Práctica No.

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Separación de Carbohidratos por Cromatografía Ascendente en Papel

Objetivo:
Evaluar el efecto de la polaridad de la fase móvil en la separación de azúcares
reductores

Material a utilizar:
Papel Whatman # 1 (20 x 20 cm)
Capilares
Cámara cromatográfica (vaso de berzelius de 500 600 mL)
Probeta
Guantes de látex
Campana de extracción
Bomba de vacío
Regla
Lápiz
Tijeras

Reactivos

Butanol
Ácido acético
Soluciones de carbohidratos
Solución reveladora Anilina- Ftalato

Preparación de revelador para cromatografía de papel

Saturar en un embudo de separación 63 ml de butanol y 37 ml agua, después, ya que

se vaya a utilizar agregar 1.63 g de ácido ftálico más 1 ml de anilina.

Metodología:
1. Prepare 30 ml de la mezcla de solventes (Fase Móvil): Butanol-Agua-Ácido
acético en la proporción establecida por cada equipo de trabajo.
La proporción recomendada en para la separación de carbohidratos es:
Butanol:acético:agua en proporcion: 4:1:5.

Para los equipos 1 y 2 se usó la proporción Butanol:acético:agua, 4:1:5.

Para los equipos 3 y 4 se usó la proporción Butanol:acético:agua, 3:2:5.
Para los equipos 5 y 6 se usó la proporción Butanol:acético:agua, 5:1:4.
Para los equipos 7 y 8 se usó la proporción Butanol:acético:agua, 4:2:4.

2. Vaciar la mezcla de solventes en el vaso de berzelius y tapar por un periodo de

40 minutos hasta lograr la completa saturación.
3. Utilizando los guantes, marque el origen en el papel a 1 cm de la orilla y el
frente de solvente a 10 cm del origen.
4. Marcar 1 cm en el margen izquierdo y derecho y 1.5 cm entre muestras.
5. Colocar con un capilar diferente cada muestra y esperar a que seque en el
papel.

6. Enrollar y engrapar (sin empalmar) el cromatograma de las orillas.

7. Introducir el cromatograma en la cámara con el origen hacia la base y tapar.
8. Esperar el tiempo necesario para que el solvente alcance el frente del solvente.
9. Sacar el cromatograma y sin desengrapar, ponerlo a secar en la campana de
extracción
10. Desengrapar el cromatograma y revelar con anilina-ácido ftálico (preparar en el
momento y preparar con la formulación que contiene mayor cantidad de ácido
ftálico) con una atomizador a vacío.
11. Calentar en estufa a 100 grados centígrados durante 2 a 5 minutos.
12. Localizar las manchas y calcular los valores de Rf

Cuestionario Práctica Cromatografía de Papel

1. ¿Qué otro tipo de sustancias se pueden separar por cromatografía de papel?

2. ¿Qué papel desempeña la celulosa del papel en este sistema de cromatografía?
3. ¿Cuál es la fase móvil y cuál la fase estacionaria en esta cromatografía?
4. Defina bien el concepto de Rf y su utilidad
5. ¿Qué se puede hacer cuando, en un sistema de cromatografía, dos compuestos
no se pueden separar por tener idénticos Rfs?
6. ¿Qué fuerzas intervienen en la interacción de la Fase móvil estacionaria?
7. ¿Cuál es la constante dieléctrica de los solventes usados como fase móvil y
como le puede ayudar esto a interpretar sus resultados?
8. Mencione 5 solventes que pudieran usarse como fase móvil además de los
empleados
9. ¿De acuerdo con el revelado que compuesto resultó más polar y explique su
respuesta?
10. ¿Qué fase estacionaria usó y que otras fases podrían haberse usado?
11. Explique en que se basa el sistema de revelado empleado
12. ¿Qué otro sistema de revelado pudo haber empleado?