez que los discos se encuentren secos, están listos para la etapa de amplificación
(no se requiere cuantificar).
Nota: En caso de no haber dividido los discos, resuspender un disco en 50 ul de TE, tomar el
disco para amplificación.
d. Protocolo Alternativo:
En caso de efectuar amplificación con kit de amplificación directa, se incorpora el disco sin
ser sometido a procedimiento de extracción directamente al tuvo con mix de reacción para
pcr, siguiendo las indicaciones del fabricante.
30
B.2.- SEGUNDA ETAPA: “CUANTIFICACIÓN DE ADN”.
Una vez extraído y purificado el ADN, debe ser cuantificado con la finalidad de
determinar la cantidad y calidad de ADN que se ha logrado aislar. Actualmente este
Laboratorio cuenta con una técnica para cuantificar el ADN basada en la reacción en
cadena de la polimerasa PCR en tiempo real, dependiendo del tipo de muestras es el kit
de cuantificación que se usa.
Las muestras testigo y aquellas evidencias (papeles filtro, telas, etc.) que mediante
inspección visual presentan abundante muestra biológica, son cuantificadas en base a la
técnica de PCR en tiempo real, mediante el uso de un kit comercial para ADN humano
total.
Las muestras relacionadas con delitos sexuales y las evidencias que visualmente
presentan escaso material biológico (vasos, pelos), se cuantifican en base a la técnica de
PCR en tiempo real, mediante el uso de un kit comercial para ADN humano total y
cromosoma Y.
El resultado del proceso de cuantificación, determina el curso a seguir con el extracto

de ADN, de acuerdo a lo siguiente:
 Las muestras cuantificadas mediante PCR en tiempo real que presentan una
concentración superior a 0,05 ng/µl, se someten a amplificación, efectuando la
dilución necesaria para obtener una concentración final entre 0,1-0,05 ng/ul
según recomendación del fabricante.
 Si el análisis de PCR en tiempo real entrega un valor de concentración igual o

inferior a 0,05 ng/µl, se somete a amplificación directa y/o se concentra. Si la
muestra biológica original lo permite, se repite el análisis desde el principio
(etapa de extracción y purificación).
31
B.2.1.- Cuantificación mediante PCR en Tiempo Real.
Los ensayos de identificación humana basados en PCR requieren un estrecho rango

de concentración de ADN.
El protocolo de trabajo se basa en las indicaciones para la cuantificación de ADN
mediante PCR en tiempo real.
II. Aspectos técnicos:
a. Equipo utilizado:
7500 Real HID -Time PCR system.
b. Software:
HID Real -Time PCR Analysis v 1.0.
III. Procedimiento:
a. Materiales y Reactivos:
1. Extracto de ADN (obtenido en la primera etapa).

2. Dilución seriada de los estándares de concentración de ADN para la curva de
calibración.
3. Placa de 96 pocillos.
4. Film adhesivo de calidad óptica (para cubrir placa).
5. Kit para cuantificación de ADN humano total y/o cromosoma Y.
6. Buffer TE-4 (Tris-HCl 10mM pH 8,0 - EDTA 0,1 mM).
b. Protocolo para preparación del ADN estándar para la curva de calibración:
32
En un tubo de microcentrífuga de 0,6 ml. se preparan los estándares de concentración

de ADN a partir del estándar de ADN genómico (200 ng/µl) incluido en el Kit de
cuantificación, según lo siguiente:
33
Concentración Preparación
Estándar ADN Buffer TE-4
(ng/µl)
STD 1 50 10 µl (200 ng/µl) 30 µl
STD 2 16,7 10 µl del STD 1 (50 ng/µl) 20 µl
STD 3 5,56 10 µl del STD 2 (16,7g/µl) 20 µl
STD 4 1,85 10 µl del STD 3 (5,56 ng/µl) 20 µl
Tabla 3: Preparación de estándares de concentración ADN para la curva de calibración.
c. Protocolo para preparación de los componentes de la reacción:
1.- Al abrir una caja del kit de cuantificación, se debe mezclar la totalidad del Mix de PCR
con la totalidad del mix de partidores. Y alicuotar en tubos de 1,6 ml, debidamente
numerados..
2.- Al comenzar una nueva cuantificación debe definir la distribución de las muestras y de
los estándares de concentración en la placa, dejando registro escrito en la hoja de registro
designada para este fin. (Ver ANEXO A. IV a).
3.- A partir de las alícuotas de mix de reacción distribuir 23 µl de la mezcla en cada pocillo
de la placa de 96 pocillos y adicionar 2 µl de ADN extraído y estándares de concentración
de ADN en la placa según la distribución previamente establecida, tapar cuidadosamente
con el film adhesivo de calidad óptica (evitando tocar) y continuar con el procedimiento
detallado a continuación.
IV. Como operar el Real Time:
1. Verificar que el PC y el equipo se encuentren encendidos. De lo contrario:

 Encender el PC y hacer login.
 Encender equipo 7500 Real -Time PCR system y esperar que se
encuentre listo para su uso (verificar palabra “POWER” en color verde).
2. Poner la placa en la bandeja del equipo 7500 Real-Time PCR system.
3. Iniciar el Software “HID Real - Time PCR Análisis v 1.0”.
4. Seleccionar el ensayo correspondiente al kit utilizado.
5. En la opción Setup Ingresar los siguientes datos de configuración del
experimento:
34
 Experiment name: nombre del proyecto indicando rótulo de muestras a

analizar.
 Plate setup: Se ingresan las muestras a analizar al programa y se asigna
la ubicación de éstas en la placa de 96 pocillos, definidos anteriormente
en la hoja de registro (Ver ANEXO A. IV a). Para ello se usan los comandos
Defined samples y Assign target and samples.
 Defined samples: Por defecto el programa ya define los ocho estándares
de ADN más una muestra problema. De ser necesario se debe hacer clic
en el comando add new sample para que el programa incluya una nueva
muestra en el proyecto.
 View plate layout: Esta opción nos permite definir la ubicación de las
muestras y de los estándares de ADN en la placa. El programa por
defecto ubica los ocho estándares de concentración de ADN en las
columnas “1” y “2” (todas en duplicado), por lo que el usuario debe
vincular las muestras problema en la placa según la ubicación antes
asignada a partir de las columnas “3” y “4”. Si los estándares se ubican
en posiciones diferentes a las sugeridas por el programa, se debe asignar
la ubicación de forma manual usando los comandos cut y paste. Por
último se debe dejar en blanco todas las posiciones en la placa que no
incluyan muestras ni estándares, utilizando el comando clear.
6. Antes de dar inicio al análisis de la placa, se debe revisar (en la viñeta Assig
target (s) to select wells) que cada muestra tenga seleccionadas las casillas Quant IPC
(que es el control positivo interno) y Quant. Human.
I. Como analizar los resultados:
Una vez concluida la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, el Software

entrega los datos de la curva de calibración y la concentración de las muestras problemas.
Se debe evaluar la curva de la calibración considerando lo siguiente:
35
Indicador de calidad Valor ideal Rango aceptado

