Refractómetria

Es una técnica analítica que consiste en la medida del índice de refracción de un

líquido con objeto de investigar su composición si se trata de una disolución o de
su pureza si es un compuesto único.

La refracción es la desviación que experimentan los rayos luminosos al pasar de

un medio transparente de densidad determinada a otro cuya densidad es distinta
de la del anterior. Si bien este fenómeno se presenta generalmente al paso de un
medio a otro, existe un caso en el que dicho paso no implica refracción, que es
cuando la incidencia se produce perpendicularmente a la superficie de separación
de ambos medios. La refracción es fundamental para la explicación de los
procesos que experimenta la luz en prismas y lentes de todo tipo. Mientras que la
luz se propaga con velocidades diferentes dependiendo de la densidad del medio
por el que lo hace (cuanto mayor es la densidad de éste tanto más lenta es la
propagación de la luz), la intensidad del fenómeno de la refracción depende del
grado de la variación de la velocidad de propagación (cuanto mayor es éste tanto
mayor es la refracción que experimenta el rayo y en consecuencia tanto mayor es
el poder de refracción del medio).

Su principio se basa en un rayo de luz que pasa oblicuamente desde un medio

hacia otro de diferente densidad, cambia su dirección cuando traspasa la
superficie. Este cambio en la dirección se denomina refracción. Cuando el
segundo medio es más denso que el primero,el rayo se aproxima a la
perpendicular trazada sobre la superficie divisoria en el punto de incidencia. La
causa fundamental de este cambio en la dirección se debe al cambio en la
velocidad de la luz que se hace más lenta cuanto más denso sea el medio por el
que pasa el haz. La luz amarilla de la lámpara de sodio disminuye su velocidad
desde 3x1010 cm/s en el vacío hasta 2,25x1010 cm/s en el agua.

El ángulo formado entre el rayo en el primer medio y la perpendicular se llama

ángulo de incidencia, i, mientras que el correspondiente ángulo en el segundo
medio se denomina ángulo de refracción, r. El índice de refracción, n, es la razón
entre las velocidades de la luz en ambos medios. La ley de Snell representa a este
índice como la razón de los senos de los ángulos de incidencia y refracción.

Polarimetría
La polarimetría es una técnica que se basa en la medición de la rotación óptica
producida sobre un haz de luz polarizada al pasar por una sustancia ópticamente
activa. La actividad óptica rotatoria de una sustancia, tiene su origen en la
asimetría estructural de las moléculas.
Principio de la polarimetría
La luz polarizada es aquella que ha pasado a través de un polizador que forza
ondas de luz aleatorias hacia un plano. Cuando esta luz polarizada en un plano
pasa a través de una sustancia ópticamente activa (por ejem. Una solución de una
sustancia química ópticamente activa, el plano de polarización se gira en una
cantidad que es característica de la sustancia examinada. Los polarímetros
detectan la posición del plano y la comparan con su posición original siendo la
diferencia la rotación, que se expresa normalmente en grados angulares (A).

Equipos polarimetricos
En ellos se coloca un tubo de muestra que contiene el liquido (solución)
examinado entre dos elementos polarizantes (tirapolaroide o cristal de calcita). El
primer elemento, el polarizador, polariza la luz antes de que se pase a través de la
muestra el segundo elemento, el analizador, puede girarse para contrarrestar
cualquier rotación por la muestra y por tanto, localiza la posición angular resultante
del plano de luz y por lo tanto, la cantidad de rotación causada por la muestra.

Componentes básicos del polarímetro:

 Una fuente de radiación monocromática
 Un prisma que actúa de polarizador de la radiación utilizada
 Un tubo para la muestra
 Un prisma analizador
 Un detector (que puede ser el ojo o un detector fotoeléctrico)

La polarización de la luz es un fenómeno que puede producirse en las ondas que

emite la luz, por el cual un haz de luz oscila sólo en un plano determinado,
denominado plano de polarización. Este plano puede definirse por dos vectores,
uno de ellos paralelo a la dirección de propagación de la onda y otro perpendicular
a esa misma dirección el cual indica la dirección del campo eléctrico.

espectrometría
La espectrometría de masas es una técnica de análisis que permite determinar la
distribución de las moléculas de una sustancia en función de su masa. El
espectrómetro de masas es un dispositivo que permite analizar con gran precisión
la composición de diferentes elementos químicos e isótopos atómicos, separando
los núcleos atómicos en función de su relación entre masa y carga (m/q). Puede
utilizarse para identificar los diferentes elementos químicos que forman un
compuesto, o para determinar el contenido isotópico de diferentes elementos en
un mismo compuesto. Con frecuencia se encuentra como detector de un
cromatógrafo de gases, en una técnica híbrida conocida por sus iniciales en
inglés, GC-MS.
El espectrómetro de masas mide razones masa/carga de iones, calentando un haz
de material del compuesto a analizar hasta vaporizarlo e ionizar los diferentes
átomos. El haz de iones produce un patrón específico en el detector, que permite
analizar el compuesto. En la industria es una técnica altamente utilizada en el
análisis elemental de semiconductores, biosensores, cadenas poliméricas
complejas, fármacos, productos de síntesis química, análisis forense,
contaminación medioambiental, perfumes y todo tipo de analitos que sean
susceptibles de pasar a fase vapor e ionizarse sin descomponerse.

Cromatografía.
Se refiere a una técnica empleada para la separación de los componentes de una
mezcla por medios físicos, para aislar cada uno de estos y proceder a su
identificación y cuantificación.

