INTRODUCCIÓN

La cromatografía es una tecnología de medición utilizada para separar, identificar, cuantificar y

purificar compuestos. Se utiliza como pruebas ambientales, de alimentos, estudios forenses,
investigación de enfermedades, descubrimiento de medicamentos, seguridad nacional y la
industria petroquímica entre otros

OBJETIVOS

Empacar una columna cromatográfica

Separar la mezcla de 2 colorantes por los 3 métodos de cromatografía

OBSERVACIONES

HPLC significa Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento. Antes de que la HPLC estuviera
disponible, el análisis LC se llevó a cabo mediante flujo gravitatorio del eluyente (el disolvente
utilizado para el análisis LC) requirió así varias horas para que el análisis se completara. Incluso las
mejoras añadidas en el tiempo posterior fueron capaces de acortar ligeramente el tiempo de
análisis. Aquellos sistemas clásicos / LC iniciales se denominan “cromatografía de baja presión” o
“cromatografía en columna”

El adsorbente más utilizado para la cromatografía en columna es el gel de sílice, mientras que la
alúmina y el florisil (silicato de magnesio) se emplean como sustitutos cuando el gel de sílice es
incompatible con la mezcla que se va a cromatografiar

MATERIALES

 Probeta
 Luna de reloj
 Vasos de precipitado
 cromatofolios
Cromatofolios de TLC de silicagel
Esta gama de cromatofolios de TLC, que utilizan
silicagel de MERCK sin modificar con un exclusivo
material polimérico que produce una superficie
uniforme y dura, que no se agrieta ni forma
burbujas con facilidad. El recubrimiento de la
placa liso y sumamente denso garantiza la
obtención de bandas estrechas y máxima eficacia
de separación con el mínimo ruido de fondo.
· Grosor de capa de 200 um, tamaño de partícula
de 10-12 um
· Placas de aluminio flexible que se pueden cortar
con facilidad para adaptarse a las necesidades de
separación particulares
· Dos indicadores fluorescentes inorgánicos para detección por UV de sustancias incoloras
 · Las muestras que absorben a longitud de onda de 254 nm se detectan mediante
fluorescencia

Cromatofolios de TLC con zona de concentración

Estos cromatofolios se basan en las distintas propiedades de adsorción de dos
adsorbentes de sílice: un adsorbente concentrador inerte macroporoso en el que se
aplican las muestras y una capa de separación selectiva para la separación.
Independientemente de la forma, tamaño o posición de las manchas, la muestra siempre
se concentra en pocos segundos en forma de banda estrecha en la interfaz de los dos
adsorbentes, donde se inicia la separación.
· Aplicación rápida y sencilla de las muestras
· Incluye una etapa de purificación y concentración
· Mejor resolución gracias a la generación bandas estrechas

Cromatofolios de TLC de silicagel modificada químicamente

Las capas de silicagel modificada (grosor de capa de 200 um) son adecuadas para
separaciones que no se pueden resolver bien con silicagel sin modificar.
· Los resultados son menos dependientes de la humedad atmosférica
· Permiten el uso de disolventes acuosos
· La sílice modificada con hidrocarburos alifáticos proporciona una óptima correlación con
las columnas de HPLC
· Sin actividad catalítica para sustancias inestables (degradación oxidativa)
 Pipeta Pasteur con chupón: Sirve para hacer la
transferencia de pequeñas cantidades de líquidos.
Creada por el químico francés Louis Pasteur, fue
nombrada en su honor.
 Azul de metileno
El azul de metileno es un colorante de naturaleza
orgánica con múltiples funciones. También es
conocido con el nombre de cloruro de
metiltionina. Su fórmula molecular es
C16H18ClN3S. Fue sintetizado en el año 1876 para teñir prendas textiles, sin embargo, no
pasó mucho tiempo en que los científicos de la época descubrieran su gran utilidad en el
campo de la medicina, especialmente para teñir preparaciones microscópicas.

Este uso aún se conserva, pues actualmente es utilizado en técnicas de coloración simple
para el diagnóstico de ciertas patologías infecciosas, tales como, pitiriasis versicolor,
eritrasma o meningitis por Haemophilus influenzae.
 Naranja de metilo
El naranja de metilo o anaranjado de metilo es un compuesto azoderivado, utilizado como
colorante e indicador de pH. Su nombre científico es sal sódica del ácido
 Columna cromatografía
  Piceta
 Tubo grande cromatógrafo
 Corcho partido a la mitad

 Papel filtro
 Alúmina (oxido de aluminio)
La alúmina es el óxido de aluminio. Junto con la sílice, es el componente más
importante en la constitución de las arcillas y los esmaltes, confiriéndoles resistencia y
aumentando su temperatura de maduración

CALCULO DEL FACTOR DE RETARDO O RETENCION (RF)

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑖𝑔𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑅𝐹 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑢𝑙𝑙𝑒𝑛𝑡𝑒

EXPERIMENTO 2:

Distancia recorrida
Disolvente (etanol) 4cm
Azul de metileno 3.3cm
Naranja de metilo 3.7cm
RF (Azul de metileno-etanol) =0.83

RF (Naranja de metilo-etanol) =0.93

EXPERIMENTO 3:

No se llegó a ver la separación

CUESTIONARIO

1.-

FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL

CROMATOGRAFIA EN ALUMINA ETANOL
COLUMNA
CROMATOGRAFIA EN CAPA PLACA TLC GEL DE SILICE ETANOL MUESTRAS
FINA AZUL DE METILENO
CROMATOGRAFIA EN PAPEL FILTRO ETANOL NARANJA DE METILO
PAPEL

2.-

APLICACIONES
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA Separación de compuestos fármacos
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA Análisis de sangre.
CROMATOGRAFIA EN PAPEL Derramar vino sobre un mantel blanco

3.-
Cromatógrafo de Líquidos Altus® A-10

El Cromatógrafo de Líquidos Altus® A-10 puede manejar hasta

120 viales estándar en cinco carruseles de muestras separadas
completamente cubiertos con control de temperatura ; también
es excelente para muestras sensibles a la luz. proporciona una
gran ventaja al momento de programar una serie de métodos a
ejecutar. El horno de columna con sistema de recirculación de
aire forzado hace que la temperatura de la columna sea
excepcionalmente estable así como la opción de calentamiento
pasivo. Puede realizar una compensación automática de
disolventes que proporciona un preciso y exacto suministro de
disolventes, de forma que aseguramos la reproducibilidad y tiempos de retención exactos
independientemente del disolvente que se use.
Cromatografía de Líquidos de Ultra Alta Resolución (UPLC)

Se trata de una plataforma altamente probada en todo el mundo,

entregando rendimientos superiores hasta 9 veces más que un HPLC
convencional.