Slope: Refleja la eficiencia de la -3,32 (100% efficiency) -2 ,9 a -3,3
amplificación
R2: indica la significancia estadística de la 0,999 Valores sobre 0.98
curva estándar
Tabla 5: Parámetros y valores a evaluar en curva de calibración.
Si no hay cuantificación de ADN, se debe verificar el resultado de amplificación para el

control positivo interno “IPC” de cada muestra, según lo siguiente:
 Si hay amplificación del IPC indica ausencia de ADN o presencia de ADN altamente
degradado.
 Si no hay amplificación del IPC indica la presencia de inhibidores de la reacción de
polimerización, en este caso y si existe extracto suficiente de ADN, se realiza
lavado con isopropanol según lo señalado en la primera etapa.
 Si hay amplificación bajo 0,023 ng/ul se debe considerar que se trabaja en el límite
de cuantificación de la técnica.
Finalmente, se registran los resultados de la concentración de cada muestra en el libro

registro correspondiente y la dilución realizada.
36
TERCERA ETAPA: “AMPLIFICACIÓN DE ADN”.
Una vez cuantificado el ADN, se somete al proceso de amplificación, consistente en

copiar muchas veces el fragmento de ADN que se desea estudiar para obtener una
cantidad adecuada que permita su detección.
La amplificación se lleva a cabo mediante la técnica de reacción en cadena de la

polimerasa PCR (de su sigla en ingles), utilizando kits de amplificación basados en el
análisis de pequeñas secuencias repetidas de ADN no codificantes, llamadas STR (“short
tandem repeat”), conocidas comúnmente como microsatélites, que permiten la evaluación
de polimorfismos en cuanto a la secuencia nucleotídica de la región variable, además de
las diferencias de longitud dadas por el número de copias de la secuencia repetida. Los
partidores de PCR son marcados con moléculas fluorescentes (fluoróforos) que permiten
el análisis posterior de los fragmentos amplificados.
Tal proceso se realiza en una sala aislada destinada para ese fin y para evitar
cualquier posibilidad de contaminación dentro de un gabinete exclusivo para trabajo de
PCR. En cada set de amplificación se realizan un control negativo (agua 18,2 M) y uno
positivo (correspondiente a extracto de ADN proporcionado por el kit utilizado). Las
muestras son amplificadas en un termociclador convencional.
Todas las muestras son amplificadas mediante el uso de un kit comercial para
genes autosómicos (que al menos incorpore la totalidad de los marcadores necesarios
para la base de datos CODIS), en caso de ser necesario se realiza una segunda
amplificación mediante el uso de kits comerciales complementarios, de acuerdo a lo
siguiente:
 Kit Alternativos: Se utilizan en las muestras que no presentan amplificación

mediante el kit convencional para genes autosómicos habiendo cuantificado ADN
positivamente mediante PCR en tiempo Real y en aquellas muestras que amplifican
parcialmente con el kit convencional para genes autosómicos. Específicamente
cuando los loci en los cuales no se obtuvo amplificación corresponden a uno o más
de los loci factibles de analizar utilizando el kit alternativo.
 Kit para Cromosoma Y: En muestras provenientes de delitos sexuales o mezclas de

perfiles de diferente sexo, en las cuales no fue posible obtener el perfil masculino
único y en aquéllas donde se requiere confirmar un perfil masculino que amplifica
37
parcialmente en los marcadores de tipificación para genes autosómicos (contando

con muestra testigo).
También es utilizado en paternidades dudosas que presentan diferencias en uno o

dos locus, donde el hijo es hombre.
Como se ha mencionado la amplificación se efectúa mediante la PCR, que permite

replicar varios fragmentos específicos de ADN en paralelo acelerando los análisis,
evitando de esa manera agotar la muestra.
La reacción en cadena de la polimerasa PCR es un proceso in vitro que produce

millones de copias de los fragmentos STR de ADN deseados, mediante una reacción
cíclica enzimática que replica repetitivamente el ADN, así los productos de ADN de un
ciclo de PCR son utilizados como sustratos en el ciclo siguiente, permitiendo un aumento
exponencial de los fragmentos. Por lo tanto, si se comienza con cantidades subanalíticas
de ADN, se termina la reacción con cantidades analíticas que permiten su detección.
II. Aspectos teóricos - técnicos:
El instrumento que efectúa los ciclos térmicos es conocido como termociclador, los
programas utilizados dependen de los fragmentos STR a analizar, estando definidos por
los kit de amplificación, según indicaciones del fabricante.
Los kits utilizados actualmente en este Laboratorio son de uso forense, con
tecnología de marcadores fluorescentes de multicolores, que permiten el análisis
simultáneo de múltiples loci, incluso loci que presentan alelos sobrelapados, diferenciados
por partidores de distintos colores. El proceso involucra cinco fluoróforos con colores en
diferentes longitudes de ondas, detallados en la siguiente tabla:
Fluoróforo Color
6-FAMTM Azul
VIC® Verde
NEDTM Amarillo
PET® Rojo
LIZ® Naranjo
Tabla 6: Fluoróforos.
38
III. Procedimiento:
a. Materiales:
1. Extracto de ADN a amplificar (diluido a concentración deseada con buffer de

elución).
2. ADN control positivo.
3. Control negativo. (Agua 18,2 M o TE-, o buffer de elución)
4. Control positivo.
5. Control blanco extracción.
6. Tubos para microcentrífuga de 0,2 ml.
7. Tubos para microcentrífuga de 0,6 ml. (para preparación de mix).
8. Micropipetas con sus respectivas puntas desechables, capacidad de 20- 200 µl, 2-
20 µl, 1-10 µl.
b. Reactivos:
1. Enzima Taq DNA polimerasa.

2. Kit comercial de amplificación (partidores y mix de reacción), dependiendo de los
loci a analizar (Kit: para genes autosómicos, cromosoma Y, Optimizado).
c. Preparación Master Mix:
1. En un tubo para microcentrífuga de 0,2 o 0,6 ml., se prepara el master mix,

incorporando el mix de reacción y los partidores del kit comercial de amplificación,
además de la enzima Taq DNA polimerasa (si corresponde), según la siguiente
proporción por cada muestra:
Componente Volumen (µl) Kit con uso de Volumen (µl) Kit sin uso de taq
taq polimarasa polimarasa
Mix de reacción del Kit 5,25 5
Partidores del kit 2,75 2.5
Taq DNA polimerasa 0,25 No lleva
Tabla 8: Preparación de mezcla
Nota: Tener en consideración sumar al número de muestras los controles (positivo y

negativo de amplificación, control blanco de extracción).
39
2. Una vez preparado el master mix, debe homogenizarse completamente, esto se

logra eficazmente agitando en vórtex por 3 segundos y luego centrifugando en
microcentrífuga por 3 segundos.
d. Protocolo general:
En cada tubo de microcentrífuga de 0,2 ml. debidamente rotulado con número de

ADN, se agregan 7,5 µl de Master mix y 5 µl del ADN diluido respectivo.
Finalmente los tubos con muestras (incluidos controles), son colocados en el

termociclador con el programa de termociclado según el tipo de Kit utilizado (para mayor
información ver detalle señalado en parte superior).
40
B.4.- ETAPA CUARTA: “DETECCIÓN DEL PRODUCTO

AMPLIFICADO”.
Esta etapa es la fase final del análisis de las muestras y es la que permite
caracterizar y clasificar los fragmentos de ADN amplificado.
El análisis de fragmentos se efectúa en la sala destinada a los Analizadores

Genéticos basados en electroforesis capilar .Esta sala cuenta con un equipo para la
mantención constante del la temperatura ambiental, integrado al techo.
Los fragmentos de ADN amplificado son separados en los analizadores genéticos,

mediante electroforesis capilar y son detectados por excitación de su fluorescencia por un
laser generando un electroferograma que señala los tiempos relativos de migración de los
fragmentos amplificados (eje X) versus la intensidad de fluorescencia (eje Y). La
fluorescencia detectada es colectada en un computador que interpreta la información,
entregando un electroferograma.
II. Procedimiento:
a. Materiales:
1. ADN amplificado a analizar.