Se fundamenta en hacer pasar la mezcla a través de un lecho o fase fija

semipermeable, cada componente dependiendo de su naturaleza y de la afinidad
que tengan con la fase fija, se desplazaran con mayor o menor velocidad a través
de esta, por lo cual a cada componente de la mezcla inicial le corresponderá un
tiempo específico atravesarla, a estos tiempos se les conoce como tiempos de
retención.

Debido a este diferencial en las velocidades de desplazamiento, pueden separarse

los compuestos constitutivos de una mezcla si se hacen pasar por una fase fija lo
suficientemente larga, obteniéndose primeramente los compuestos que ofrecen
menos resistencia al desplazamiento, así sucesivamente hasta llegar al que ofrece
mayor resistencia a fluir en la fase fija seleccionada para la realización del ensayo.

Esta técnica aparte de ser utilizada analíticamente, puede ser empleada en la

purificación de algunas sustancias, debido a esto tiene múltiples usos en la
química, biología y en el área de farmacología. La cromatografía se clasifica en
varios tipos dependiendo su método de aplicación.
Tipos de cromatografía.
 Cromatografía líquida.
 Cromatografía plana (En papel y de capa fina).
 Cromatografía de fluidos supercríticos.
 Cromatografía de gases.
TÉCNICAS DE CROMATOGRAFÍA
Como ya hemos visto, se fundamentan en el transporte de la mezcla problema a
través de una fase estacionaria (sólida o líquida) mediante una fase
móvil (líquida o gaseosa). La fase móvil fluye sobre, o a través de, la fase
estacionaria.
Existen diversas formas de llevar a cabo un proceso cromatográfico. Dependerá
de cómo se introduce la muestra a separar y cómo se desplaza por la fase
estacionaria. Los métodos más comunes son:

 Desarrollo
 Elución
 Desplazamiento
 Análisis frontal
El método más utilizado es el de elución. Consiste en colocar la muestra en una
capa delgada, en la parte superior de la columna, lecho cromatográfico o fase
estacionaria. La fase móvil fluye a través de la fase estacionaria arrastrando los
componentes de la muestra. La velocidad de movimiento diferirá de un
componente a otro y permitirá la recogida de los componentes en momentos
distintos, tal y como se muestra en el video que hemos visto.
CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE CROMATOGRAFÍA O TÉCNICAS
CROMATOGRÁFICAS
Las técnicas de cromatografía se pueden clasificar de diferentes modos. De
hecho, según las fuentes que consultemos, encontraremos clasificaciones que no
se encuentran en todos los sitios. Vamos a ver algunas de ellas:

Técnicas de Cromatografía según la disposición de la fase estacionaria

 Cromatografía plana: La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana
o un papel. Según la naturaleza de la fase estacionaria se clasifican en:
 Técnica de Cromatografía en papel.
 Técnica de Cromatografía en capa fina.
 Cromatografía en columna: La fase estacionaría se sitúa dentro de una
columna. Según la naturaleza de la fase móvil se clasifican en:
 Técnica de Cromatografía de líquidos.
 T. de Cromatografía de gases.
 T. de Cromatografía de fluídos supercríticos.
Técnicas de Cromatografía según la naturaleza de la fase estacionaria
 Fase estacionaria sólida: Cromatografía de adsorción.
 Fase estacionaria líquida: Cromatografía de partición o de reparto.
Técnicas de Cromatografía según el método de separación
 T. Cromatografía de adsorción.
 Cromatografía de reparto.
 T. Cromatografía de intercambio iónico.
 T. Cromatografía de exclusión.
 Cromatografía de afinidad.
PRE TRATAMIENTOS DE LAS MUESTRAS PARA ANALIZARSE POR
LAS TÉCNICAS ESPECTROMÉTRICAS
RECOLECCION DE LA MUESTRA
El muestreo es una etapa muy crítica del proceso de análisis debido a
que los errores que se cometen en esta etapa pueden comprometer
seriamente los resultados obtenidos posteriormente mediante métodos
analíticos sofisticados. A menudo los alimentos no son homogéneos, por
lo tanto, el tamaño de la muestra debe escogerse cuidadosamente a fin
de obtener una muestra representativa.
Se deben tomar precauciones para evitar la contaminación durante el muestreo. El
material complementario al muestreo (como por ejemplo, cuchillos, cucharas, etc.)
deberá ser de material inerte como titanio, teflón o polietileno.

PRETRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Si el contenido mineral y de elementos traza de las muestras se va a expresar sólo
en base a alimento fresco, es necesario una homogeneización o molienda. Para
obtener datos sobre base seca o para preservar la muestra para su
almacenamiento, se requiere una preparación posterior como por ejemplo secar
en estufa o liofilizar.

Homogeneización
La homogeneización húmeda en una bolsa plástica cerrada utilizando una
licuadora de laboratorio del tipo Stomacher se usa frecuentemente para
homogeneizar muestras de alimentos frescos. Una de las principales ventajas de
esta técnica consiste en el hecho que no existe un contacto directo entre la
muestra y el equipo. Esto elimina el riesgo de contaminación y no existe necesidad
de limpiar las partes de la máquina. Una alternativa menos costosa son los
mezcladores de laboratorio con hojas de titanio o mezcladores casetos (por
ejemplo una moledora de café). Estos son más difíciles de limpiar y aumenta el
riesgo de contaminación con Fe, Cr y Ni si se utilizan hojas de acero inoxidable