PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

I. OBJETIVOS
- Someter a una concentración letal media a una población de daphnias Magna
y evaluar los efectos del toxico.
II. INTRODUCCION
La determinación de concentraciones de contaminantes y tóxicos no indica los
efectos de su presencia en el ambiente. Por este motivo los efectos se evalúan a
través de pruebas de toxicidad. Estas pueden ser de tipo agudo (letal), en las que
se observa la mortalidad, utilizándose como parámetro comparativo la
concentración letal media (CL50), que es aquella en la que muere la mitad de los
organismos sometidos a la prueba. Otras son de tipo crónico (subletal), y en ellas
se evalúan respuestas fisiológicas e incluso moleculares, a través de
biomarcadores. Las pruebas se realizan con tóxicos aislados o con muestras
ambientales, utilizando especies de cultivos controlados o nativas del sitio. Son
comunes los estudios en invertebrados (Daphnia magna, Moina macrocopa,
Artemia salina), vertebrados (peces, ratas), especies vegetales (Lemna gibba), e
incluso bacterias (Salmonella tiphymuriun y Phytobacterium phosphoreum).
Algunos bioensayos están normados y se usan para la determinación de
condiciones especiales de descarga, tal es el caso de la Norma Mexicana NMX-
AA-087-SCFI-2010, siguiendo un protocolo semejante al que se aplicará en esta
práctica

Fig. 1. Vista microscópica

“Daphnia magna”

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Fig. 2. Vista microscópica “Artemia salina”

III. MATERIALES Y METODOS

 Solución estándar de sulfato de cobre (1g/L)
 1 vaso de precipitado de 1000 mL
 1 vaso de precipitado de 500 mL
 1 probeta de 100 mL
 12 vasos de precipitado de 50 o 100 mL
 3 pipetas Pasteur con bulbo
 3 cajas de Petri de 5cm
 2 pipetas de 5 mL
 2 matraces aforados de 100 mL
 Organismos de prueba. Neonatos de Daphnia magna de 48 horas de edad

- Se trabajo con 1000ppm de sulfato de cobre diluido en 250ml de agua

destilada.
- Se calculo el volumen de la solución preparada a utilizarse para cada prueba
diferente con concentraciones de 10ppm,40ppm,60ppm y 100ppm. Siendo
estas de 0.93ml,3.72ml,5.58ml,9.3ml. respectivamente.

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- Una vez calculados los volúmenes se le agregaron poblaciones de 10

daphnias a cada vaso precipitado.
- Se evaluó la tasa de mortandad de las poblaciones a las 24hrs. Y 48 hrs.

CONCENTRACION TIEMPO DE EXPOSICION

DEL TOXICO 24HRS 48HRS
10PPM 10 -
40PPM 10 -
60PPM 10 -
100PPM 10 -

Tabla 1. Registro de la mortalidad del bioensayo

IV. RESULTADOS
Se registró la muerte total de las poblaciones en las 4 pruebas realizadas dentro
de las 24 hrs.

MORTALIDAD A LAS 24HRS.

12

10

8
N° Especies

0
10PPM 40PPM 60PPM 100PPM
Concentración de sulfato de cobre

V. CONCLUSIONES
- Se valoró la Concentración Letal Media (CL50) en Pulgas de agua (Daphnia
Magna) expuestos en soluciones de Sulfato de Cobre y se determinó la media
de las dosis suministradas, fluctuó en 100 mg/l de CuSO4.

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- . La prueba de toxicidad las pulgas de agua que se expusieron a las

soluciones de sulfato de cobre, mostraron coloración blanquecina en la piel
también disminuyeron sus movimientos comparados a los del principio.
- Una de las razones por la cual D. magna es tan utilizada como bioindicador
ambiental radica en su tipo de reproducción, que presenta dos fases, sexual
y asexual. Si encuentra condiciones favorables mantiene la fase asexual
conocida como partenogénesis, lo que nos permitiría trabajar con
poblaciones genéticamente uniformes. De los 26 individuos recolectados
sólo sobrevivieron y se desarrollaron aquellos que podían mantener una
reproducción partenogénica bajo las condiciones dadas.

VI. CUESTIONARIO

1. ¿QUÉ CRITERIOS SE APLICAN PARA SELECCIONAR UNA ESPECIE PARA

BIOENSAYOS?
Que existan antecedentes realizados con el mismo fin que se requiere. El uso
de los bioensayos como indicadores del grado de afectación de una sustancia
química en organismos vivos, ha sido manejado bajo condiciones controladas
de laboratorio desde hace mucho tiempo; se ha trabajado con éxito en varios
países latinoamericanos (Colombia, Chile, Argentina, Cuba y otros),
especialmente utilizando cebolla de bulbo (Allium cepa), lechuga (Lactuca
sativa), pulga de agua (Daphnia magna), algas (Hidra attenuata), arroz (Oriza
sativa), repollito de agua (Pistia stratiotes), larva y adultos de Aedes aegypty,
entre las principales.

2. ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA DE LOS GRUPOS CONTROL EN LOS

BIOENSAYOS?
Estos grupos muestran las condiciones originales o iniciales del medio a
evaluarse y como estos organismo se desenvuelven frente a tal realidad, se
usan para ser comparadas y evaluar las variaciones que surgen.

3. ¿QUÉ ES LA CONCENTRACIÓN EFECTIVA MEDIA Ó CE50?

: Concentración del agente tóxico que causa efecto agudo (por ejemplo
inmovilidad) al 50% de los organismos de prueba en un determinado período
de exposición.

4 . ¿LOS RESULTADOS DE LOS BIOENSAYOS PERMITEN INTERPRETAR

DIRECTAMENTE EL EFECTO DE LOS TÓXICOS EVALUADOS EN EL AMBIENTE?
Si existen pruebas previas de caracterización fisicoquímica y biológica del
medio a evaluarse se puede establecer una relación entre la existencia del
organismo y la composición del medio natural.

5. SI EL TÓXICO DE PRUEBA ES K2CR2O7, ¿CÓMO PREPARARÍA UNA

SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE 0.25 PPM DE CR?

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VII. BIBLIOGRAFIA

- Diario Oficial de la Federación. 1996. Norma Oficial Mexicana NOM-

001-SEMARNAT-1996, Que establece los Límites Máximos
- Permisibles de contaminantes en las Descargas de aguas residuales
en aguas y bienes nacionales. DOF, México.
- Diario Oficial de la Federación. 2002. Norma Oficial Mexicana NOM-
087-ECOL-SSA1-2002. Protección ambiental - Salud ambiental
- Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y
especificaciones de manejo. DOF, México.
- Diario Oficial de la Federación. 2010. Norma Mexicana NMX-AA-087-
SCFI-2010. Análisis de agua - Evaluación de toxicidad
- aguda con Daphnia magna, Straus (Crustacea - Cladocera) - Método
de prueba. DOF, México.
- Moreno, D.F. 2003. Toxicología Ambiental. Mc Graw Hill, México.
Ramírez, R.P. & C.A. Mendoza. 2008. Ensayos toxicológicos para la
evaluación de sustancias químicas en agua y suelo. La experiencia
en México. Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales.
Instituto Nacional de Ecología, México.
- Montaje y Puesta en marcha de un Laboratorio de Bioensayos para
evaluarla toxicidad de las aguas a nivel local. Municipalidad de
Pudahuel -Santiago -Chile. [Sitio de Internet]. 2001. [Citado el 26 de
octubre de 2001 ].[6p].Disponible en http: nmatus@hotmail.com

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ANEXOS

Anexo 1. Concentraciones evaluadas

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Anexo 2. Resultados a las 24hrs.

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