2. Placa de 96 pocillos (con su respectiva septa).
3. Tubos para microcentrífuga de 1,6 ml. (para mix de reacción).
4. Micropipetas con sus respectivas puntas desechables, capacidad de 20- 200 µl, 2-
20 µl, 1-10 µl.
b. Reactivos:
1. Formamida desionizada calidad “Human identification HID”.

2. Estándar de Tamaño comercial (correspondiente al kit de amplificación).
41
c. Preparación Mix de reacción:
1. En un tubo para microcentrífuga de 0.6 o 1,6 ml, se prepara el mix de reacción

incorporando formamida y estándar de tamaño (verificando que quede homogénea
la mezcla), según la siguiente proporción por muestra:
Volumen (µl)
Formamida 9,6
estándar de tamaño 0,4
Tabla 9: Preparación mezcla de reacción.
Nota: Tener en consideración que al número de muestras (correspondientes a las

muestras más el control positivo y control negativo, provenientes de la etapa de
amplificación) debe sumar el ladder alélico del kit respectivo.
d. Protocolo general:
1. Anotar en hoja de registro (según analizador genético a utilizar; ver ANEXO 1 parte IV b),
el número de las muestras a analizar y ubicación determinada.
2. En la placa de 96 pocillos se agrega a cada pocillo 10 µl del mix de reacción (según
el número de muestras a analizar).
3. Agregar al menos 1,5 µl de muestra de ADN amplificado, según ubicación en hoja de
registro, verificando que la muestra esté en el fondo del pocillo y que no queden
burbujas.
4. Denaturar las muestras en termociclador a 95 ºC por 3 minutos y 4ºC por 3 minutos
(programa Denatur~).
Nota: Opcionalmente una vez terminado los 3 min a 95°C, se saca la placa y se
coloca en un bloque frio durante 3 min
Una vez terminada la denaturación, continuar con procedimiento detallado a

continuación.
42
Aspectos técnicos:
a. Equipos utilizados:
Analizadores Genéticos basados en electroforesis capilar con detección de

fluorescencia.
b. Softwares:
Foundation Data Collection version 2.0 (ABI 3100) y 3.0 (ABI 3130).
GeneMapper® ID version 3.2.
III. Como operar el analizador genético:
1. Verificar que el PC y el equipo se encuentren encendidos, en caso contrario:

 Prender primero el PC e iniciar Windows.
 Prender el equipo y esperar la luz verde (tarda como 2 minutos), durante
este proceso la luz es color naranja intermitente.
2. Colocar placa en el autosampler del analizador genético, para ello verificar que el
equipo esté con la luz verde, apretar botón tray, una vez el autosampler esté en
frente abrir la puerta y acoplar la placa.
3. Puesta la placa en el autosampler, cerrar la puerta y esperar a que se prenda la luz

verde (durante el desplazamiento del autosampler la luz es naranjo intermitente).
4. Se abre el software “DATA COLLECTION” y se siguen los pasos siguientes (para

Analizadores genéticos ABI PRISM® 3100-AvantTM y ABI 3130):
4.1.- Desplegar viñeta “GA Instrument” (clic en + ).
4.2.- Desplegar viñeta “ga3100-Avant” (clic en + ).
4.3.- Desplegar viñeta “3100avant” (clic en + ).
Para encender el horno:

→Abrir Manual Control (doble clic en el icono).
43
↳En ventana Send defined Command escoger Oven.
↳”En ventana Set Status escoger ON y clic botón SEND.
Para ajustar la temperatura del horno:

→Abrir Manual Control (doble clic en el icono).
↳En ventana Send defined Command escoger Oven.
↳”En ventana Set Temperature en casillero conjunto escribir 60 y clic botón
SEND.
4.4.- En viñeta “ga3100-Avant”, abrir Plate Manager (clic en el icono), aparecerá a la

derecha una ventana, proceder según lo siguiente:
Para crear una planilla para corrida:

→Clic botón New
↳Se desplegará una ventana, donde debe completar la información solicitada

según lo siguiente:
 En Name: Digitar el nombre de la placa, (correspondiente al número de
la placa más la posición de las muestras inicial y final en la placa).
 En Description: Dejar en blanco.
 En Application: Seleccionar la aplicación “GeneMapper-labocar-
C202001”.
 En Owner Name: Digital “LABOCAR”.
 En Operator Name: Digitar el código del operador.
 Clic en botón OK.
↳Se desplegará una ventana, que corresponde a la hoja de datos, donde se debe
completar la información solicitada según lo siguiente:
 En la columna Sample Name: Digitar los nombres de las

muestras de acuerdo con la posición en la placa, definida en hoja de
registro, al momento de cargar las muestras. El nombre de las muestras
ingresado corresponde al Specimen ID, que es número compuesto de
13 dígitos, según lo siguiente:
 Posición (1) a (8) corresponde número del specimen,
identificado internamente como número de ADN (según libro de
44
“Ingreso y Control de muestras de ADN” completando con ceros a la

izquierda hasta tener los ocho dígitos, número irrepetible por año).
 Posición (9) y (10) corresponde a los dos últimos dígitos del año
en que se determinó la huella genética.
 Posición (11) a (13) corresponde al código asignado por el
Servicio Médico Legal al Laboratorio de Genética Forense
perteneciente a LABOCAR “L02”.
Ejemplo: Si la muestra está ingresada con el número de ADN 256 y fue

analizadas el año 2014, le corresponde el Specimen ID:
00000256 14 L02
Número ADN Año Laboratorio
 En la columna Comment: Dejar en blanco.

