MÉTODOS DE CALIBRACIÓN

Y
CIFRAS DE MÉRITO
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

Las etapas que se deben seguir en un análisis mediante curvas de calibración son:

➢ Determinación del extremo superior del rango lineal

➢ Preparación de patrones
➢ Medición de la respuesta de los patrones
➢ Estimación de los parámetros de regresión
➢ Calculo de las cifras de mérito del método
➢ Predicción de muestras incógnita
CURVAS DE CALIBRACIÓN

DETERMINACIÓN DEL EXTREMO SUPERIOR DEL

RANGO LINEAL

La regresión lineal está basada en la suposición de

que los datos de respuesta analítica están linealmente
relacionados con la concentración del analito.

Se realiza un análisis exploratorio previo cuyo objetivo

es extender el rango de aplicabilidad de la técnica
analítica a la máxima concentración posible.

En el análisis exploratorio se incluyen patrones de

concentración conocida del analito desde cero hasta
valores que se desvíen visiblemente de la linealidad.
CURVAS DE CALIBRACIÓN

PREPARACIÓN DE PATRONES

Preparar patrones de concentración conocida dentro de dicho rango, e incluyendo el valor cero de
concentración del analito (blanco).

Usualmente, se preparan varios patrones (como mínimo cinco) con concentraciones igualmente
espaciadas entre cero y el extremo superior del rango lineal, y cada patrón se analiza por triplicado.

Las concentraciones de calibrado se deben conocer con la máxima precisión posible.

La recta de regresión se ajusta mediante ecuaciones que suponen que los valores del eje x
(concentraciones) tienen una incertidumbre considerablemente menor que los del eje y (respuestas).

Ejemplo:
Construir una curva de calibración de proteína que tenga seis puntos y que presente como
extremo superior del rango lineal una concentración de 25.0 µg/mL.
El estándar empleado para determinar proteínas es la albúmina de suero bovino (BSA).
CURVAS DE CALIBRACIÓN

MEDICIÓN DE LA RESPUESTA DE LOS PATRONES

Una vez preparados los patrones de concentración conocida, se miden sus respuestas analíticas,
incluyendo réplicas de cada medición.

Usualmente cada patrón se mide por triplicado.

Es importante establecer la siguiente nomenclatura: si se emplean 6 patrones, cada uno por

triplicado, entonces el número de niveles diferentes de concentración (p) es 6, y el número total de
puntos de la recta de calibrado (n) es 18.

Concentración de
Absorbancia de muestras independientes
proteína (µg/mL)
0 0,099 0,099 0,100 Datos del
5 0,185 0,187 0,188 espectrofotómetro para
10 0,282 0,272 0,272 construir la curva de
15 0,345 0,347 0,350 calibración
20 0,425 0,425 0,430
25 0,483 0,488 0,496
CURVAS DE CALIBRACIÓN

ESTIMACIÓN DE LOS PARÁMETROS DE REGRESIÓN

Pendiente Intercepto
𝑆𝑥𝑦 σ𝑛𝑖=1(𝑥𝑖 − 𝑥)(𝑦
ҧ 𝑖 − 𝑦)ത 𝑏 = 𝑦ത − 𝑚𝑥ҧ
𝑚= =
𝑆𝑥𝑥 σ𝑛𝑖=1(𝑥𝑖 − 𝑥)ҧ 2

Desviación estándar pendiente Desviación estándar intercepto

𝑆𝑦
𝑆𝑚 = 1 𝑥ҧ 2
𝑆𝑥𝑥 𝑆𝑏 = 𝑆𝑦 +
𝑛 𝑠𝑥𝑥

Desviación estándar residuos

σ𝑛𝑖=1(𝑦𝑖 − 𝑦ො𝑖 )2
𝑆𝑦 =
𝑛−2
 CIFRAS DE MÉRITO DEL MÉTODO

Las cifras de mérito de un método analítico se utilizan regularmente con el

propósito de calificar un determinado método y comparar sus propiedades
analíticas con las provistas por otras técnicas. Incluyen, entre otras, las
siguientes:

➢ Sensibilidad de calibración
➢ Sensibilidad analítica
➢ Límite de detección
➢ Límite de cuantificación
➢ Rango dinámico
➢ Rango lineal
 CIFRAS DE MÉRITO DEL MÉTODO