 En la columna Priority: Completar si desea efectuar la anticipada
de algunas muestras (a mayor prioridad, menor valor).
 En la columna Sample Type seleccionar “Sample”, “alellic”,
“Positive Control” ó “Negative Control”, de acuerdo al tipo de la muestra.
 En la columna Size Standard seleccionar “Adv_Liz_500” y
pinchar toda la columna con “Edit” “Fill Down” (ctrl.-D)
 En la Columna Panel seleccionar “el kit de amplificación
utilizado” y pinchar las filas con “Edit” “Fill Down” (ctrl.-D), según
corresponda.
 En la columna Analysis Method Se selecciona el método de
análisis, dependiendo del kit utilizado y las indicaciones del fabricante:
Pinchar las filas con “Edit” “Fill Down” (ctrl.-D), según corresponda.
 En la columna Snp set: Dejar en blanco.
 En la columna User_Defined 1: Dejar en blanco.
 En la columna User_Defined 2: Dejar en blanco.
 En la columna Results Group seleccionar “LABOCAR AÑO
CORRESPONDIENTE”.
 En la Columna Instrument Protocol” seleccionar el señalado por
el fabricante del kit de amplificación utilizado.
 Clic en botón OK.
45
4.5.- Volver a desplegar viñeta “ga3100-Avant” (clic en + ) .
Para comenzar una corrida:
→ Abrir ventana Run Scheduler.
↳ Aparecen dos opciones: Plate view y Run view.
↳ Abrir Plate view.
↳ En ventana derecha se desplegará la opción de búsqueda de la hoja de

datos de la corrida (creada anteriormente), ahí se asocia la hoja de registros con los
detalles de la corrida con la placa creada, para ello:
 Hacer clic primero en el nombre de la hoja de datos “Plate Name” y
después la placa (cuadro de color amarillo a la derecha). Al hacerlo el
cuadro cambia a color verde.
 Si la hoja de registro creada no aparece, hacer clic en “Find All” y
buscarla.
↳ Abrir Run view.
 Hacer clic en cada corrida y verificar si la posición de las muestras

está correcta, anotar en hoja de registro ( Ver ANEXO A. IV d) el número de
la carpeta donde se guardarán los datos, (correspondiente a los tres
últimos números del nombre de la carpeta
“RUNS_”SEC”_”FECHA”_”NRO”.
Finalmente hacer clic en la flecha verde (superior izquierda) para dar inicio a la
electroforesis.
4.6.- Notas:
 Monitorear los valores instrumentales de la corrida a través de la ventana

Instrument Status.
 Monitorear el progreso de la corrida en Capillaries Viewer.
 Durante la pre-corrida verificar si la corriente está entre 24 – 36 µA

(máximo de 40 µA).
46
 Si la corriente está bajo 24 µA, entonces debe haber presencia de

burbujas en el sistema, las cuales van a interferir durante la corrida y además
pueden tapar los bloques de acrílicos.
IV. Como analizar los resultados entregados por analizador genético,

con el Software Genemapper v 3.2:
El análisis de los datos colectados por el software “DATA COLLECTION”, los realiza
el Software GENEMAPPER® ID Version 3.2, el que básicamente construye una curva de
calibración a partir de los pesos y las migraciones relativas del estándar de tamaño
interno. Una vez construida esta curva, se interpola el valor del fragmento de la muestra
problema obteniéndose un peso molecular estimado, el cual se compara con los
fragmentos del estándar alélico. A partir de esta comparación, se obtiene un número de
alelo para cada uno de los marcadores analizados.
a. Procedimiento análisis de datos:
1. Abrir el Software GENEMAPPER® ID v 3.2 e ingresar usando la cuenta de usuario

y clave personal, debido a que el nombre de usuario queda registrado en el archivo xml
que será exportado al software CODIS.
Nombre Profesional Cuenta Usuario

Marcelo Alonso Concha mhac
Reginaldo Cádiz Riquelme rccr
Sonia Henríquez Garrido smhg
Paulina Rivera Lizana parl
Rosa Silva Novoa rhsn
Tabla 10: Relación de profesionales y cuenta de usuario.
2. – Seleccionar viñeta File:

↳ Hacer clic en opción Add Sample to Project, importar los datos desde la carpeta
donde el programa los guarda (My Computer/Local Disk (E:)/ AppliedBiosystems/UDC/
Data Collection/ Data/ ga 3100-Avant ó ga 3130 según corresponda), para ello añadir el
nombre de la carpeta donde se guardaron las muestras corridas presionando Add to list.
Cada carpeta incluye los datos de los cuatro capilares, verificar que cada carpeta incluya
47
un ladder (en caso de no hacerlo, pegar un ladder desde otra carpeta, de la misma
corrida).
↳ Luego haga clic en el botón Add & Analyze, se abrirá una ventana que
permite guardar el proyecto, para ello solicita el nombre del proyecto “Project name”
hacerlo con el número de Informe Pericial seguido del año (Ej IP 230-2010); por lo tanto,
cada proyecto incluye solo las muestras relacionadas a un mismo Informe Pericial.
3. La ventana desplegada, se compone de dos área de trabajo, a la izquierda el

proyecto con sus carpetas y a la derecha los datos de las muestras corridas,
correspondientes a los datos de cada carpeta.
4. Determinar el Start point, para ello abrir viñeta View  opción Raw data
posicionándose sobre cada muestra, puede visualizar el gráfico con los datos crudos de la
corrida, utilizando el cursor determine el inicio de los picos originados por los partidores y
el pico correspondiente a 75 pb originado por el estándar de tamaño.
5. Verifique que el Start point para el análisis de los datos es el correcto, para ello abrir
viñeta Analysis.
↳ Hacer clic en opción Analysis Method Editor, se despliega una ventana con
diversas pestañas, escoger pestaña Peak Detector.

↳ Comprobar el valor del Start point en el casillero Stars pt, en caso de ser
distinto del que usted comprobó al revisar los datos crudos, modifique el valor, presione
OK. Al hacer esto el programa solicitará analizar nuevamente los datos.
6. Una vez analizado verifique que las posiciones del estándar de tamaño en todas las
muestras sea la adecuada, para ello chequear que aparezcan con color verde. Si
aparecen muestras señalizadas con color amarillo o rojo, revisar el estándar de tamaño
presionando el icono del grafico en rojo.
7. Si el estándar de tamaño está bien asignado seleccionar Overrride SQ para

aceptarlo con calidad baja, considerando que esta muestra debe ser analizada
nuevamente seccionar Apply y luego OK.
↳ Se puede corregir el valor de un pico del LIZ ® 500, para ello seleccionarlo con el
botón izquierdo del mouse y con el botón derecho escoger las opciones Add, Delete ó
Change, si los valores son editados seccionar Apply y luego OK.
48
8. Verificar valores de umbral /treshold: El software asigna un color según la calidad

del análisis, el color verde aprueba, el color rojo rechaza y el amarillo indica que se debe
revisar. Revisar el treshold y asignación de los fragmentos correspondientes al LIZ ®-500
en todos aquellas muestras que presenten calidad amarilla o roja. En la ventana analysis /
analysis method editor, verifique los umbrales apropiados para los peack en RFU
(Unidades relativas de Fluorescencia).
9. Las muestras en calidad verde pueden ser vistas en la ventana de gráficos y

verificar en cada loci la presencia de 1 o 2 picks. Para excluir o modificar picks seleccionar
con el botón izquierdo del mause y luego con el botón derecho seleccionar la opcion
“delete” o “add allele call”.
V. ¿Qué es CODIS? y como exportar los datos:
La base de datos CODIS (Combined DNA Index System) utiliza un grupo de trece
Loci para tipificación genética humana (D8S1179, D21S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358,
TH01, D13S317, D16S539, vWA, TPOX, D18S51, amelogenina, D5S818 y FGA), cuyos
análisis, se encuentran enmarcados y regulados en la Ley 19.970 y su Reglamento de
Aplicación, que crea el Registro Nacional de ADN.
Procedimiento de como exportar datos para incorporarlos a CODIS:
1. Revise y seleccione los datos que se exportaran, recuerde que el programa

Genemapper® ID no exporta datos con alelos “OL”.
2. No se exportan los controles (positivo - negativo) ni ladder elélico.
3. Asigne el Specimen category (forensic mixtura, fornesic uknown, victim known Indicted
person Convicted Ofender etc.).
4. En File, seleccione “Expor table for CODIS”, se abrirá un menú y en el elija exportar en
formato CMF-3 (xml), en source laboratory y en destination laboratory debe
seleccionar clugf1012.
5. Una vez que se ha guardado este documento tipo XML, abrir con programa Microsoft®
WordPad, e ingresar en la novena línea <specimen> el valor del case ID,
correspondiente al specimen case ID, compuesto por dieciséis dígitos según lo
siguiente:
 Posición (1) a (11) corresponde a los once dígitos del número de
R.U.C. (incluyendo dígito verificador).
49
 Posición (12) a (16) corresponde al número de R.I.T, se completa con

ceros a la izquierda hasta completar los cinco dígitos, debe completarse con
ceros en caso de no existir.
Ejemplo: Si la muestra corresponde al R.U.C. 1400235147-5 y se

desconoce el R.I.T., le corresponde el Specimen case ID:
14002351475 00000
RUC RIT
50
TÍTULO III: ANÁLISIS DE RESULTADOS
51
A.- I N T E R P R E TAC I Ó N D E R E S U L TAD O S
A. Análisis de Electroferogramas.
Cada uno de los electroferogramas es revisado en base a una serie de criterios

establecidos para el laboratorio, los cuales son señalados a continuación:
I. Carácter informativo de los alelos presentes en los electroferogramas

obtenidos.
- Cuando se dispone de lecturas de electroferogramas, el carácter informativo de un

alelo estará dado por las unidades relativas de fluorescencia (RFU) que presente el
pico (peak) de cada alelo. Así, se considerará como informativo, todo pico superior
o igual a 80 RFU, considerado los resultados de la validación interna respectiva, por
lo cual, cualquier pico inferior a dicho valor no será informado, aceptándose o
rechazándose valores +/- 10 RFU conforme a la evaluación de los resultados del
proyecto de análisis por parte de los profesionales y el Director Técnico. Al obtener
resultados no informativo se coloca en la tabla “N.I.” (no informativo, peak bajo 80
RFU) .
- Cuando se dispone de electroferogramas con perfiles parciales o de mezclas que
no presentan útliadad para comparación, este resulado se informara en el ítem
resultados obtenidos pero no se incluirá en la tabla de resultados
II. Valoración de locus como homocigoto o heterocigoto.
Esta caracterización estará dada por la relación que se establece entre el número de
picos así como la intensidad de éstos, en las diferentes posiciones amplificadas (locus).
En base a la relación de número e intensidad de los loci del perfil genético podemos
señalar que:
Se clasificará como Locus heterocigoto, informándolas como tal, cada locus en

donde se observen dos (02) picos, cada uno de los cuales debe cumplir con el carácter
“informativo” señalado anteriormente.
52
Se clasificará como Homocigoto todo aquel locus en donde se observe un (01) pico
con un valor de RFU de al menos el doble más que aquellos loci donde se observe dos
(02) picos. En base a lo antes expuesto, toda posición en donde se encuentre un solo
pico, pero que no cumpla la relación dada anteriormente, será considerada como locus
parcial, informando el tamaño del alelo obtenido pero sin ser categorizado como
heterocigoto u homocigoto.
III. Problemas en los proceso de lecturas de electroferograma.
Es de consideración en la lectura de cada electroferograma la presencia de

artefactos, producto de los procesos de amplificación de los fragmentos STR, exceso de
ADN agregado a la electroforesis capilar, o interferentes de la técnica de PCR. Así se
puede identificar:
1.- Stutter: Corresponden a pequeños picos presentes en un locus, ubicados a la

izquierda de el o los alelos de mayor tamaño presentes en un locus dado. Éstos
corresponden a productos amplificados de una unidad de tamaño menor (n-4), que
son producidos durante el proceso de amplificación de los fragmentos y asociados
principalmente a un efecto de deslizamiento (Slippage) de la DNA polimerasa
durante el proceso de amplificación.
2.- Pull up: Corresponde a la aparición de picos, en un locus dado, producto de un

exceso de fluorescencia generado en otro canal de longitud de onda cercana,
ejemplo son los canales verde y azul, en donde es posible detectar la presencia de
picos en los canales verdes producto de un exceso de fragmentos detectados por el
canal azul. Dicho fenómeno puede llevar a la determinación de falsas mezclas, por
lo cual debe ser considerado a la hora de determinar si la presencia de más de dos
alelos en un mismo locus es producto de una mezcla o un “Pull UP”.
3.- Spike: Corresponde a picos de alta intensidad (8000 ≥ RFU) producto de fallas
en el proceso de electroforesis capilar, lo cual puede estar asociado a la presencia
de burbujas, cristales de urea o variaciones de voltaje. Éstos se caracterizan por ser
picos irreproducibles en futuras electroforesis y por presentarse en todos los
canales de detección, en una misma posición.
4.- Variantes alélicas: Corresponden a fragmentos amplificados, correctamente

detectados y asignados (comprobados por repetición de corrida de la muestra),
pero que no presentan ningún tamaño de STR registrado para el locus en el que se
53
presenta, estos picos son categorizados como “OL” (Off of Ladder) en el

electroferograma, Con el objetivo de que el sistema CODIS acepte sin conflictos el
ingreso del perfil a la respectiva base de datos, los “OL” deben ser cambiados
asignándoles el valor del alelo de tamaño registrado al lado izquierdo del OL
detectado, acompañado del tercio de la distancia total del alelo siguiente, quedando
con algunas de las siguientes nomenclatura: Alelo,1; Alelo,2; Alelo,3.
5.- Amplificación Parcial: Corresponden a amplificaciones parciales para un locus

dado, que puede llevar a la determinación de falsos homocigotos. Lo cual es
atribuible a ADN fragmentado, por lo tanto con daños en los posibles sitios de unión
de los partidores o del “STR” (Short tandem repeat). Éstos pueden ser evidenciados
por el tamaño del pico que define los alelos, ya que éstos se presentan en un
tamaño menor, equivalente en promedio a un 60 % o menos de la altura de un pico
promedio para las otras posiciones. En el caso en el que no sea factible determinar
con certeza si la posición corresponde a una posición homocigoto verdadera o por
amplificación parcial, se informara como “posible amplificación parcial”.
6.- Desbalance Alélico: Se presenta cuando los loci heterocigotos presentan picos
de diferentes alturas que difieren en al menos un 60%, esto es atribuido a
fenómenos tales como, ADN degradado, o la presencia de interferentes del
proceso de PCR.
7.- Bandas A: Corresponden a productos de amplificación de STR, una base más