Sensibilidad de calibrado Sensibilidad analítica 𝑺𝒚/𝒙 : ruido instrumental

𝑆𝐸𝑁 = 𝑚 γ = 𝑆𝐸𝑁/𝑆𝑦/𝑥 σ𝑝𝑖=1 σ𝑟𝑗=1(𝑦𝑖𝑗 − 𝑦ത𝑖 )2

𝑆𝑦/𝑥 =
𝑛−𝑝

Límite de detección Límite de cuantificación

3 ∗ 𝑆𝐵 10 ∗ 𝑆𝐵
𝐿𝑂𝐷 = 𝐿𝑂𝑄 =
𝑚 𝑚
CIFRAS DE MÉRITO DEL MÉTODO

RANGO DINÁMICO Y RANGO LINEAL

Rango lineal

(𝑆𝑦 )2
𝐹𝐸𝑥𝑝 =
(𝑆𝑦/𝑥 )2

𝐹𝑇𝑎𝑏𝑙𝑎 = 𝐹α;𝑛−2;𝑛−𝑝

Si 𝐹𝐸𝑥𝑝 < 𝐹𝑇𝑎𝑏𝑙𝑎 , se

acepta que los datos se
comportan linealmente
 ADICIÓN ESTÁNDAR

El método de adición estándar consiste en añadir cantidades conocidas

de analito a la muestra problema, cuyo contenido de analito se quiere
determinar.

La adición de estándar es especialmente apropiada cuando la

composición de la muestra es desconocida o compleja y afecta a la
señal analítica.

Matriz: es todo lo que hay en la muestra problema, que no sea el

analito.

Efecto matriz: se define como el cambio que experimente una señal

analítica por todo lo que hay en la muestra excepto el analito.
 ADICIÓN ESTÁNDAR

Estándar [𝑆]𝑖

[𝑋]𝑓

[𝑆]𝑓
𝑉𝑠
[𝑆]𝑓 = 𝑆 𝑖
𝑉
[𝐼]𝑆+𝑋
[𝑋]𝑖 𝐼𝑥

[𝑋]𝑖 Concentración inicial desconocida del analito en 𝑉0

[𝑋]𝑓 = 𝑋 𝑖
una muestra 𝑉
[𝑋]𝑖 𝐼𝑥 𝐼𝑥 Señal del analito en la muestra
=
[𝑆]𝑓 +[𝑋]𝑓 𝐼𝑠+𝑥 [𝑋]𝑓 Concentración diluida de analito
[𝑆]𝑓 Concentración del estándar en la disolución final
[𝐼]𝑆+𝑋 Señal del analito y del estándar
 ADICIÓN ESTÁNDAR

El contenido de Na+ de un suero dio una señal de 4,27 mV en un análisis por emisión
atómica. A continuación se añadieron 5.00 mL de NaCl 2.08 M a 95.0 mL de suero. Este
suero enriquecido dio una señal de 7.98 mV. Hallar la concentración original de Na+ en el
suero.

[𝑁𝑎+ ]𝑖 4.27 𝑚𝑉
= [𝑁𝑎+ ]𝑖 = 0.113𝑀
0.104 𝑀 + 0.950[𝑁𝑎+ ]𝑖 7.98 𝑚𝑉
PROCEDIMIENTO GRÁFICO PARA LA ADICIÓN ESTÁNDAR
CUANDO EL VOLUMEN TOTAL NO VARÍA
 ESTÁNDAR INTERNO

Un estándar interno es una cantidad conocida de un compuesto, diferente del analito, que se añade
a la muestra problema.

La señal del analito se compara con la de los estándares internos y de este modo se determina el
analito presente en la muestra problema.

Los patrones internos son útiles cuando la cantidad de muestra analizada o la respuesta del
instrumento varía algo cada vez que se utiliza, por razones que son difíciles de controlar.

AX AS
=F F: factor de respuesta
[X] [S]
ESTÁNDAR INTERNO
 ESTÁNDAR INTERNO

Concentración Concentración
Área Área E. Área Analito /
Estándar Analito Estándar Interno
Analito Interno Área E. Interno
(mg/L) (mg/L)
1 0 10,0 350 903,7 0,0111
2 100 267,8 350 902,7 0,2967
3 200 467,4 350 904,5 0,5167
4 300 680,7 350 905,7 0,7516
5 400 920,9 350 901,3 1,0217
6 500 1150,2 350 890,1 1,2922
Muestra ? 543,5 350 900,5 0,6036