larga de lo normal, debido a una adenilación de la Taq DNA Polimerasa, lo cual
genera un producto más largo de lo normal. Considerando esto, el programa de
PCR incluye una extensión final permitiendo la adición de una adenina a todos los
productos por igual, por lo que si se trabaja con las concentraciones de ADN
adecuadas esto no generaría problemas de lectura, pero en el caso de existir una
alta concentración de templado, se detectará una mezcla de productos con Adenina
final y sin Adenina final, lo cual conlleva a la formación de picos u hombros extras,
lo cual puede dificultar la lectura del electroferograma. En dicho caso es necesario
repetir desde el proceso de PCR, bajando la concentración de templado.
8.- Ausencia de peak: Corresponden la ausencia total de señal en uno o varios

marcadores. En estos casos se informa en la tabla de resultados “N.A:” (no
amplifica).
54
9.- Peak bajo el límite de corte: Corresponde a peak que por sus características
pueden correponder a señales de alelos, sin embargo se encuentran bajo el límite
de corte 80 RFU (+/- 10), se indicaran como No Informativo
55
IV. Determinación de perfil completo o parcial
Una vez establecido el perfil genético el electroferograma es impreso y

posteriormente revisado. En este punto se establece si un perfil genético es completo o
parcial:
- Perfil Completo: Corresponde a aquel perfil en donde es posible obtener todos los alelos
correspondientes (homocigoto o heterocigoto) para cada uno de los marcadores
establecidos para ese kit.
- Perfil Parcial: Corresponde a aquel perfil en donde no es posible obtener todos los alelos
correspondientes (homocigoto o heterocigoto) para cada uno de los marcadores
establecidos para ese kit. En caso de ausencia de peak en uno o varios marcadores se
coloca en la tabla de resultados “N.A.” (no amplifica), en caso de amplificación parcial en
uno o varios marcadores se coloca un guión “-“ (amplificación parcial o posible
homocigosis). N.I.
Observaciones:
Para Kit para genes autosómicos:
Un perfil que presente amplificación de 9 o más marcadores genéticos incluidos en

la base de datos CODIS (excluido amelogenina), puede ser utilizado para la determinación
de coincidencia, siendo tan útil como un perfil completo para este kit dado, en este
laboratorio.
Por contraparte, es necesario señalar que todo perfil parcial que presente
amplificación de menos de 9 marcadores, no es utilizado para determinación de
coincidencia, se informa que se obtuvo una amplificación parcial insuficiente para
comparación cotejo y que solo puede entregar información para excluir a un individuo si
corresponde (diferencia en uno o más marcadores).
Para Kit de cromosoma Y:
En caso de paternidades, la obtención de un perfil completo permite confirmar

(coincidencia en todos los loci) o descartar (diferencias en uno o más marcadores) la
56
presunta paternidad. Además, permite excluir o incluir a un individuo de una mezcla

compleja generalmente procedente de delitos sexuales, donde hay un contribuyente
masculino en la mezcla.
En el caso de obtener un perfil parcial, éste nos permite solamente establecer la

exclusión de un individuo como contribuyente a la muestra, de lo contrario se informa que
el perfil parcial obtenido es insuficiente para la realización de cotejo o para obtener un
resultado concluyente.
El perfil completo permite excluir o incluir un individuo de una mezcla compleja al

existir un contribuyente masculino en éste.
En el caso de un perfil parcial solo es posible excluir a un individuo masculino como

contribuyente de la mezcla.
Para Kit Optimizado:
En el caso de que el análisis con el kit idenfiler sea poco informativo, es posible
utilizar el kilt Minifiler como complemento, obteniendo así un perfil más informativo.
V. Determinación de Probabilidad de coincidencia (Random Match

Probability) o exclusión
Una vez obtenidos los resultados de las muestras analizadas, se procede a

determinar si corresponden a perfiles genéticos útiles o no para comparación. En caso de
ser útiles para comparación se determina la coincidencia entre todos los perfiles obtenidos
(relacionados con una misma causa) contra muestras testigo proporcionadas
(provenientes de individuos conocidos), en base a esto, podemos señalar Coincidencia o
No coincidencia.
a. No coincidencia: Cuando el perfil genético obtenido desde la evidencia, no coincide

en sus alelos amplificados a los perfiles presentados por la muestra testigo (muestra
proveniente de un individuo conocido), o en el caso de paternidad, cuando las muestras
testigo del padre y del hijo no comparten la respetiva proporción de alelos. Las muestras
son informadas como no coincidentes y, por lo tanto, no se realiza análisis estadístico.
57
b. Coincidencia: Cuando el perfil genético obtenido desde la evidencia es coincidente

en sus alelos amplificados con una muestra testigo. En este caso es necesario determinar
qué tan probable es que dicho perfil se presente en una población dada, recalcando la
probabilidad de que el perfil obtenido sea presentado por dos individuos distintos. Dicho
proceso se realiza mediante la determinación de “Random Match Probability”, el cual
corresponde al cálculo de las frecuencias alélicas de todos los loci analizados, mediante
una tabla de frecuencias especialmente creada para tal efecto y la cual presenta las
frecuencia alélicas de la población chilena publicada por el SML en el año 2012 (en página
web www.sml.cl) para los marcadores del Kit para genes autosómicos, determinando así el
“Likehood Ratio” (LR) respectivo y qué tan probable es que el perfil obtenido sea
presentado por otro individuo en un universo dado. Lo anterior permite entablar
correspondencia entre el o los perfil(es) genético(s) de la(s) evidencia(s) y el o los
perfil(es) genético(s) de las respectivas muestras testigo.
En el caso de paternidades, si la muestra del hijo presenta alelos presentes en el

perfil genético del presunto padre, se debe realizar una valoración estadística con el
objetivo de determinar el índice de Paternidad para dicho caso (PI). Esto es determinado
mediante el análisis por el Software “Patcan V1.1.” (Ver Anexo B).
c. Muestras no útiles para comparación: Corresponden a los resultados obtenidos

donde la información obtenida no es suficiente para determinar coincidencia o no
coincidencia al comparar con otros perfiles. Se considera no informativo todo resultado
que involucre menos de 9 marcadores amplificados.
VI. Identificación de mezcla de perfiles:
Existen muestras en las que se presenta más de una combinatoria homocigoto o

heterocigoto en al menos dos loci, lo cual es indicativo de la presencia de más de un
contribuyente en la muestra analizada. La evaluación de alelos altamente polimórficos
tales como el FGA (80 alelos observados), D18S51 (51 alelos observados), o D21S11 (89
alelos observados), nos permitirán tener una visión del número de contribuyentes con un
menor sesgo de sobrelapamiento, con esto en mente es necesario considerar la guía de
pasos señalada a continuación, después de lo cual la mezcla es informada.
58
Identificar la presencia de Mezclas
Designar alelos a los picos presentes en cada locus
Identificar el número de potenciales contribuyentes
Estimar el grado de contribución relativa que cada individuo aporta

a la mezcla
Considerar las posibles combinatorias genotípicas
Comparar con muestra testigo
En el caso de obtener una mezcla de dos contribuyentes, en la cual las

intensidades de RFU permiten diferenciar claramente cuál es el contribuyente mayoritario
del minoritario, es posible tomar dicho perfil como único, aislando el contribuyente mayor y
menor en la mezcla, realizando la comparación directa con la muestra testigo
Observaciones:
Para Kit para genes autosómicos:
Una mezcla de perfil que presente amplificación de 9 o más marcadores genéticos

incluidos en la base de datos CODIS (excluido amelogenina), puede ser utilizado para la
determinación de coincidencia.
Por contraparte, es necesario señalar que toda mezcla de perfil parcial que
presente amplificación de menos de 9 marcadores, o mas de cuatro contribuyentes no es
utilizado para determinación de coincidencia, se informa que se obtuvo una amplificación
parcial insuficiente para comparación cotejo y que solo puede entregar información para
excluir a un individuo si corresponde (diferencia en uno o más marcadores).
Para Kit de cromosoma Y:
59
En caso de paternidades, la obtención de un perfil completo permite confirmar

(coincidencia en todos los loci) o descartar (diferencias en uno o más marcadores) la
presunta paternidad. Además, permite excluir o incluir a un individuo de una mezcla
compleja generalmente procedente de delitos sexuales, donde hay un contribuyente
masculino en la mezcla.
En el caso de obtener un perfil parcial, éste nos permite solamente establecer la

exclusión de un individuo como contribuyente a la muestra, de lo contrario se informa que
el perfil parcial obtenido es insuficiente para la realización de cotejo o para obtener un
resultado concluyente.
El perfil completo permite excluir o incluir un individuo (haplotipode una mezcla

compleja al existir un contribuyente masculino en éste.
En el caso de un perfil parcial solo es posible excluir a un individuo masculino como

contribuyente de la mezcla.
Para Kit Optimizado:
En el caso de que el análisis con el kit idenfiler sea poco informativo, es posible
utilizar el kilt Minifiler como complemento, obteniendo así un perfil más informativo.
60
B.- C O N F E C C I Ó N D E I N F O R M E S
B.1.- Confección de Informes y Revisión.
Una vez obtenido y verificados los perfiles genéticos, se procede a realizar la

confección del Informe Pericial de Genética Forense (apropiadamente numerado xxxx-
año), el cual consta de los siguientes rubros:
I.- ANTECEDENTES.-
Se incorpora la información del requerimiento, correspondiente al oficio instructor (Sección
Regional, Comisaría y/o Fiscalía) u orden de trabajo interna del Departamento, el Folio del
Formulario Único de Solicitud Pericial de ADN (si corresponde) y el Rol de la causa.
II.- OBJETO DE LA PERICIA.-

Se explicita lo solicitado por el órgano requirente, consignando si se desea o no
comparación de perfiles genéticos, en caso de requerirlo, se individualizan lo sujetos con
los cuales se desea comparar.
III.- ELEMENTOS OFRECIDOS.-

Se detallan las evidencias y muestras remitidas para análisis, consignando si es que
tienen su rótulo y N.U.E.
IV.- OPERACIONES REALIZADAS.-

Se detallan las diligencias, análisis y operaciones realizadas para dar cumplimiento al
requerimiento que dio origen al Informe Pericial. En general pueden contener los
siguientes subtítulos:
1.- Descripción de la evidencia presentada (optativo, solo se incorpora en ausencia de

un informe pericial previo)
2.- Set fotográfico y/o determinaciones previas, (optativo, se incorpora en presencia

de informe pericial previo)
3.- Toma de Muestras (optativo, depende del objeto de la pericia; se señala el día y
hora en que fue realizada, quien tomó la muestra o si no fue realizada y las razones)
61
4.- Determinación de perfil genético:
4.1.- Selección de muestras para análisis. ( En base a TÍTULO II; PROCEDIMIENTOS

PRE-ANALÍTICOS Y FLUJO DE TRABAJO: Sobre muestras y Evidencias: Levantamiento de las
muestras biológicas; Pág. 13).
4.2.- Identificación de muestras. (En base a TÍTULO II; PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS;

Procedimientos para Extracción y Purificación de ADN a partir de material biológico, Pág. 21 ).
4.3.- Método de extracción. ( En base a TÍTULO II; PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS;

Procedimientos para Extracción y Purificación de ADN a partir de material biológico, Pág. 21 ).
4.4.- Método de cuantificación. (En base a TÍTULO II; PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS;

Procedimientos para Cuantificación de ADN, Pág. 34).
4.5.- Amplificación de los marcadores. ( En base a TÍTULO II; PROCEDIMIENTOS

ANALITICOS; Procedimientos para Amplificación de ADN, Pág. 39 ).
4.6.-Separación de productos amplificados: ( En base a TÍTULO II; PROCEDIMIENTOS

ANALITICOS; Procedimientos para Detección del producto amplificado de ADN, Pág. 43 ).
4.7.- Tabla de resultados. ( En base a TÍTULO III; ANÁLISIS DE RESULTADOS,

Interpretación de resultados, Pág. 53). Puede incluir tablas de resultados de otros
informes periciales si en el objeto de la pericia se solicita comparar con informes
periciales previos de este Departamento o de otras instituciones
4.8.- Análisis de Resultados (optativo, sólo se incorpora en aquellos informes en
los cuales se solicita determinación de parentesco, sea paternidad o filiación, se
consigna el análisis estadístico mediante el programa PATCAN).
4.9.- Interpretación revision de Resultados. La revisión del Informe Pericial la
realizara el Director Técnico del Laboratorio y además se señala el nombre del
revisor primario del informe pericial, que corresponde a un 2° profesional del
área, esta es una revisión técnica detallada chequeándose los datos del
requerimiento y los resultados mediante la inspección de los electroferogramas).
V.- CONCLUSIONES.-
Se informan las diligencias efectuadas (si fue o no efectuada la toma de muestras
solicitada) y las conclusiones a las cuales permiten arribar los resultados obtenidos.
VI.- EVIDENCIAS.-
Se remiten o devuelven los remanentes de las evidencias y/o muestras analizadas.
También se señala si la muestra fue consumida en los análisis y si queda remanente de
extracto de ADN.
62
Junto al informe pericial, se confecciona una hoja de cobros interna, en la cual se

detallan los análisis realizados, con la finalidad de colectar la información necesaria para
generar los cobros de los análisis a las respectivas fiscalías.
Posteriormente, el Informe Pericial pasa a una segunda revisión técnica a cargo del
Director Técnico del Laboratorio, realizando un tercer chequeo de los electroferogramas.
Una vez realizadas las correcciones y observaciones hecha por los revisores, el
informe pericial es impreso al menos en duplicado (dependiendo de quién es el
requirente). Es entregado al personal administrativo que basándose en la hoja de cobros
interna confecciona la hoja de cobros enviada a las respectivas Fiscalías.
Este informe es entregado al Jefe operativo del Laboratorio, quien efectúa una
revisión administrativa, en caso de encontrar disconformidades de forma, es nuevamente
pasado al perito para efectúe las correcciones.
El informe pericial definitivo junto con la hoja de cobros son entregados al Jefe del
Laboratorio quien lo firma y remite a la Oficina de Órdenes Judiciales para la tramitación
final (consiste en firma del oficio remisor por parte del Jefe del Departamento de
Criminalística) y posterior despacho al ente requirente.
63
65
CUADRO DE FIRMAS Y APROBACIÓN
a. Elaborado por:
Reginaldo Cádiz Marcelo Alonso Sonia Henríquez

Nombre
Riquelme Concha Garrido
Asesor en Asesor en
Director
Cargo Genética Genética
Técnico
Forense Forense
Firma
b. Revisado por:
Nombre Luís Hernán Bustamante Soto
Cargo Jefe Laboratorio de Genética Forense
Firma
c. Aprobado por:
Nombre Ignacio Villarrubia Goycoolea
Cargo Jefe Departamento de Criminalística
Firma
66
ANEXOS
Anexos
A . - D O C U M E N T O S C O M P L E M E N TAR I O S
I. Acta de Autorización Voluntaria para toma de muestra Biológica.
67
II. Formulario de Cadena de Custodia.
68
III. Formulario Único de Solicitud Pericial de ADN.
69
IV. Hojas de Registros internos del Laboratorio:

a.- Hoja de Registro Cuantificación mediante PCR en tiempo real.
b.- Hoja de Registro Análisis ADN amplificado.
70
V. Libros de Registros internos del Laboratorio:

a.- Libro de ingreso de muestras para obtención de perfil genético
71
b.- Libro de registro de muestras
72
c.- Registro de preparación de agua y reactivos
d.- Registro de volúmenes y componentes de la mezcla para real time
73
e.- Registro de volúmenes y componentes de la mezcla para PCR
f.- Registro de volúmenes y componentes para la carga de los productos amplificados
74
B.- COMO UTILIZAR PROGRAMA PATC A N
V.1 . 1 .
En los cálculos que se solicita evaluar paternidad o relaciones consanguíneas, se

utiliza el programa descrito por “Riancho JA and Zarrabeitia MT. PATCAN: A Windows-
based software for paternity and sibling analyses. Forensic Sci Int 17.julio.2003”.
a. Descripción del Programa:
En la carpeta PATCAN figuran cuatro áreas de trabajo para distintas situaciones y

son las siguientes:
Trio: Para análisis de paternidades con los datos de la madre, el hijo(a) y el
supuesto padre.
Sibling: Para análisis de la relación de parentesco entre dos perfiles diferentes,
supuestos hermanos y otras relaciones familiares.
Motherless: Para relación de paternidad con los perfiles del hijo(a) y del supuesto
padre. También puede usarse para calcular la probabilidad de maternidad en ausencia del
padre.
Grandfather: Para los casos en que falta el perfil de la madre o el padre, pero
están los datos de los abuelos.
En cada una de estas áreas de trabajo existen tres plantillas de Microsoft Office
Excel:
 Base: Corresponde a la plantilla que permite ingresar datos en los distintos loci y el
nombre de la muestra.
 Populación: Contiene las frecuencias de los loci las cuales pueden ser modificadas
o ingresar nuevos datos.
 Una tercera planilla es específica para cada caso Trio,Sibling, Motherless,
Grandfather.
75
b. Procedimiento:
En cada caso Trio,Sibling, Motherless, Grandfather, se procede en forma similar:
1.- Abrir el documento denominado área de trabajo, entonces se abrirán

simultáneamente tres archivos Excel: “Base”, “trio” y “population”.
2.- En el archivo “base” se escribe el nombre de la muestra en la linea simple.
3.- Digitar los loci correspondientes a las muestras.
4.- Una vez ingresados los perfiles se pueden ver en la hoja correspondiente al análisis
que se realiza. Trio,Sibling, Motherless, Grandfather.
5.- En la hoja data, verificar el la línea Study que corresponda a la muestra que se
ingresó.
6.- En esta hoja verifique el coeficiente coancestral que se aplicará.
7.- En la opción Summary de esta misma hoja aparecen los resultados (Indice de
paternidad, probabilidad de paternidad, etc., según corresponda).
Para mayores detalles del uso del programa, éste cuanta con un documento de texto con
las instrucciones.
76
C.- FLUJOGRAMA DE TRABAJO DEL

L A B O R ATO R I O D E L G E N É T I C A F O R E N S E
77

Manual Genetica 2015 Protocolos

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1

LABORATORIO DE GENÉTICA FORENSE DEL

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A. Dependencias ubicadas independientes al Laboratorio de Genética

Corresponden a salas y áreas que a pesar de estar asentadas en instalaciones

Esta sala se encuentra totalmente separada del Laboratorio de Genética Forense y

II. Recepción de muestras y evidencias:

III. Obtención de muestra:

Corresponde a un área debidamente demarcada al interior del Laboratorio de

Posteriormente, el material biológico es levantado y guardado en tubos de

Cabe señalar que además de las áreas descritas, el Laboratorio de Genética

B. Salas ubicadas al interior del Laboratorio de Genética Forense:

El Laboratorio de Genética Forense cuenta básicamente con dos grandes áreas de

B.1. Área Sucia:

I. Sala de preparación de reactivos:

II. Sala de lavado y esterilización:

III. Oficina administrativa:

Lugar destinado a la confección de informes, archivo de documentación y labores de

IV. Sala de evidencia transitoria:

B.2. Área Limpia:

Es un área de acceso restringido, donde sólo pueden ingresar profesionales que

Esta sala se encuentra equipada con equipos de refrigeración, campana de

III. Preparación de la PCR:

IV. Trabajo post PCR (Análisis de fragmentos de ADN):

TÍTULO II: PROCEDIMIENTOS

Corresponden a todas las labores previas - administrativas y de laboratorio - a la

A.1.- Sobre muestras y evidencias.

A.1.1.- Recepción de documentación:

El documento requirente - emanado por Fiscalías del Ministerio Público, Tribunales

La totalidad de la documentación requirente es ingresada en la Oficina de órdenes

A.1.2.- Recepción de las muestras y evidencias:

A.1.3.- Revisión de las muestras y evidencias:

Una vez en el Laboratorio, el profesional a cargo debe verificar lo siguiente:

a. Estado de conservación: Es necesario verificar si se encuentran conservadas

b. Formulario de cadena de custodia: verificar que se encuentre llenado correctamente

A.1.4.- Determinaciones previas:

Si las muestras remitidas no han sido sometidas a ningún tipo de determinación

a. Registro fotográfico: Todas las evidencias no analizadas con anterioridad o que no

b. Descripción: Se efectúa una descripción detallada de la evidencia, desde lo general

c. Determinaciones orientativas: En el caso que la evidencia presente manchas

d. Determinaciones de certeza: En el caso que la determinación orientativa confirme

A.1.5.- Levantamiento del material biológico:

Después de determinar que la evidencia presenta indicios biológicos de origen

La Selección del material biológico analizado frecuentemente, se detalla a

e. Otros soportes: En aquellos soportes en los cuales no se pueda recortar (cuchillos,

Una vez efectuada la selección de la muestra, es colocada al interior de un tubo de

A.1.6.- Traslado del material biológico:

Los tubos de microcentrífuga con el material biológico, son trasladados al Laboratorio

A.2.- Sobre toma de muestras testigo.

A.2.1.- Requerimiento para una toma de muestras testigo: